陜西部分規模化豬場仔豬病毒性腹瀉感染情況調查

尹寶英, 張 浩，張文娟

(1.咸陽職業技術學院 畜牧獸醫研究所，咸陽市動物疫病分子生物學診斷技術研究重點實驗室，陜西 咸陽 712000；2.陜西正大有限公司，陜西 咸陽 712000)

豬病毒性腹瀉病是由一種或一種以上病毒感染豬只所引發的以腹瀉為主的消化道功能障礙性疾病。國內研究報道顯示2010年后引起仔豬腹瀉致死的主要病毒是豬流行性腹瀉病毒(porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV)，該病毒臨床上常與豬傳染性胃腸炎病毒(transmissiblegastroenteritisvirus，TGEV) 和豬輪狀病毒(porcinerotavirus，PRV)呈混合感染。主要臨床癥狀表現為嘔吐、腹瀉、脫水甚至死亡，嚴重影響仔豬的健康發展。貴州、安徽省、河北省等規模化豬場的進行可疑病原檢測結果顯示PEDV感染仔豬最為嚴重，感性強，致死率高，陽性率高達為63.54%，存在與TGEV和PRV混合感染情況[1～6]。因此，筆者研究對2018年期間陜西部分規模化豬場送檢的162例患有腹瀉的仔豬病料進行病原檢測，分析PEDV、TGEV與PRV三種病毒性腹瀉在陜西的流行狀況，以期為該類疾病的防控提供資料依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料來源 病料源自2018年陜西地區部分規模化養豬場的仔豬的腸道組織、內容物及糞便，共計162份。發病仔豬臨床呈現嘔吐，腹瀉，脫水甚至死亡。病理剖檢可見小腸擴張，腸腔內充滿黃色液體，腸系膜淋巴結水腫，腸系膜充血。

1.1.2 主要試劑 病毒 RNA/DNA提取試劑盒、總RNA提取液、AMV 反轉錄酶、rTaq DNA 聚合酶、dNTP、Oligo( dT) 、RNA酶抑制劑、DNA Marker DL 2000購自寶生物工程( 大連) 有限公司。

1.1.3 引物設計 根據GenBank序列使用 Premier 5.0 生物軟件設計PEDV、TGEV、PRV基因特異性引物序，引物合成由生工生物工程(上海)有限公司完成，詳情見表1。

表1 PCR引物序列

1.2 方法

組織及排泄物中RNA提取按試劑盒提供的操作手冊，以總 RNA為模板進行 RT-PCR擴增。PCR反應條件如下：45 ℃ 30 min，94 ℃預變性 5 min；94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸40 s，循環35次；72 ℃延伸10 min。RT-PCR產物經電泳分離，在凝膠成像系統下成像拍照，記錄結果。

2 結果

2.1 PEDV、TGEV和PRV感染情況統計

對全年送檢的162例腹瀉仔豬檢測結果進行數據統計，病毒性腹瀉病例共74例，占仔豬腹瀉送檢樣的45.68%。其中PEDV的陽性檢出率最高，達16.04%，TGEV和PRV的檢出率分別為10.49%和9.87%(表2)。

表2 PEDV、TGEV和PRV陽性檢出率

2.2 不同日齡腹瀉仔豬病毒的感染情況統計

仔豬日齡不同，PEDV、TGEV和PRV的陽性檢出率也不同(表3)。1～5日齡仔豬，PEDV、TGEV的陽性率在1-10日齡發病仔豬中檢出率最高，達70.26%、64%，而PRV的檢出率在10日齡后上升尤其是斷奶后高達35.71%。

表3 不同日齡PEDV、TGEV和PRV陽性檢出率

2.3 PEDV、TGEV 和PRV 感染的季節性分布

PEDV、TGEV和PRV全年均被檢出，其中冬季陽性檢出率最高，分別達到35.13%、36%和39.29%，夏季發病率最低( 表4) 。

表4 各季節仔豬腹瀉病毒檢出率統計結果

3 討論

近年研究發現，PEDV、TGEV和PRV是我國豬病毒性腹瀉的主要病原。筆者研究對2018年陜西部分規模化豬場送檢的疑似患有病毒性腹瀉的樣品進行病原檢測。與趙志敏對2015-2016年陜西省腹瀉病料中PEDV和TGEV的檢出率40.33%、9.97%[7]而言，筆者研究檢測數據統計顯示2018年PEDV、TGEV、PRV的陽性檢出率依次為16.04%、10.49% 和9.87%。其中PEDV的檢出率出現明顯降低，可見PEDV的流行有所控制，這也與我國整體養殖業疫病防控的重視度加大有絕對的關系。

筆者研究結果表明，仔豬日齡不同，PEDV、TGEV和PRV的檢出率也不同。PEDV、TGEV的陽性率在1～10日齡發病仔豬中檢出率最高，達70.269%、64%，而PRV的檢出率在10日齡后上升尤其是斷奶后，可達35.71%。這與新生仔豬抵抗力較低，和缺乏相應抗體有關。另外，PEDV、TGEV和PRV三種病毒在不同季節均有檢出，但不同季度差異較大，在寒冷的冬春兩季明顯高于夏、秋季節，這一結果符合這三種病毒的季節性流行特點。尤其是PEDV在冬季有高達35.13%的檢出率。這與低溫對于PEDV的變異、感染力增強有關[8]。所以在氣溫較低的冬春季加強哺乳仔豬的溫濕度等飼養管理至關重要。

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[4] 徐懷英,劉星麗,秦卓明. 雞滑液支原體病的防控應引起高度重視[J].家禽科學,2019(04):9-14.

[5] 朱小甫,吳旭錦,高睿,等. I群禽腺病毒通用nPCR檢測方法的建立與應用[J].中國動物傳染病學報,2018,http://kns.cnki.net/kcms/detail/31.2031.5.20180914.1551.006.html.

[6] 朱小甫,吳旭錦.利用M基因鑒別新城疫病毒中強毒株與弱毒株RT-nPCR方法的建立[J].中國動物傳染病學報,2017,25(05): 21-25.

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