高效液相色譜-串聯質譜檢測水稻中氯吡嘧磺隆殘留量

張愛娟，馬新剛，梁 林，馮義志，潘金菊，齊曉雪，韓濟峰，左伯軍

(山東省農藥科學研究院 山東省化學農藥重點實驗室，山東 濟南 250033)

氯吡嘧磺隆(Halosulfuron-methyl，圖1)化學名稱：3-(4，6-二甲氧基嘧啶-2-基)-1-(1-甲基-3-氯-4-甲氧基甲酰吡唑-5-基)磺酰脲，主要用于防除闊葉雜草和莎草科雜草的新型磺酰脲類除草劑。其作用機理為通過抑制植物的乙酰乳酸合成酶，阻止支鏈氨基酸等生物合成，最終破壞蛋白質的合成，干擾DNA的合成及細胞的分裂和生長[1-2]。

目前，對氯吡嘧磺隆的殘留分析報道較少，李軍等[3]采用高效液相色譜建立了糧谷中四唑嘧磺隆、啶嘧磺隆和氯吡嘧磺隆殘留的檢測方法；鐘紅艦等[4]利用超高效液相色譜-質譜法對氯吡嘧磺隆在玉米和土壤中的殘留分析方法進行了研究。楊志富等[5]應用高效液相色譜法對氯吡嘧磺隆在甘蔗和土壤中的殘留規律進行了研究；但未見在水稻中殘留分析方法的研究。

本文采用高效液相色譜質譜法，參考QuEChERS方法建立了氯吡嘧磺隆在水稻中殘留量分析方法，前處理方法簡便，定量快速、準確，重現性好，可為開展氯吡嘧磺隆在水稻上的風險評估及其安全使用研究提供檢測依據。

1 材料與方法

1.1 材料 高效液相色譜質譜聯用儀(Agilent 1290Ⅱ-6460)；九陽料理機(JYL-C020E)；多管渦旋混合儀(MTV-100)；電子天平(JA21002)；臺式通風離心機(Sorvall ST16)。

氯化鈉(分析純)；乙腈(色譜純；分析純)；甲酸(色譜純)；C18填料(為40～60μm)、N-丙基乙二胺吸附劑(PSA)和石墨化碳黑(GCB)；氯吡嘧磺隆標準品(純度為97.0%)。

標準溶液配制：準確稱取0.027 6g氯吡嘧磺隆標準品至25mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，配得質量濃度1 071mg/L的標準儲備溶液，置于4℃冰箱中保存，使用時再用乙腈稀釋成氯吡嘧磺隆(100mg/L)的標準溶液。

1.2 糙米、稻殼和秸稈前處理方法 準確稱取用食品調理儀粉碎的樣品(糙米10.0g、稻殼和秸稈2.0g)于50mL具塞離心管中，加入10mL超純水和10mL乙腈，渦旋5min，加入4g氯化鈉，劇烈振蕩1min，4 000r/min離心5min。取1mL上層清液至裝有50mgC18填料的2mL離心管中，渦旋1min，上清液過0.22μm微孔濾膜，待測。

1.3 色譜條件 色譜柱：Eclipse PlusC18RRHD(50mm×2.1mm，1.8μm)，柱溫：室溫；流動相：0.1%甲酸水溶液+乙腈=30+70(v/v)，流速：0.4mL/min，毛細管電壓：4kV，干燥氣溫度：300℃，干燥氣流量：11L/min，霧化氣壓力：15psi，反應氣：N2，采集方式：多反應監測模式，在分析過程中，以保留時間和離子對(母離子和2個子離子)信息比較進行定性分析，以母離子和響應最高的子離子進行定量分析(表1)。

表1 氯吡嘧磺隆質譜條件

1.4 標準曲線制作 將氯吡嘧磺隆(100mg/L)的標準溶液，用乙腈稀釋配成2、0.5、0.1、0.05、0.01mg/L標準溶液，在1.3節色譜條件下進行測定。每個質量濃度重復3次，以標準工作溶液的質量濃度對應各組分色譜峰面積作圖。

1.5 添加回收率測定 在空白糙米中按照0.01、0.05、0.5mg/kg，在空白稻殼和秸稈中按照0.05、0.5、5mg/kg添加氯吡嘧磺隆標準品每個濃度5次平行，測定回收率及相對標準偏差。

2 結果與分析

2.1 氯吡嘧磺隆儀器條件的確定 電噴霧電離(ESI)方式對5mg/L氯吡嘧磺隆標準溶液進行全掃描(m/z100～500)，在正離子采集模式下獲得其[M+1]峰(m/z434.8)，在負離子采集模式下獲得其[M-1]峰(m/z433.0)。正離子模式較負離子模式響應高，選用434.8為母離子，試驗中對碰撞電壓等參數進行了詳細研究，發現30ev時m/z182.00響應高，40ev時m/z139.0響應高，確定定量離子對m/z434.8/182.0和定性離子對m/z434.8/139.0。

2.2 凈化劑的選擇 取0.1mg/L氯吡嘧磺隆標樣溶液1mL，置于裝有PSA、C18、GCB的2mL離心管中，渦旋1min。靜置后，取上清液過0.22μm有機濾膜，檢測。結果顯示，PSA和GCB均對氯吡嘧磺隆表現出明顯的吸附作用，而C18吸附不明顯。選用C18為凈化劑，回收率和相對標準偏差均能得到滿意的結果。該方法操作簡單、省時，適用于大批量水稻樣品的檢測。

2.3 基質效應 LC-MS/MS分析時的基質效應是客觀存在的。本試驗采用溶劑標樣與基質標樣的相對響應值法判斷基質效應。通過優化流動相的比例和流速發現當流速為0.4mL/min，乙腈和0.1%的甲酸水溶液的比例為70和30的條件下，糙米、稻殼和秸稈無明顯基質效應，且該條件下有效成分與雜質能得到很好的分離，峰型對稱，基線平穩。

2.4 方法線性關系 在0.01～2mg/L范圍內，氯吡嘧磺隆在乙腈溶液中定量離子峰面積與進樣質量濃度間呈良好的線性關系，y=27 253x+423相關系數(r)為0.999 7。

2.5 氯吡嘧磺隆在水稻基質中添加回收率和精密度 在空白糙米中按照0.01、0.05、0.5mg/kg，在空白稻殼和秸稈中按照0.05、0.5、5mg/kg添加氯吡嘧磺隆標準品，每個濃度5次平行，測定回收率及相對標準偏差。結果表明(表2)：在0.01～0.5mg/kg添加水平范圍內，氯吡嘧磺隆在糙米中添加回收率為90%～102%，相對標準偏差為2%～4%。在0.05～5mg/kg添加水平范圍內，氯吡嘧磺隆在稻殼中添加回收率為75%～87%，相對標準偏差為2%～5%，氯吡嘧磺隆在秸稈中添加回收率為79%～90%，相對標準偏差為1%～4%，符合農藥殘留分析要求。目標峰無雜質干擾，峰型好典型譜圖(圖2)。

表2 氯吡嘧磺隆在糙米、稻殼和秸稈中的添加回收率及相對標準偏差

3 結論

本研究參考QuEChERS前處理方法，建立了HPLC-MS/MS檢測糙米、稻殼和秸稈樣品中氯吡嘧磺隆殘留量的分析方法。該方法簡單快速、準確可靠，可滿足農藥殘留分析要求，適用于大量樣品的檢測，也可為其他農產品及食品中氯吡嘧磺隆的殘留檢測提供參考依據。