超高效液相色譜-串聯質譜法測定肟菌酯和戊唑醇在稻田中的殘留

郭明程，鄭尊濤，聶東興，湯 濤

(1.農業農村部農藥檢定所，北京 100125；2.浙江省農業科學院農產品質量標準研究所，浙江 杭州 310021)

肟菌酯(trifloxystrobin)化學名稱為甲基(E)-甲氧基亞胺基-{(E)-α-[α，α，α-三氟-m-甲苯基)-亞乙基氨基氧基]-鄰甲苯基}乙酸甲酯，是甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，為線粒體呼吸抑制劑，通過阻止細胞色素bc1 Qo位點的電子傳遞來抑制線粒體的呼吸作用，主要用于水稻、玉米、谷物、棉花、大豆、油菜、甜菜等作物，有效防治子囊菌、擔子菌、半知菌和卵菌綱病害[1]。戊唑醇(tebuconazole)化學名稱為(RS)-1-(4-氯苯基)-4，4-二甲基-3-(1H-1，2，4三唑-1-基甲基)戊-3-醇，是三唑類殺菌劑，通過抑制真菌的麥角甾醇的生物合成，主要用于水稻、小麥、花生、蔬菜、蘋果、梨、香蕉以及玉米高粱等作物，有效防治白粉菌屬、殼針孢屬菌、柄銹菌屬、喙孢屬和核腔菌屬等引起的病害[2]。

目前單獨測定肟菌酯和戊唑醇的殘留檢測方法有液相色譜法[3]、氣相色譜法[4-5]、氣相色譜-串聯質譜法[6-7]，同時測定戊唑醇、肟菌酯的分析方法有氣相色譜法[8]、液相色譜-串聯質譜法[9-10]。本文建立了超高效液相色譜-串聯質譜法測定糙米、谷殼、植株、土壤和稻田水中肟菌酯和戊唑醇殘留的分析方法，方法簡便、快速，準確度和精密度高，適用于水稻、土壤和稻田水樣品中肟菌酯和戊唑醇的殘留檢測。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 UPLC-XEVO TQ/MS超高效液相色譜-串聯質譜聯用儀；SPS402F 電子天平(精確至0.01g)；AB135-S電子天平(精確至0.1mg)；TYZD-IIA振蕩器；VTX-3000L渦旋儀；R-210旋轉蒸發儀及V-700真空泵。

肟菌酯(99.5%)標準品和戊唑醇(98%)標準品；甲醇、乙腈(色譜純)；丙酮、氯化鈉、石油醚(分析純)；弗羅里硅土(650℃烘4h，加5%水脫活)；甲酸(色譜純)；實驗用水均為經Milli-Q超純水器純化的超純水。

1.2 樣品前處理

1.2.1 提取 土壤、糙米：稱取10g樣品，加入5mL水和40mL乙腈，振蕩30min，抽濾，濾液轉入有NaCl的具塞量筒中，劇烈振揺，靜置分層，再取出10mL乙腈于40℃濃縮干，待過柱。

谷殼、植株：稱取5g樣品，加入5mL水和40mL乙腈，振蕩30min，抽濾，濾液轉入有NaCl具塞量筒中，劇烈振揺，靜置分層，再取出10mL乙腈于40℃濃縮干，待過柱。

田水：取10mL轉入有NaCl具塞量筒，加入40mL乙腈，靜置分層，取10mL乙腈于40℃濃縮干，待過柱。

1.2.2 凈化 殘渣用丙酮+石油醚=5+95，15mL超聲溶解過弗羅里硅土填充柱(5%脫活)，再用丙酮+石油醚=15+85，30mL洗脫并收集，收集液40℃濃縮干，用50%乙腈水5mL定容過0.22μm膜后待進樣。

1.3 儀器檢測條件

1.3.1 色譜條件 色譜柱：waters acquity UPLCTM BEH C18(1.7μm，2.1×50mm)；柱溫：40℃；進樣量：1.0uL；流動相：乙腈-0.1%甲酸水；肟菌酯保留時間：約2.08min；戊唑醇保留時間：約1.66min；流速為0.20mL/min，采用梯度洗脫，洗脫條件(表1)。

表1 液相色譜梯度洗脫條件

1.3.2 質譜儀器條件 離子源：電噴霧電離(ESI+)；毛細管電壓：3.0kV；一級錐孔電壓：22V；脫溶劑溫度：400℃；脫溶劑氣流量：800L/h；肟菌酯定性定量離子對：m/z409(145*，186)，戊唑醇定性定量離子對：m/z308(125*，70.1)。

1.4 標準曲線制作 準確配制200mg/L肟菌酯和戊唑醇母液。將母液再分別稀釋為0.001、0.002、0.004、0.008、0.016、0.032mg/L的系列濃度標準工作溶液，在上述液相色譜/質譜條件下進行測定，分別以肟菌酯和戊唑醇標準溶液濃度與監測離子峰面積作標準曲線。

1.5 添加回收率測定 分別在空白基質中分別添加3檔濃度(0.02、0.20和2.0mg/kg)的戊唑醇和肟菌酯標準溶液，每檔濃度重復5次，用上述分析方法測定回收率及相對標準偏差。

2 結果與分析

2.1 母離子和子離子的選擇 使用1.0mg/L的肟菌酯和戊唑醇標準溶液，采用蠕動泵進樣，流動相組成為乙腈和水(50/50，V/V)，流速0.2mL/min，進樣體積1μL，分別用電噴霧電離正離子模式(ESI+)和電噴霧電離負離子模式(ESI-)進行母離子全掃描，掃描范圍m/z為50～500。結果表明：在正離子模式下(ESI+)，肟菌酯和戊唑醇電離效果最佳，信號強度高于負離子模式，分別獲得m/z409和m/z308的[M+H]+準分子離子峰。對肟菌酯和戊唑醇的[M+H]+分別進行二級質譜掃描得到碎片離子，碎片離子m/z145和m/z125的響應值較高，因此分別選擇m/z145和m/z125作為肟菌酯和戊唑醇的定量離子。

2.2 提取劑的優化 提取劑是獲得較好回收率的關鍵，提取劑的選取通常視檢測對象的物化性質及樣品的類型來確定。根據肟菌酯和戊唑醇的理化特性和樣品特點，在0.20mg/kg加標水平條件下，考察了丙酮、乙酸乙酯、甲醇和乙腈對有關基質中噻嗪酮的提取效率。結果表明，丙酮和乙酸乙酯對2種農藥的提取效率最好，但同時提取出的雜質也較多，存在基質效應；甲醇的提取效率較好，但甲醇不易與水發生鹽析，不利于后續凈化處理；采用乙腈作為提取溶劑，在提取時先加入少量的水，使水稻樣品充分與乙腈混合，提升了乙腈對2種農藥的提取效率，也降低或減少了其它共提物，利于后續凈化處理。

2.3 方法線性范圍、檢出限與定量限 在上述儀器條件下，以進樣質量濃度(x)為橫坐標，相應峰面積(y)為縱坐標，考察肟菌酯和戊唑醇的線性關系。結果表明，肟菌酯的峰面積與其質量濃度在0.001～0.032mg/L范圍內呈良好的線性關系，其標準曲線方程為：y=2 144.557 9x+732.975 1，相關系數R2=0.999 5。戊唑醇的峰面積與其質量濃度在0.001～0.032mg/L范圍內呈良好的線性關系，其標準曲線方程為：y=3 616.035 5x+33.626 9，相關系數R2=0.999 8。以3倍信噪比(S/N)計算，肟菌酯和戊唑醇的檢出限為1.0×10-12g，以低檔添加水平為準，肟菌酯和戊唑醇在各種基質中的定量限為0.02mg/kg。

2.4 方法回收率和精密度 在優化的儀器條件和樣品前處理條件下，采用空白基質進行加標回收試驗，在0.02、0.2和2mg/kg 3個添加水平下，研究了肟菌酯和戊唑醇在相關基質中的回收率，結果(表2)。肟菌酯和戊唑醇在各基質中的平均回收率在79%～109%之間，相對標準偏差(RSD)為2.3%～8.5%。2種農藥標樣、糙米和植株基質空白、糙米和植株添加的典型譜圖(圖1～4)。

表2 肟菌酯和戊唑醇在糙米、谷殼、植株、土壤和稻田水中的添加回收率及相對標準偏差

3 結論

樣品經乙腈提取，弗羅里硅土柱凈化，以正離子和多反應監測模式，采用超高效液相色譜-串聯質譜檢測，建立了糙米、谷殼、植株、土壤和稻田水中肟菌酯和戊唑醇殘留量的檢測方法。在優化條件下，肟菌酯和戊唑醇在各基質中的回收率為79%～109%，相對標準偏差(RSD)為2.3%～8.5%，最低檢測濃度為0.02mg/kg，方法的重復性好、靈敏度高，符合農藥殘留檢測要求，適用于稻米等樣品中肟菌酯和戊唑醇殘留的抽檢監測及2種農藥的殘留登記試驗。