未動員的外周血造血干細胞采集效果及影響因素*

陸紫敏，李雪晨，方 琦，王加勇

同濟大學附屬同濟醫院輸血科，上海 200065

造血干細胞移植或細胞治療已成為治療多種血液病及非血液系統疾病的重要方法。近年來，用血細胞分離機采集外周血造血干細胞(PBSC)已逐漸成為造血干細胞移植或治療的主要方法，能否采集到足夠數量具有活性的PBSC是干細胞移植或治療成功的關鍵。目前對PBSC采集前多采用重組人粒細胞集落刺激因子(rhG-CSF)進行動員[1-2]，但對PBSC采集前未采用rhG-CSF動員(簡稱“未動員”)的相關研究國內外報道甚少。本研究對112例未動員的健康供者采集其PBSC進行研究，比較分析男女兩組供者采集前血常規指標及采集物指標，并將采集效果與部分影響因素進行相關分析，為進一步提高未動員供員PBSC的采集效果提供相關理論依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇本院的健康PBSC供者共112例為研究對象，其中男59例，女53例。所有入組供者采集前均未應用rhG-CSF進行動員，所有供者均為自愿捐獻，通過體格檢查篩除感染性疾病、慢性系統性疾病及其他不適于捐獻情況的人員，合格供者均簽署知情同意書。所有入組供者采集前均檢測白細胞(WBC)計數、體質量指數(BMI)、血細胞比容(Hct)、血小板(PLT)計數、血紅蛋白(Hb)、單個核細胞(MNC)計數等血常規指標。

1.2方法

1.2.1采集方法 所有研究對象采集的目標細胞為MNC，多用于嵌合抗原受體T細胞(CAR-T)療法，每份PBSC所采集的MNC計數目標閾值為>1×109/L，每袋終產品量為40～60 mL。均使用MCS+血細胞分離機(美國血液技術公司)及PBSC專用一次性管道(美國血液技術公司)進行采集。以血液保存液(ACD，上海輸血技術有限公司)為抗凝劑。輸入采集者性別、身高、體質量、外周血Hct，按PBSC程序單采，每次循環總血量2 000～6 000 mL，全血與抗凝劑比例為12∶1，采集速度為20～50 mL/min，采集時間90～180 min。所有入組的采集者術前均口服10%葡萄糖酸鈣50 mL，以防枸櫞酸鈉中毒。

1.2.2檢測方法 取混勻后的少許PBSC采集物懸液采用XS-800i全自動血細胞分析儀(日本Sysmex公司)進行WBC計數，瑞氏染色顯微鏡下行MNC分類，采用FC-500流式細胞儀(美國Beckman coulter公司)進行CD34+計數。MNC、WBC、CD34+計數的檢測均由專人負責。

1.2.3采集物分析 分析年齡、BMI、采集前血常規指標、采集循環血容量、處理血量及循環次數等因素對男女兩組供者所采集獲得的MNC計數、CD34+計數的影響；比較分析入組的男女兩組供者采集前血常規指標及采集過程、采集物等指標。MNC百分比、WBC計數以及采集血量的乘積即為MNC計數。CD34+百分比、WBC計數以及采集血量的乘積即為CD34+計數。

2 結 果

2.1采集效果 采集的112份PBSC的MNC百分比為42.11%±18.47%，CD34+百分比為0.945%±0.760%，WBC計數為(89.94±28.27)×109/L，MNC計數為(1.57±0.82)×109/L，CD34+計數為(3.40±2.76)×107/L。

2.2不同性別采集前指標、采集物參數比較 男性組年齡，BMI，采集前WBC計數、Hct、Hb，總循環血量高于女性組(P<0.05)，而采集處理血量、采集物中MNC計數低于女性組，差異均有統計學意義(P<0.05)。兩組采集前PLT計數、MNC百分比、MNC計數以及采集產品量、采集循環數、采集物中CD34+計數和WBC計數差異無統計學意義(P>0.05)，見表1、2。

表1 兩組采集前血常規及相關參數比較

表2 兩組PBSC采集過程中、采集物中相關指標比較

2.3影響采集效果的多元回歸分析 分別對男女兩組供者的年齡、BMI、采集前血常規指標以及采集循環數、循環血量等因素與采集物MNC、CD34+計數的影響因素進行分析。結果顯示，在男性組中，采集物中MNC計數的影響因素為采集循環數(P=0.018)，采集物中CD34+計數的影響因素為采集前PLT計數(P=0.048)，見表3、4。女性組年齡、采集前PLT計數、WBC計數、MNC百分比、MNC計數是采集物中MNC計數的影響因素(P<0.05)，采集前Hct、PLT計數及采集處理血量是采集物中CD34+計數的影響因素(P<0.05)，見表5、6。

表3 影響男性采集物中MNC計數的多元線性回歸分析

表4 影響男性采集物中CD34+計數的多元線性回歸分析

表5 影響女性采集物中MNC計數的多元線性回歸分析

續表5 影響女性采集物中MNC計數的多元線性回歸分析

表6 影響女性采集物中CD34+計數的多元線性回歸分析

3 討 論

PBSC采集被廣泛應用于臨床治療主要是由于采集者無須麻醉，失血和創傷性小，然而影響PBSC采集數量和質量的因素較多，目前對于采用rhG-CSF動員的PBSC采集效果和影響因素研究較多[3]。從理論上講，采用rhG-CSF進行動員的PBSC采集效果比未動員的PBSC采集效果要好，但動員的費用較高且存在采集者用藥期間出現不同程度全身不適癥狀如發熱、肌肉和骨骼酸痛等問題[4]，因此容易遭到采集者拒絕。

本研究納入的112例健康供者采集前均未采用rhG-CSF進行動員，PBSC采集物中WBC計數、MNC計數、CD34+計數以及MNC、 CD34+百分比水平分別為(89.94±28.27)×109/L、(1.57±0.82)×109/L、(3.40±2.76)×107/L、42.11%±18.47%、0.945%±0.760%，顯示未動員的供者其外周血中存在能夠安全采集到所要求的MNC目標數量，同時也顯示采集到一定數量的CD34+細胞。

如何對供者采集到質量更高、數量更多的MNC及CD34+細胞是PBSC應用于臨床治療成功的關鍵[5]。本研究對男女兩組健康供者進行比較分析，結果顯示，男性組年齡，BMI，采集前Hct、Hb、WBC計數，總循環血量均高于女性組，差異有統計學意義(P<0.05)，而男性組采集處理血量、采集物中MNC計數低于女性組，差異有統計學意義(P<0.05)。兩組采集前PLT計數、MNC百分比以及采集產品量、采集循環數、采集物中CD34+計數、MNC計數和WBC計數比較，差異無統計學意義(P>0.05)。提示入組的男女性供者年齡、體質量、身高存在一定差異，采集前Hct、Hb、WBC計數等指標也存在差異，均表現為男性高于女性，這可能與男性體表面積大，與之相應的外周血Hct、Hb、WBC計數也較高。本研究還發現，即使男女兩組的采集產品量、采集循環數差異無統計學意義(P>0.05)，男性組采集的總循環血量卻高于女性組，而采集處理血量、采集物中MNC計數卻低于女性組，提示供者因年齡、性別、采集處理血量等不同可致采集效果不一致，這與張淑遐等[6]報道結果不符，其原因可能是與采集前是否采用rhG-CSF動員有關。本研究結果顯示，男女兩組采集物中CD34+計數差異無統計學意義(P>0.05)，與張曦等[7]報道結果一致。有關年齡、性別不同是否可導致采集物中的MNC計數、循環血量、采集處理血量等變化不一致，還有待進一步大樣本研究。

有學者認為，采集物中MNC及CD34+計數是判斷PBSC采集效果的重要指標[8]，而采集效果受多種因素影響，有關采集前外周血常規指標、采集處理血量對未動員供者PBSC采集效果影響的研究國內外報道甚少。本研究分別對男女兩組采集物中MNC、CD34+計數的影響因素進行分析。結果顯示，女性組年齡、采集前PLT計數、WBC計數、MNC百分比、MNC計數是采集物中MNC計數的影響因素(P<0.05)，即年齡、PLT計數、WBC計數、MNC百分比越高，所獲得的MNC計數越高，與國內報道結果相似[9]。由此可推測女性的年齡高低，PLT計數、WBC計數、MNC百分比水平能反映骨髓造血情況，這為提前預測PBSC的采集效果，進行采集量的控制提供了一定的參考。本研究還發現，男女兩組采集前PLT計數為采集物中CD34+計數的影響因素(P<0.05，β<0)，即采集前PLT計數越高，所獲的CD34+計數越低。這結果與張淑遐等[6]報道結果不一致，可能原因如下：(1)與采集前是否采用rhG-CSF動員有關；(2)PLT比重接近干細胞，更容易被采集到干細胞成品中而影響采集效果；(3)PLT計數增加使黏滯性和聚集性增加，直接影響探測器對細胞的識別[10]。本研究還發現，女性組采集前Hct及采集處理血量是采集物中CD34+計數的影響因素(P=0.008、0.049，β=1.187、0.004)，即Hct升高、采集處理血量越多，獲得CD34+計數越高。有研究顯示，采集物中CD34+計數還與采集產品量、總循環血量等有關[8]。本研究采集產品量、總循環血量均遠低于PBSC移植所需要的產品量和循環血量[1]，因此所獲采集物中MNC、CD34+計數也遠低于移植成功所需要的細胞數[11]。

綜上所述，應用血細胞分離機對未動員健康供者進行PBSC采集，不僅安全性、采集成功率較高，且能采集到滿足臨床CAR-T細胞療法所需要的MNC閾值，以及一定數量的CD34+細胞。健康供者不同年齡、性別、總循環血量等可致采集效果不一致；采集前血常規中PLT計數有助于預測PBSC采集效果，其成本低、操作簡單方便，具有一定的臨床意義。