草莓品種離體繁殖中NAA 的作用

周秋蓮 張林 田前進 申子昂 李新賢

（1.華南農業大學農學系 廣東 廣州 510000 2.煙臺青旗農業開發有限公司 山東 煙臺 264000）

草莓的離體快繁一般采用莖尖培養獲得脫毒幼芽，通過叢芽培養增殖，再將叢芽分出單芽進行生根培養后練苗移栽[1-3]。有關草莓叢芽培養的研究表明，適當的細胞分裂素和生長素的配比是提高培養效率的關鍵[4-6]，一般細胞分裂素用0.5mg/L 濃度的6-BA[3、7-10]，生長素用濃度0～0.5mg/L 的NAA[3、7-8、11-13]。何歡樂等[3]認為草莓“豐香”最優的增殖培養基為MS+6-BA 0.5mg/L，潘超等[9]認為“紅豐”品種的最佳增殖培養基為MS+6-BA 0.2～1.0mg/L，二者均不需要添加NAA。而翟婷婷等[14]認為“紅顏”和“甜查理”增殖培養基最適宜的NAA 濃度分別為0.1mg/L 和0.5mg/L，李慧采用濃度為0.2mg/L 的NAA 獲得了較高的不定芽再生率。李曉亮的研究表明，高濃度的生長素（NAA）會誘導叢芽產生愈傷組織，而愈傷組織的形成會影響草莓種苗的綜合素質[13]。目前關于叢芽增殖培養基的報道多以一至兩個草莓品種作為供試材料，對于叢芽增殖培養中NAA 的效應，尤其是NAA 濃度與草莓品種的互作還鮮有報道。本實驗選用草莓品種豐香、佐賀清香和盧比，研究NAA 濃度對不同草莓品種叢芽培養的影響，為建立高效的草莓離體繁殖體系提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

以豐香、佐賀清香和盧比三個草莓品種的脫毒試管苗為材料，取其中生長健壯的單芽接種。

1.2 實驗設計

基本培養基為MS 培養基，蔗糖30g/L，瓊脂8.0g/L，6-BA 的濃度為0.5mg/L，不同處理的NAA 濃度分別為0（對照組）、0.05、0.10、0.15 和0.20mg/L，每個濃度處理接種芽30 個（6 瓶），設3 次重復。在25℃，光照/黑暗為12h/12h，光照強度1500lux 的條件下培養。

1.3 數據分析

接種第30d，對每個外植體進行調查，觀察長度大于0.5cm幼芽數量，以及愈傷組織有無，若基部發生愈傷組織的則測量愈傷組織的直徑。按以下公式計算叢芽增殖系數：

增殖系數=培養30d 的幼芽總數/接種外植體總數

數據通過軟件SAS9.2 進行方差分析、平均數的多重比較以及相關分析。

2 結果與分析

2.1 NAA 濃度對草莓品種叢芽增殖系數的影響

叢芽增殖系數的NAA 濃度和品種兩因素方差分析結果表明，草莓品種間、NAA 濃度間均存在極顯著（P＜0.01，下同）差異，草莓品種和NAA 濃度之間也存在極顯著的互作，以下就各個品種在不同NAA 濃度下的叢芽增殖系數分別進行分析。

各個處理三個重復的叢芽增殖系數平均數列于表1。

豐香在叢芽增殖培養基中增殖系數隨NAA 濃度的增高而下降（表1）。NAA 濃度為0mg/L 增殖系數最大，為2.47；NAA 濃度為0.05mg/L 時，增殖系數為2.20，與0mg/L 處理無顯著性差異；NAA 濃度為0.1mg/L 時，增殖系數為1.72，下降幅度加大，與前兩個處理間存在顯著性差異；NAA 濃度增加到0.15mg/L 時，增殖系數為1.96，與0.1mg/L 處理無顯著性差異；NAA 濃度為0.2mg/L時，增殖系數最低，為1.48。

表1 不同NAA 濃度下的草莓品種叢芽增殖系數

盧比在不同濃度NAA 的處理中叢芽增殖系數表現先升后降的趨勢。NAA 濃度為0.05mg/L 時，獲得最高增殖系數（2.98），與其它4 個處理間達到顯著性差異；NAA 濃度為0、0.1mg/L 和0.15mg/L 處理的增殖系數相近，僅相差約0.2；NAA 濃度為0.20mg/L 時，增殖系數低至2.07。

佐賀清香不同濃度NAA 的處理之間叢芽增殖系數都有顯著性差異，也表現先升后降的趨勢。0mg/L 時增殖系數最低為2.28，0.05mg/L 處理增殖系數 略有增加，為2.74；NAA 濃 度0.10mg/L 時，增殖系數最高，為3.87；NAA 濃度為0.15mg/L 時，增殖系數下降了0.52，為3.36；NAA 濃度為0.2mg/L 時，增殖系數為2.73，是所有處理中最小的。

本研究結果表明，NAA 濃度對草莓離體繁殖的效率有顯著作用，存在兩種作用模式：一種是無添加NAA 的處理繁殖系數最高，NAA 濃度增高繁殖系數呈下降趨勢，如品種豐香；另一種是添加適當的NAA 有利于芽增殖，超過一定限度時增殖系數下降，盧比和佐賀清香分別在NAA 濃度0.05 和0.1mg/L 處理呈現最高增殖系數。3 個品種的數據一致顯示，NAA 濃度太高對芽增殖不利，當濃度達到0.2mg/L 時，繁殖系數均較低。

2.2 NAA 濃度對草莓叢芽繁殖外植體愈傷組織形成的影響

愈傷組織直徑的兩因素方差分析結果表明，草莓品種間、NAA 濃度間均存在極顯著（P＜0.01，下同）差異，說明NAA 濃度和基因型對叢芽繁殖外植體愈傷組織的形成都有作用，草莓品種和NAA 濃度之間也存在極顯著的互作。

各個處理三個重復的愈傷組織直徑平均數列于表2。

表2 不同NAA 濃度下草莓品種叢芽培養外植體的愈傷組織直徑（cm）

表2 可見，3 個供試品種在不同濃度NAA 的叢芽增殖培養基中，愈傷組織直徑都有顯著差異，而且NAA 濃度愈高，愈傷組織的直徑愈大。各個品種不添加NAA 的處理皆未見愈傷組織，開始形成愈傷組織的NAA 濃度不同，盧比和佐賀清香在0.1mg/L下觀察到愈傷組織形成，而豐香在0.15mg/L 開始形成愈傷組織。在相同NAA 濃度下，不同品種的愈傷組織直徑也是不同的，愈傷組織直徑最大的是在較低NAA 濃度下就可見愈傷組織的佐賀清香品種。盧比在0.1mg/L 濃度下有少量愈傷組織，大于未形成愈傷組織的豐香；而在0.15mg/L 和0.2mg/L 濃度下豐香的愈傷組織直徑大于盧比。對愈傷組織直徑與芽繁殖系數進行了相關分析，相關系數為0.2557，二者無顯著相關關系，說明在此實驗的培養期間內愈傷組織的形成并未對叢芽增殖造成大的影響。

3 討論

本實驗結果表明，NAA 對草莓離體培養芽增殖的作用隨品種而不同。豐香繁殖系數隨NAA 濃度增高而降低，NAA 為0 時繁殖系數最高；盧比和佐賀清香則先增后降，分別在添加0.05mg/L 和0.1mg/LNAA 的培養基中得到最佳增殖系數。NAA 濃度達到0.2mg/L 時，3 個品種繁殖系數均顯著下降。

草莓是一種在組培快繁過程中極易發生變異的作物[15]，許多研究表明，在組織培養的愈傷組織階段易于產生遺傳性的變異。李曉亮等[13]認為NAA 濃度的增加會轉變根的發生方式（根從愈傷組織發出），最終影響草莓種苗的綜合素質[17]。因此，在芽增殖系數相同的情況下，以不形成或少形成愈傷組織的培養條件為好。本研究中雖然0.05mg/L 和0.1mg/LNAA 中盧比和佐賀清香得到了較高的芽增殖系數，但由于有不同程度的愈傷組織形成，發生變異的風險較大。而在6-BA 添加濃度為0.5mg/L、NAA 為0時，3 個品種均未產生愈傷組織。因此，可以初步認為該激素配比是相對安全的。

有關草莓組培中激素和品種間的互作，袁惠燕在不同6-BA濃度的草莓莖尖培養中觀察到，供試草莓品種受激素條件的影響不同可分為兩種，穩定型品種莖尖培養易得到良好效果，而敏感型品種只有選擇最適激素條件才能獲得滿意的培養效果[16]。本研究也觀察到了基因型與NAA 濃度的互作。因此，種苗離體快繁中有必要為不同品種配套合適的激素濃度。