檢測霍亂弧菌時的注意事項

曾學民

【中圖分類號】R572

【文獻標識碼】A

【文章編號】2095-6851（2020）04-007-01

霍亂弧菌是一種致病菌，該菌引發的霍亂是一種急性腸道傳染病，典型病例以劇烈腹瀉為主要癥狀，可在短時間內引起脫水、電解質平衡失調，嚴重可迅速發展為循環衰竭導致死亡，該病發病急、傳播快、波及范圍廣，自1816年以來在全世界范圍內發生七次大流行，因此，霍亂被列為了國境檢疫傳染疾病?；魜y病例的確診需要進行實驗室檢測，迅速準確的實驗室檢測結果可為及時采取防疫措施提供可靠的依據。那么在對霍亂弧菌進行檢測時應該注意哪些事項？下面我們就來為大家作一下詳細介紹：

霍亂弧菌具有哪些特征？

1.霍亂弧菌是屬于兼性厭氧菌，對營養的要求不是很高，普通培養基便可良好生長。在堿性蛋白胨水或平板中生長良好，因其他細菌在堿性環境中不易生長，故堿性蛋白胨水可作為選擇性增殖霍亂弧菌的培養基。

2.霍亂弧菌為革蘭氏陰性菌，菌體彎曲呈弧狀或逗點狀，菌體一端有單根鞭毛和菌毛，無莢膜與芽胞，在暗視野下可見細菌運動極為活潑，呈流星穿梭運動。

3.霍亂弧菌對于熱、干燥、日光及常規消毒劑都非常敏感，若干燥2小時或者加熱至55℃，則會在10分鐘內死亡;在煮沸的開水中會1-2分鐘死亡;對于酸非常敏感，在正常胃酸中活不過4分鐘;如果放入0.1%的漂白粉當中也會在10分鐘內死亡。

霍亂弧菌怎樣進行檢測？

1.增菌：一般采集的標本來自各種環境，雜菌比較多，利用霍亂弧菌耐堿的特性，取一定數量的樣品放入到裝有堿性蛋白胨水（APW）的廣口瓶中，在適宜的溫度培養，以抑制雜菌利于霍亂弧菌生長。增菌主要注意事項：一是配制增菌培養基的時候，一定要PH值準確;二是食品、水樣等雜菌較多的樣品，需要先后使用PH8.8-9.2和PH8.4-8.6堿胨水進行二次增菌以提高檢測率;三是急性期患者標本可以直接在選擇性平板上劃線，進行分離培養，以加快檢測速度，為疫情處理盡早地提供應對方向。

2.分離：用接種環在6h-8h與16h-24h的增菌培養液表面菌膜下各取一環，分別劃線到TCBS、慶大霉素或4號瓊脂平板上各一個，在（36±1）℃條件下培養18-24h;分離主要注意事項：一是要注意檢驗人員需經過多次培訓能準確識別典型菌落，必要時多挑取可疑菌落進一步檢測，避免遺漏;二是選擇性平板一定要按規范準備，新平板一定烘干水分;三是平板上的標識要準確、唯一，不要出現可能混淆的標號。

3.鑒定：采用接種環取下TCBS瓊脂平板上的2-5個可疑菌落，在堿性瓊脂平板表面劃線，于（36±1）℃條件下培養12h-18h。在選擇性平板上直接挑取可疑菌落，用O1/O139兩價混合血清凝集，并使用分離到的純菌在生化鑒定系統進行生化鑒定實驗。O1的菌株再用小川/稻葉血清分別凝集，做生物型鑒定試驗可報告霍亂菌的生物型，同時采用PCR技術檢測霍亂菌的產毒株/非產毒株，可報告血清群、血清型、產毒/非產毒。鑒定主要注意事項：一是要所有的血清和試劑均在有效期內使用;二是用于做血清凝集實驗的玻片一定潔凈，不得有影響檢測結果的污跡;三是出現可疑結果一定要多次實驗，避免遺漏陽性菌株。

霍亂弧菌主要檢測標本應該如何采集？

1.由于霍亂是一種烈性消化道傳染病，采樣人員要注意按二級防護要求做好個人防護。撲滅霍亂疫情需要花費大量人力物力財力，檢測結果會直接影響政府防控措施的實施，因此在標本采集的時候應該保證每一個標本的編號是唯一的。標本采集后應冷藏保存，在沒有冷藏條件的情況下，特別是夏天應該將運送時間計算進培養時間。

2.患者糞便 糞便標本的采集越快越早越好，這樣會盡早獲得檢測結果為撲滅疫情贏得時間，在患者腹瀉的便池、地面、或者醫院專用的糞便收集器挑取一定量的糞便加入堿胨增菌液中，同時也在4號瓊脂平板劃線，一起送實驗室培養檢測。

3.水體 采集包括河口水、井水、鄉鎮自來水廠源水、下水道排放口等水體樣本。一是以滅菌的500ml鹽水瓶采取水樣450ml，不要讓水樣充滿整個瓶子。二是Moore紗布集菌法：該方法尤其適用于河流等流動水體水樣的采集，城市生活污水的采集也可采用此方法。三是Spira紗布集菌法：用于過濾并采集大體積水樣。

4.患者嘔吐物、食品等 嘔吐物、食品、水產品、蒼蠅、被污染的物體表面都是用無菌的鑷子或棉拭子取用一定數量的檢材，放入滅菌容器或者直接放入堿胨水試管里中送檢。