不同采收期絞股藍中總皂苷的含量比較研究

◎王珊 許海燕 侯敏娜 劉艷紅 王青

絞股藍Gynostemma pentaphyllum（Thumb。）Makino為葫蘆科多年生草質藤本植物，絞股藍藥材產地分布較為廣泛，全世界約有16種2變種，我國有14種2變種，主要分布在秦嶺及長江以南地區。曾被列為待開發的第一位的“名貴中藥材”，且其也是藥食兩用常用藥材。研究發現絞股藍皂苷為絞股藍的主要活性成分，主要含達瑪烷型皂苷，其具有較好的調血脂、保肝等作用。目前絞股藍絞股藍以其獨特的身份，在醫藥、保健、養殖等行業已有較好的應用。但絞股藍的品種較為混亂，不同采收期的絞股藍的質量差別較大，因此開展不同采收期絞股藍的質量評價具有重要意義，因此本研究主要對不同采收期的絞股藍總皂苷的含量進行比較研究，該研究為絞股藍的采收加工及質量評價提供一定的理論依據。

一、材料

T6-新世紀紫外分光光度計（北京普析通用股份有限公司）、十萬分之一電子天平（METTLER-XP-205，深圳市盛美儀器有限公司）、KQ-5200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、WELCH真空泵LVS 302 Z（伊爾姆真空設備貿易有限公司）、SB-1100型EYELA水浴鍋（東京理化器械株式會社）。

人參皂苷Re對照品（批號：110754-201834，中國食品藥品檢定所），水為純凈水，石油醚、香草醛、冰醋酸、高氯酸、乙醇、正丁醇等其余試劑均為分析純。

絞股藍樣品均為2019年從道地產區直接收集，經陜西國際商貿學院雷國蓮教授鑒定為為葫蘆科絞股藍屬植物絞股藍（Gynostemma pentaphyllum（Thumb。）Makino的干燥全草。

二、方法與結果

1.對照品溶液制備。精密稱取人參皂苷Re對照品適量，加甲醇溶解制成濃度為0.501 mg.mL-1的對照品溶液，備用。

2.供試品溶液的制備。分別稱取5、6、7、8、9五個不同采收期絞股藍藥材干燥粉末（過20目篩）約1g，加石油醚適量，超聲處理兩次每次30 min，棄去石油醚，加60%乙醇50 mL，超聲處理兩次，每次45min，過濾，合并濾液，揮至無醇味，水溶液加水飽和正丁醇30 mL萃取3次，合并正丁醇溶液，蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至25 mL，即得不同采收期絞股藍總皂苷供試品溶液。

3.最大波長的確定。將顯色后的供試品和對照品在200～700 nm波長范圍下掃描，結果發現最大波長為550 nm。

4.標準曲線制定。精密量取人參皂苷Re對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分別置于 10 mL 試管中，揮干溶劑，分別精密加入0.2 mL5%的香草醛冰醋酸溶液和0.8 mL的高氯酸，混勻，密塞，置于60℃水浴鍋中15 min，取出后、冷卻，再加5 mL冰醋酸，混勻，以空白試劑為對照，在550 nm波長處測定吸收度。繪制標準曲線，其中以吸光度A為縱坐標（Y），以對照品取樣量（mg）為橫坐標（X），進行線計算回歸方程為：Y=3.145X-0.0289，R2=0.998（n＝5）。實驗結果結果顯示，人參皂苷Re在0.967～0.501 mg范圍內線性關系良好。

5.精密度試驗。精密吸取同一份人參皂苷Re對照品溶液，按照2.4項下方法操作，在同一條件下連續測定6次吸光度，計算人參皂苷Re吸光度的RSD為0.4%，表明儀器精密度良好。

6.穩定性實驗。取同一批絞股藍樣品，按照2.2項下方法，按照 2.4 項下方法操作，分別于 0、0.5、1、1.5、2.5、3 h 測定吸光度，計算人參皂苷Re吸光度的RSD為0.3%，表明絞股藍樣品在3 h內穩定性良好。

7.重復性試驗。取同一批絞股藍樣品，按照2.2項下方法，平行制備6個批次供試品溶液，按照2.4項下下方法操作，重復測定6次，計算人參皂苷Re吸光度的RSD為0.6%，表明該方法重復性良好。

8.加樣回收率試驗。取已知含量（23.1 mg）的絞股藍藥材樣品6份，每份0.5g，精密稱定，每份分別精密加入一定量（23.1 mg）的人參皂苷Re對照品，按照2.2項下方法，按照2.4項下方法操作，測定吸光度，計算回收率，結果平均回收率為98.3%，RSD為2.13%（n=6），結果表明該方法的回收率良好。

9.樣品測定。分別精密量取不同采收期的絞股藍供試品溶液，按照2.4項下方法操作，平行測定3次測定吸光度，結果如表1所示。從表1結果可以看出，不同采收期對絞股藍皂苷的含量影響較大，隨著絞股藍生長時間的延續總皂苷的含量呈上升趨勢，在7月份的時候總皂苷的含量（平均含量為4.519%）達到最高，之后呈下降趨勢。該研究結果為絞股藍的產地采收加工及質量控制提供理論依據。

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