酵母提取物和復(fù)合酶對(duì)感染大腸桿菌斷奶仔豬生長(zhǎng)性能和免疫狀態(tài)的影響

孫留霞，錢 坤，李 嘉

（1.周口職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南周口 466000；2.天津市農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心，天津 300402）

隨著飼料禁抗日程的逐漸到來(lái)，對(duì)促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)和健康的潛在抗生素替代品的需求不斷提高。酵母提取物含有各種生物活性化合物，包括核苷酸和細(xì)胞壁多糖，特別是β-葡聚糖和α-木聚糖，其有利于仔豬的生長(zhǎng)和腸道健康（Gallois等，2009）。因此，酵母提取物已被認(rèn)為是一種潛在的替抗選擇。有研究表明，碳水化合物酶通過(guò)水解復(fù)合非淀粉多糖來(lái)增強(qiáng)腸道健康，不僅增加了營(yíng)養(yǎng)的有效性，而且通過(guò)釋放可發(fā)酵的低聚糖來(lái)誘導(dǎo)益生菌的益生作用，這些低聚糖被宿主腸道微生物群用作能量來(lái)源（Masey-O’Neill等，2014）。本研究比較了添加或不添加復(fù)合酶的酵母提取物日糧與抗生素日糧對(duì)感染大腸桿菌仔豬生長(zhǎng)性能、免疫狀態(tài)和腸道絨毛結(jié)構(gòu)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)選擇24 d斷奶的仔豬360頭，隨機(jī)分為6組，每組60頭豬。試驗(yàn)處理包括陰性對(duì)照組（T1組，基礎(chǔ)日糧，表1）、陽(yáng)性對(duì)照組（T2組，斷奶后7 d進(jìn)行大腸桿菌攻毒）、陽(yáng)性對(duì)照+抗生素組（T3組，75 mg/kg金霉素）、陽(yáng)性對(duì)照+酵母提取物組（T4組，0.5%）、陽(yáng)性對(duì)照+復(fù)合酶組（T5組，200 mg/kg）及陽(yáng)性對(duì)照+酵母提取物（T6組，0.25%）+復(fù)合酶組（100 mg/kg）。試驗(yàn)用復(fù)合酶由15000 IU/g纖維素、2000 IU/g甘露聚糖酶、3000 IU/g葡聚糖酶、12500 IU/g木聚糖酶和1000 IU/g蛋白酶組成。分別在試驗(yàn)當(dāng)天、第8和11天早上對(duì)各重復(fù)豬進(jìn)行稱重，每天統(tǒng)計(jì)飼料用量，用于計(jì)算日增重、日采食量和飼料報(bào)酬。豬只攻毒方法按照Rakhshandeh和 de Lange（2012）的方法進(jìn)行。

1.2 樣品采集與分析 在第7天（攻毒前和攻毒后 6、48、96 h）取全血（每頭 10 mL），其中 5 mL用于分離血清。試驗(yàn)結(jié)束后每個(gè)重復(fù)屠宰2頭豬，收集十二指腸、空腸和回腸，用于測(cè)定絨毛高度、隱窩深度，計(jì)算絨毛高度/隱窩深度。血清尿素氮、TNF-α（腫瘤壞死因子-α）、IL-10（白細(xì)胞介素-10）采用試劑盒分析。

1.3 數(shù)據(jù)分析 采用SAS軟件多因素方差分析模型對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用Tukey法進(jìn)行多重比較，P＜0.05表示組間差異顯著。

表1 基礎(chǔ)日糧配方

2.1 生長(zhǎng)性能 由表2結(jié)果可以看出，第1～7天（攻毒前）所有仔豬均表現(xiàn)健康，未發(fā)生腹瀉。此外，除了感染組+抗生素豬采食量顯著高于感染組+酵母提取物組外（P＜0.05）。在第7～11天（攻毒后），與陽(yáng)性對(duì)照組相比，陰性對(duì)照組日增重、日采食量和飼料效率顯著提高（P＜0.05），而接受大腸桿菌脂多糖攻毒的豬有提高日增重的趨勢(shì)（P=0.07）。在1～11 d，與陰性對(duì)照相比，陽(yáng)性對(duì)照組豬體重下降13%，日增重下降56%，日采食量下降37%，飼料效率下降26%（P＜0.05）。

表2 酵母提取物和復(fù)合酶對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

2.2 血液學(xué)指標(biāo) 由表3可知，各處理組對(duì)感染前豬血清尿素氮水平無(wú)顯著影響（P＞0.05）。感染后6 h，酵母提取物組血清尿素氮水平顯著高于無(wú)酵母提取物組（P＜0.05），陽(yáng)性對(duì)照組血清尿素氮顯著高于陰性對(duì)照組和抗生素組（P＜0.05）。攻毒6 h后，酵母提取物血液白細(xì)胞數(shù)量顯著高于未添加酵母提取物組（P＜0.05），而陽(yáng)性對(duì)照組血液白細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著低于酵母提取物組（P＜0.05），而抗生素組較復(fù)合物組顯著提高了血液白細(xì)胞數(shù)量（P＜0.05）。攻毒6 h后，抗生素組較酵母提取物組顯著降低了紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（P＜0.05）。攻毒6和96 h后，抗生素組血液血小板計(jì)數(shù)最低（P＜0.05）。

表3 酵母提取物和復(fù)合酶對(duì)斷奶仔豬血液學(xué)指標(biāo)的影響

2.3 腸絨毛形態(tài) 由表4可知，陰性對(duì)照組、復(fù)合酶組及酵母提取物+復(fù)合酶組較抗生素組顯著提高了十二指腸和空腸絨毛高度（P＜0.05），而抗生素組空腸絨毛高度與隱窩深度比值最低（P＜ 0.05）。

2.4 直腸溫度和血清免疫因子 由表5可知，感染后仔豬直腸溫度較感染前有一定的升高。攻毒6 h后，酵母提取物組（加或不加復(fù)合酶）較無(wú)酵母提取物組顯著降低了血清TNF-α濃度，顯著提高了血清IL-10濃度（P＜0.05）。與陽(yáng)性對(duì)照組相比，陰性對(duì)照組和抗生素組顯著降低了TNF-α濃度（P＜0.05），但陰性對(duì)照組血清IL-10濃度顯著降低（P＜0.05），抗生素組血清IL-10濃度顯著提高（P＜0.05）。

表4 酵母提取物和復(fù)合酶對(duì)斷奶仔豬絨毛形態(tài)的影響

表5 酵母提取物和復(fù)合酶對(duì)斷奶仔豬直腸溫度和血清免疫因子的影響

3 討論

抗生素、酵母提取物和復(fù)合酶對(duì)斷奶后第7天仔豬的生產(chǎn)性能無(wú)顯著影響，但在第7～11天（攻毒后），陽(yáng)性對(duì)照組日增重、采食量和飼料效率顯著降低，這與Liu等（2003）的研究結(jié)果一致，表明大腸桿菌攻毒對(duì)豬的生長(zhǎng)性能有負(fù)面影響。抗生素對(duì)生長(zhǎng)性能的這一有益影響在整個(gè)試驗(yàn)期間（1～11 d）得到了進(jìn)一步體現(xiàn)，說(shuō)明抗生素通過(guò)降低腸道病原體負(fù)荷和宿主與腸道微生物之間對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的競(jìng)爭(zhēng)，改善了仔豬腸道健康和生長(zhǎng)性能，這種作用也可能與抗生素免疫調(diào)節(jié)作用有關(guān)（Bode等，2014）。

血小板在凝血中發(fā)揮重要作用，作為血管損傷或病原體入侵的第一個(gè)應(yīng)答防線，陽(yáng)性對(duì)照組白細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)減少是由于大腸桿菌脂多糖誘導(dǎo)的自身免疫，提示感染發(fā)生率或嚴(yán)重程度增加（Yeaman等，2014）。與未受攻毒的對(duì)照組豬相比，未加酶或加酶的豬補(bǔ)充酵母提取物可降低空腸和十二指腸絨毛萎縮，空腸絨毛高度/隱窩深度比也有所降低，效果與添加抗生素相似。絨毛高度和絨毛/隱窩的增加表明營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收得到改善。腸上皮細(xì)胞合成新生核苷酸的能力有限，因此，補(bǔ)充酵母提取物可增加日糧核苷酸水平，促進(jìn)腸組織的生長(zhǎng)發(fā)育。

在豬身上注射脂多糖可誘導(dǎo)刺激細(xì)胞因子的生成，如IL-1、TNF-α、IFN-γ，這些因子視為內(nèi)生熱介質(zhì)。在本研究中，與陰性對(duì)照組相比，攻毒6 h后陽(yáng)性對(duì)照組豬的直腸體溫明顯升高，這與Pi等（2014）的研究結(jié)果一致。抗生素組、酵母提取物和復(fù)合酶組的血清TNF-α和IL-10濃度高于陽(yáng)性對(duì)照組，這意味著抗生素和酶+酵母提取物改善了豬的免疫功能，降低了大腸桿菌引起的促炎水平。

4 結(jié)論

感染大腸桿菌斷奶仔豬日糧添加酵母提取物對(duì)仔豬的影響與抗生素相似，即降低血清尿素氮、十二指腸和回腸絨毛萎縮，下調(diào)血清促炎細(xì)胞因子濃度。