新型隱球菌莢膜多糖對(duì)肺隱球菌病的診斷價(jià)值

卜丹霞，楊春超，黃云平，冼觀秀

湛江中心人民醫(yī)院，廣東 湛江524054

肺隱球菌病（PCD）是由隱球菌屬中新生隱球菌引起的一種肺部真菌感染，臨床上主要以亞急性或慢性起病多見。該病起病隱匿，臨床表現(xiàn)不典型，也缺乏簡(jiǎn)單有效的診斷手段，常被誤診為肺癌或其他肺部疾病［1］。隱球菌進(jìn)入人體后菌體外周莢膜明顯增厚，而莢膜為隱球菌主要致病物質(zhì)，與菌體的繁殖、定植密切相關(guān)，且具有抗原性［2］。血清乳膠凝集試驗(yàn)（LAT）隱球菌莢膜多糖抗原的常用檢測(cè)方法，具有操作簡(jiǎn)單、快速等特點(diǎn)，且對(duì)肺部隱球菌感染診斷敏感性和特異性均較高［3］。本研究針對(duì)疑似PCD患者采用LAT檢測(cè)新型隱球菌莢膜多糖，探討新型隱球菌莢膜多糖檢測(cè)對(duì)PCD的診斷價(jià)值，旨在為其臨床應(yīng)用提供可靠依據(jù)。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月—2018年12月湛江中心人民醫(yī)院收治的疑似PCD患者83例，其中男58例，女25例；年齡19～78歲，平均年齡（48.95±5.73）歲；所有患者年齡＞18歲，均自愿參加研究并簽署知情同意書；排除人類免疫缺陷病毒（HIV）感染，器官移植史，嚴(yán)重心肺肝腎功能不全等疾病及臨床資料不全者。

1.2 方法

83例患者入院后治療前均行LAT、肺組織鏡檢及培養(yǎng)、肺組織病理檢查。（1）LAT。患者取晨起空腹靜脈血4 ml置于無菌無抗凝管中，1 000 r/min離心15 min后取上清液，置于-20℃冰箱內(nèi)冰凍保存待檢。試劑盒來源于美國Immuno-Mycologics公司，檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。（2）肺組織鏡檢及培養(yǎng)。采用CT或B超引導(dǎo)下經(jīng)皮肺穿刺活檢。將取出部分肺穿組織標(biāo)本注入培養(yǎng)皿內(nèi)送檢病原學(xué)培養(yǎng)，再抽取少量肺組織標(biāo)本涂片后直接鏡檢和細(xì)胞學(xué)檢查。（3）肺組織病理檢查。肺穿刺活檢中取少量組織應(yīng)用4%甲醛液固定，石蠟包埋、組織切片后進(jìn)行HE染色和特殊染色如抗酸染色、六胺銀染色（GSM）、過碘酸雪夫染色（PSA）檢查等。

1.3 診斷金標(biāo)準(zhǔn)

經(jīng)肺組織病理活檢或者組織培養(yǎng)出隱球菌結(jié)合特殊染色GSM、過PSA陽性及抗酸染色陰性確診。

1.4 觀察指標(biāo)

（1）根據(jù)PCD診斷金標(biāo)準(zhǔn)，觀察3種檢測(cè)方法對(duì)PCD的檢測(cè)結(jié)果；（2）根據(jù)PCD診斷金標(biāo)準(zhǔn)，3種檢測(cè)方法對(duì)PCD的準(zhǔn)確性、敏感性和特異性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3種檢測(cè)方法對(duì)肺隱球菌病的檢測(cè)結(jié)果

根據(jù)PCD診斷金標(biāo)準(zhǔn)，83例患者診斷為PCD 26例（31.32%）。3種檢測(cè)方法對(duì)肺隱球菌病的檢測(cè)結(jié)果見表1、表2、表3。

表1 LAT對(duì)肺隱球菌病的檢測(cè)結(jié)果 例

表2 肺組織培養(yǎng)對(duì)肺隱球菌病的檢測(cè)結(jié)果 例

表3 肺組織病理檢查對(duì)肺隱球菌病的檢測(cè)結(jié)果 例

2.2 3種檢測(cè)方法對(duì)PCD的準(zhǔn)確性、敏感性和特異性比較

LAT對(duì)PCD的準(zhǔn)確性、敏感性明顯高于肺組織培養(yǎng)、肺組織病理檢查，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；3種檢測(cè)方法對(duì)PCD的特異性均較高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表4。

表4 3種檢測(cè)方法對(duì)PCD的準(zhǔn)確性、敏感性和特異性 %

3 討論

以往文獻(xiàn)報(bào)道，PCD主要發(fā)生于免疫功能下降或存在免疫缺陷者［4］。隨著近年來社會(huì)老齡化，心、肺、內(nèi)分泌等系統(tǒng)常見慢性病發(fā)病率上升及免疫抑制劑、腫瘤化療等藥物的使用，使得PCD病例亦呈增多趨勢(shì)［5］。該病表現(xiàn)為慢性隱匿起病，臨床癥狀不典型，但病情嚴(yán)重時(shí)可侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)或引起呼吸衰竭導(dǎo)致死亡［6］。因此，早期、準(zhǔn)確診斷對(duì)PCD患者的治療及預(yù)后具有重要意義。

雖然當(dāng)前臨床檢驗(yàn)技術(shù)不斷提升，但免疫狀態(tài)不同患者PCD臨床特點(diǎn)、影像學(xué)及實(shí)驗(yàn)室檢查等早期均無明顯特異性，給早期診斷帶來困擾，易發(fā)生漏診、誤診，影響患者預(yù)后［7］。目前臨床上主要靠肺組織病理活檢或者經(jīng)組織培養(yǎng)確診PCD，因診斷主要是靠有創(chuàng)操作取得肺組織，具有一定風(fēng)險(xiǎn)性，在早期患者、耐受性差的老年患者及重癥患者中開展受到限制［8］；同時(shí)組織真菌培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，可能混有其他定植菌的生長(zhǎng)，導(dǎo)致隱球菌培養(yǎng)陽性率低等問題［9］，因此上述兩種檢測(cè)方式早期診誤率及漏診率仍較高［10］。

新型隱球菌屬于環(huán)境腐生菌，是一種機(jī)會(huì)性感染病原體，進(jìn)入機(jī)體后菌體周圍會(huì)形成一層厚厚的莢膜，后者具有輔助菌體逃逸巨噬細(xì)胞的吞噬作用［11］。因此，莢膜為隱球菌主要致病物質(zhì)及具有抗原性［12］。LAT作為一種新興的免疫檢測(cè)方法，以標(biāo)準(zhǔn)大小的乳膠顆粒為載體吸附高效價(jià)的隱球菌莢膜多糖抗體，可對(duì)血液中隱球菌莢膜多糖抗原進(jìn)行早期篩查診斷，因其具有操作簡(jiǎn)單、快速等特點(diǎn)，且陽性率及特異性均較高，近年來已作為隱球菌感染輔助診斷方法廣泛應(yīng)用于臨床［13-14］。研究證實(shí)，隱球菌莢膜抗原檢測(cè)不僅是一種高效、快速的PCD診斷方法，還可用于患者療效的評(píng)價(jià)［15］。本研究針對(duì)疑似PCD患者在入院后治療前均行LAT、肺組織培養(yǎng)、肺組織病理檢查，發(fā)現(xiàn)LAT對(duì)PCD的準(zhǔn)確性、敏感性明顯高于肺組織培養(yǎng)、肺組織病理檢查，3種檢測(cè)方法對(duì)PCD的特異性均較高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明相較于病灶組織培養(yǎng)和病理檢查，LAT檢測(cè)隱球菌莢膜抗原對(duì)診斷PCD具有更高的敏感性和準(zhǔn)確性，可作為該病早期輔助診斷方法。但隱球菌莢膜抗原結(jié)果可受各種因素影響造成假陽性及假陰性［16］，本研究中亦發(fā)現(xiàn)假陽性及假陰性。臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，試劑因素、標(biāo)本污染、其他病原體感染等可造成隱球菌莢膜抗原結(jié)果假陽性或假陰性，類風(fēng)濕因子陽性可出現(xiàn)假陽性，感染早期、莢膜抗原濃度低、莢膜抗原濃度過高導(dǎo)致前帶現(xiàn)象、感染菌株少造成分泌的可溶性抗原含量低等則可造成假陰性［17］。因此，隱球菌莢膜抗原檢測(cè)目前只限于PCD的定性診斷，并未達(dá)到金標(biāo)準(zhǔn)診斷水平，需進(jìn)行更多的大型臨床研究來完善該檢查的診斷價(jià)值。