加味玉屏風濃煎劑的工藝優化研究*

錢海燕，曹 楊

南京中醫藥大學第二附屬醫院，江蘇省第二中醫院 藥學部，南京210017

玉屏風散是由黃芪、白術、防風3 味中藥組成的經典方劑，具有益氣、固表、止汗的功效[1，2]。我院結合多年臨床經驗，在玉屏風散的基礎上添加了黨參、桂枝、干姜、吳茱萸、紫蘇葉等5 味中藥，形成加味玉屏風散，作為醫院協定處方，工藝上亦改良為濃煎劑。該劑增加了補脾益肺、溫肺化飲的功效，尤對患兒呼吸道感染療效顯著。

濃煎劑是由我國傳統湯劑改良而來，本研究圍繞加味玉屏風濃煎劑的工藝進行優化研究，以期保證生產工藝的科學性，提高制劑的穩定性，確保臨床的療效。

1 儀器與藥品、試劑

1.1 儀器

SHIMADZU LC-20AD 高效液相色譜儀系統（日本島津公司）；BP121S 型電子分析天平（德國賽多利斯公司）；BSM220.4 分析天平（上海卓精公司）；YJX40-g 微壓循環中藥煎藥機（北京東華原公司）。

1.2 藥品與試劑

毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品（純度97.6%，批號111920-201102），5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品（純度95.8%，批號111523-201509）均購自中國食品藥品檢定院；升麻素苷對照品（純度96.2%，批號161226），肉桂酸對照品（純度98.8%，批號117/100127）均購自南京森貝伽生物科技有限公司。

黃芪、炒白術、黨參、干姜、吳茱萸、紫蘇葉（亳州市中藥飲片廠）；桂枝（南京正草堂藥業有限公司）；防風（南京海源中藥飲片有限公司）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 濃煎劑樣品的制備

稱取黃芪150 g、炒白術90 g、黨參60 g、桂枝30 g、干姜20 g、吳茱萸20 g、紫蘇葉50 g、防風60 g，清洗干凈，倒入中藥煎藥機中浸泡、煎煮，保持微沸1 h，過濾，得第一次煎煮液；濾渣再次煎煮，合并2次煎煮液。藥液置容器中沉淀，經200 目篩過濾，把藥液置于蒸汽夾層鍋中加熱至沸，改用文火，不斷攪拌，濃縮至體積560 mL，于4 ℃存放備用。

2.2 HPLC 法測定4 種活性成分

2.2.1 色譜條件 色譜柱：YMC-PACK ODS-A 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：甲醇（B）-0.1%甲酸水溶液（A）（梯度洗脫，程序為：0～70 min，5%～38% B；70～95 min，38%～42% B；95～100 min，42%～5%B）；流速：1 mL·min-1；檢測波長：284 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

2.2.2 溶液的制備 對照品溶液：分別精密稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷、升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、肉桂酸對照品適量，分別置于5 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，即得濃度分別為2.102、1.982、2.254、2.056 mg·mL-1對照品儲備液。分別吸取上述4種對照品儲備液1 mL、1 mL、1 mL、0.5 mL，置于5 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，即得每毫升含毛蕊異黃酮葡萄糖苷、升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、肉桂酸分別為420.4、396.4、450.8、205.6 μg 的混合對照品溶液，于4 ℃存放備用。

供試品溶液：精密吸取加味玉屏風濃煎劑10mL，水浴蒸干，用甲醇溶解，定容于2 mL 量瓶中，3000 r·min-1離心10 min，取上清液，經0.45 μm 微孔濾膜，得供試品溶液，于4 ℃存放備用。

2.2.3 系統適應性試驗 取“2.2.2”項下混合對照品溶液及供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件檢測，色譜圖見圖1。

2.2.4 線性關系考察 精密吸取“2.2.2”項下混合對照品溶液50、100、200、400、600、1000 μL 置1 mL量瓶中，用甲醇定容，配制成不同濃度的混合對照品溶液，按照“2.2.1”項條件檢測，以進樣量（X）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標繪制標準曲線，回歸方程見表1。

表1 4 種指標性成分線性關系考察

2.2.5 精密度試驗 精密取“2.2.2”項下混合對照品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件重復進樣6 次，記錄峰面積值，計算得4 種成分的RSD 值（分別為0.23%、0.39%、0.21%、0.39%）均小于1%，說明儀器的精密度良好。

2.2.6 重復性試驗 取同批加味玉屏風濃煎劑6份，按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”色譜條件檢測，記錄各個色譜峰面積，計算得4 種成分峰面積的RSD 值（分別為0.65%、1.64%、1.69%、0.76%）小于2%，說明本法重復性良好。

2.2.7 穩定性試驗 取同批加味玉屏風濃煎劑適量，分別于0、2、4、6、8、12、24 h 進樣，按“2.2.1”項條件檢測，記錄各個色譜峰面積，計算得4 種成分峰面積的RSD 值（分別為0.76%、1.10%、0.78%、1.12%）均小于2%，表明供試品溶液在24 h 內穩定性較好。

2.2.8 加樣回收率試驗 分別精密稱取已知含量的同一批加味玉屏風濃煎液5 mL 各6 份，每份精密加入毛蕊異黃酮葡萄糖苷、升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、肉桂酸的量約為加味玉屏風濃煎劑所含各對照品相當的量，用純水定容至10 mL，按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”色譜條件檢測，計算得4 種成分的回收率分別為99.82%、97.64%、98.37%、97.25%，RSD 分別為1.58%、2.53%、2.45%、1.98%，加樣回收率符合要求。

2.3 浸出物含量測定

精密量取混合均勻的加味玉屏風濃煎液25 mL，水浴蒸干后于105 ℃恒溫干燥3 h，冷卻30 min 迅速精密稱定質量[3]。以干燥品來計算加味玉屏風濃煎劑的浸出物含量。

2.4 濃煎劑正交試驗

根據前期預實驗的單因素考察結果，確定4 種成分權重系數，計算綜合評分值。

綜合評分=浸出物含量/Max（浸出物含量）×40+毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量/Max（毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量）×15+升麻素苷含量/Max（升麻素苷含量）×15+5-O-甲基維斯阿米醇苷/Max（5-O-甲基維斯阿米醇苷）×15+肉桂酸含量/Max（肉桂酸含量）×15

通過L9（34）安排正交試驗對加味玉屏風濃煎劑提取工藝進行優選。因素和水平見表2；正交試驗結果見表3。

表2 加味玉屏風濃煎劑提取工藝因素水平

由表3、表4 結果可知，影響加味玉屏風濃煎劑提取工藝的因素依次為B＞A＞C,即煎煮時間＞浸泡時間＞加水量，最終選擇A2B3C2 為最佳工藝條件，即浸泡60 min，煎煮210 min，加入10 倍量水提取。

3 討論

加味玉屏風濃煎劑的8 味中藥中，君藥黃芪的指標性成分為毛蕊異黃酮葡萄糖苷；臣藥桂枝的指標性成分為肉桂酸；佐藥防風的指標性成分為升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷。浸出物含量和4個活性成分作為加味玉屏風濃煎劑煎煮工藝的質控指標，可以全面地反映提取物有效成分的信息，符合中醫用藥的整體觀。優化后的濃煎劑在保證臨床療效的前提下，與水煎劑相比具有服用劑量小、封包質量穩定、攜帶方便等優點，具有良好的社會效益和經濟效益。

表3 加味玉屏風濃煎劑提取工藝正交試驗及結果

表4 方差分析結果