蜜環菌提取物改善睡眠及免疫調節研究*

魏 毅

（南京森林警察學院，江蘇 南京 210023）

蜜環菌（Armillaria mellea） 又名榛蘑、臻蘑，主要產自我國北方地區，是一種常見的食用菌。蜜環菌兼具食用和藥用功效，其保健功效也日益浮現出來。而改善睡眠和提高免疫力是食用菌最為重要的保健功效之一，基于小鼠睡眠和免疫試驗角度，從定量分析入手，剖析蜜環菌提取物改善睡眠和免疫調節的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗樣品

蜜環菌提取物在實驗室恒溫恒濕條件下，按照規范流程，進行試驗樣品前處理（分選，粉碎，提純，分裝等）。

1.2 試驗動物

雄性小鼠，每只小鼠體重（20±2） g，數量為120只。按照3種戊巴比妥鈉睡眠法分為3批，每批40只；然后將每批按照劑量高低，平均分為4組（包含空白對照組）。

1.3 試劑與劑量

試劑主要為戊巴比妥鈉、巴比妥鈉、無菌蒸餾水，純度均為實驗生化類優級純。蜜環菌提取物劑量從低到高為60 mg·kg-1、150 mg·kg-1、500 mg·kg-1，另外選擇無菌蒸餾水作為空白對照。

1.4 試驗方法

1.4.1 直接睡眠法

將試驗用的120只小鼠，按照劑量高低分別為CK、低、中、高，CK組為小鼠灌胃無菌蒸餾水，其他試劑組為小鼠灌入對應劑量蜜環菌提取物，其是觀察小鼠的睡眠情況，并進行統計。小鼠睡眠情況是通過翻正反射消失為衡量指標，如果小鼠在1 min以內不能翻正，則可以認定小鼠入睡，如果小鼠恢復了正常姿態，即小鼠醒來，這個時間間隔即為小鼠睡眠時間。

1.4.2 戊巴比妥鈉睡眠法

1)延長戊巴比妥鈉睡眠時間試驗

給小鼠針入戊巴比妥鈉（40 mg·kg-1），蜜環菌提取物針入量為0.2 mL·20-1g-1，判斷試驗組小鼠的睡眠時間與CK組小鼠的睡眠時間是否具有統計學的關聯性。在做試驗之前，根據翻正反射消失指標，判斷小鼠是否入睡，只有當小鼠翻正反射消失時，才可以進行試驗。

2)戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗

首先通過80%以上試驗小鼠翻正反射不消失的指標，確定戊巴比妥鈉閾下最大催眠劑量，然后給不同劑量組小鼠針入20 mg·kg-1溶液，通過觀察試驗小鼠翻正反射消失指標，如若超過1 min為小鼠入睡，以此來記錄30 min以內入睡小鼠數量。該試驗適宜在安靜恒溫恒濕環境中進行，以保證最佳試驗結果。

3)巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗

在上述兩個試驗基礎上，在給試驗小鼠灌入最后一次不同劑量蜜環菌提取物之后的20 min后，給試驗小鼠針入巴比妥鈉（200 mg·kg-1），詳細錄入小鼠對該試驗的影響。

1.4.3 遲發型超敏反應法

通過外界誘發的一種細胞免疫超敏反應法，觀察試驗小鼠自身對于蜜環菌提取物的免疫調節作用。該方法的試驗分組和試劑注射，與直接睡眠觀察法相同。按照國家標準進行試驗。

1.4.4 碳粒廓清試驗法

基于將特定濃度含碳粒溶液注入到小鼠靜脈中，讓其與小鼠血液結合，進而觀察小鼠重要臟器（肝、脾等）中免疫細胞的變化，該試驗可以在一定程度上反映小鼠免疫調節作用。

2 結果與分析

2.1 蜜環菌提取物對改善睡眠的影響

2.1.1 蜜環菌提取物對小鼠體重以及直接睡眠的影響

在進行其他試驗之前，需要通過小鼠體重變化特征，來判斷蜜環菌提取物對于小鼠本身是否有影響。試驗用不同分組的小鼠，4組小鼠體重變化詳見表1。

表1 蜜環菌提取物對小鼠體重的影響變化表Tab.1 Effect of Armillaria mellea extract on body weight of mice

如表1所示，灌喂30 d，小鼠體重變化沒有呈現統計學上的特征，說明蜜環菌提取物本身對于小鼠沒有致病性影響。通過觀察各組小鼠直接睡眠試驗，4個分組中的小鼠，在2 h內，均未發現明顯的直接睡眠情況。

2.1.2 蜜環菌提取物對戊巴比妥鈉睡眠的影響

蜜環菌提取物對戊巴比妥鈉睡眠的影響主要從3個方面來體現。

1)蜜環菌提取物在戊巴比妥鈉誘導睡眠時間試驗中的作用

時間上，試驗小鼠需要灌喂蜜環菌提取物30 d，戊巴比妥鈉誘導睡眠時間試驗的結果詳見表2。

表2 蜜環菌提取物對睡眠時長的影響Tab.2 Effects of Armillaria mellea extracts on sleep duration

由表2可知，空白對照組相比于試劑劑量組，戊巴比妥鈉誘導睡眠時間是比較短的，即說明攝入一定劑量可以讓戊巴比妥鈉誘導睡眠時間在一定程度上變長；對比3組不同劑量組的數據，也可以看出隨著劑量的增加，戊巴比妥鈉誘導睡眠時間也呈現出不斷增加的趨勢。

2）蜜環菌取物對戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗的影響

戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗，同樣是需要試驗小鼠灌喂蜜環菌提取物30 d，結果見表3。

表3 蜜環菌提取物對入睡率的影響Tab.3 Effect of Armillaria mellea on falling asleep rate

由表3可知，當蜜環菌提取物劑量升高時，小鼠的入睡比率有較為明顯的提升，而灌喂的不是蜜環菌提取物，是空白對照組的無菌蒸餾水時，小鼠的入睡比率是相對較低的。這可以說明，蜜環菌提取物在達到一定劑量之后，可以起到提高小鼠入睡比率的積極作用，對改善睡眠有促進影響。

3）蜜環菌提取物對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響

巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗，與前兩個試驗相似，需要試驗小鼠灌喂蜜環菌提取物30 d，結果見表4。

表4 小鼠蜜環菌提取物對巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗變化Tab.4 Changes in sleep latency test of Armillaria mellea extracts against barbituric sodium

由表4可知，當灌喂溶劑為無菌蒸餾水時，小鼠的入睡潛伏期是較長的，即小鼠需要較長的時間入睡。當灌喂蜜環菌提取物劑量逐步升高，可以明顯的看到小鼠的入睡潛伏期在不斷縮短，這就說明蜜環菌提取物對于縮短小鼠的入睡潛伏期有一定的促進作用，蜜環菌提取物劑量越高，小鼠入睡潛伏期越短，即小鼠入睡速度越快。

2.2 蜜環菌提取物對免疫作用調節的影響

2.2.1 蜜環菌提取物對小鼠遲發型超敏反應的免疫調節影響

遲發型超敏反應試驗過程中，除去空白對照組之外，其他小鼠都攝入了不同劑量的蜜環菌提取物。在試驗過程中，利用小鼠效應T細胞參與抗原反應，等待36 h～48 h之后，觀察小鼠的慢性炎癥癥狀，主要表現為局部出現血絲乃至紅腫，對患處進行觀察計量統計，結果見表5。

表5 蜜環菌提取物對遲發型超敏反應的影響Tab.5 Effects of Armillaria mellea extracts on delayed-type hypersensitivity

由表5可知，CK組幾乎未見反應，而不同劑量組的反應，隨著劑量的增大，紅腫效應也有增加的趨勢。這說明蜜環菌提取物的攝入，對于小鼠免疫細胞的針對性反應，有一定的正相關影響。

2.2.2 蜜環菌提取物對小鼠碳粒廓清試驗的免疫調節影響

碳粒廓清試驗過程中，包括空白對照組在內，對所有組別的小鼠靜脈血液中注入碳粒溶液，在碳粒與小鼠血液結合過程中，小鼠免疫細胞發揮功效。在此過程中，除去空白對照組之外，其他組別的小鼠均攝入了不同劑量的蜜環菌提取物，通過對比小鼠血液中肝指數和淋巴指數的數值，以及計算碳粒廓清試驗的吞噬指數α和k值，詳見表6。

表6 蜜環菌提取物對碳粒廓清試驗的影響Tab.6 Effect of Armillaria mellea extract on carbon particle clearance test

由表6可知，空白對照組的數值相對較低，劑量組的數值隨著劑量的增加，呈現逐步增加的趨勢，這說明蜜環菌提取物的攝入，對于小鼠的免疫系統調節，產生了積極影響。

3 結論

通過小鼠對蜜環菌提取物的攝取，引入4種睡眠試驗，判斷蜜環菌提取物對于小鼠睡眠的影響和作用。首先，試驗小鼠的自身重量，隨著蜜環菌提取物劑量的增加，有不斷增加的趨勢，初步判斷蜜環菌提取物對于小鼠并無致病性負面影響。然后開展的4種睡眠試驗，直接睡眠試驗法并沒有在試驗結果數據中，找到明顯的小鼠睡眠相關性支撐。在隨后的3種戊巴比妥鈉睡眠試驗中，戊巴比妥鈉誘導睡眠試驗的結果說明攝入一定劑量蜜環菌提取物可以延長戊巴比妥鈉誘導睡眠時間，對比數據，也可以看出隨著劑量的增加，戊巴比妥鈉誘導睡眠時間變長；蜜環菌提取物劑量升高時，小鼠的入睡比率有較為明顯的提升，蜜環菌提取物在達到一定劑量之后，可以起到提高小鼠入睡比率的積極作用，對改善睡眠有促進影響；巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗的結果，也呈現出蜜環菌提取物劑量逐步升高，小鼠的入睡潛伏期在不斷縮短，蜜環菌提取物對于縮短小鼠的入睡潛伏期有一定的促進作用，隨著蜜環菌提取物劑量越高，小鼠入睡潛伏期越短，即小鼠入睡速度越快。由此，可以看出，蜜環菌提取物，在試驗小鼠過程中，達到一定劑量的時候，對于小鼠的睡眠起到了較為明顯的改善效果。

由此可見，蜜環菌提取物在飽含大量的生物益生特質基礎上，蜜環菌常見的藥用價值，與本文的試驗結果均呈現出良好的一致性，即規定劑量的蜜環菌提取物對于改善睡眠以及免疫系統的調節，都有較為積極的影響。