白靈菇多糖對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)大鼠抗疲勞及抗氧化作用探析*

續(xù)延軍

（鶴壁職業(yè)技術(shù)學(xué)院體育運(yùn)動(dòng)學(xué)院，河南 鶴壁 458030）

白靈菇（Pleurotus nebrodensis） 又稱為阿魏蘑、阿魏側(cè)耳、阿魏菇，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值。通過(guò)相關(guān)臨床研究顯示[1]，白靈菇中浸提的白靈菇多糖，具有一定的活性成分，能起到降血糖、降血壓、調(diào)節(jié)血脂的功效。依據(jù)運(yùn)動(dòng)學(xué)專家的相關(guān)觀點(diǎn)，力竭訓(xùn)練將會(huì)導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)員機(jī)體釋放出大量自由基，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生較大的不良影響，若自由基未能及時(shí)清理，則將在較大程度上影響運(yùn)動(dòng)能力[2]。為證明白靈菇多糖對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)后的抗疲勞和清除自由基作用，研究將選取Wistar雄性大鼠作為試驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行論證探討。

1 資料與方法

1.1 材料與設(shè)備

選取250只Wistar雄性大鼠，質(zhì)量為150g～170 g，平均質(zhì)量為（160.1±10.3） g，在試驗(yàn)過(guò)程中使其自由飲水?dāng)z食。選購(gòu)蘭考金菇園食品有限公司的白靈菇，選擇超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、巰基-SH、丙二醛（MDA）、一氧化氮合酶（NOS）、一氧化氮（NO）、鈣鎂離子三磷酸腺苷酶（Ca2+/Mg2+-ATPase）、鈉鉀離子三磷酸腺苷酶（Na+/K+-ATPase）等物質(zhì)的試劑盒。

使用RE型蒸發(fā)器、UV7502PCS型分光光度計(jì)、TD型離心機(jī)、GM-33A型真空抽濾泵與HH-4型恒溫水浴鍋等試驗(yàn)設(shè)備。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 白靈菇多糖制備

稱取一定量的白靈菇子實(shí)體清洗后，在40℃恒溫箱烘干，粉碎至160目，使用95%乙醇使其脫脂，后添加20 mL純凈水，100℃溫度下浸提2 h，過(guò)濾、濃縮得到浸提液；后添加20 mL的乙醇，置于4℃沉淀多糖，進(jìn)行約2 000 r·min-1離心30 min，使用Sevage法去除多余蛋白質(zhì)，并予以濃縮、凍干，放置于-20℃冰箱中待用。

1.2.2 試驗(yàn)分組

將所選大鼠分為對(duì)照組（I）、力竭組（II）、力竭休息組（III）、白靈菇多糖力竭組（IV）、白靈菇多糖力竭休息組（V）共5組，白靈菇多糖組大鼠每日灌胃80 mg的多糖水溶液30 d，I組、II組、III組分別連續(xù)灌胃30 d生理鹽水，末次灌胃30 min后進(jìn)行試驗(yàn)檢測(cè)。參照Bedford模型，使其進(jìn)行30 d跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)，前 1 d～5 d，運(yùn)動(dòng)速率為 16.0 m·min-1，坡度為0，運(yùn)動(dòng)時(shí)間為25 min；6 d～10 d，速率為16.2 m·min-1，坡度為 5°，運(yùn)動(dòng)時(shí)間為 25 min，耗氧量為（57.5±1.4） mL·kg-1min-1；11 d～15 d，速率為16.2 m·min-1，坡度為 5°，運(yùn)動(dòng)時(shí)間為 35 min，耗氧量為（57.5±1.4） mL·kg-1min-1；16 d～20 d，速率為27.8 m·min-1，坡度為 5°，運(yùn)動(dòng)時(shí)間為 35 min，耗氧量為（73.4±2.6） mL·kg-1min-1；21 d～25 d，速率為27.8 m·min-1，坡度為 5°，運(yùn)動(dòng)時(shí)間為 35 min，耗氧量為（73.4±2.6） mL·kg-1min-1；26 d～30 d，速率為27.8 m·min-1，坡度為 10°，運(yùn)動(dòng)時(shí)間為 25 min，耗氧量為（80.1±3.2） mL·kg-1min-1。最后 1 次運(yùn)動(dòng)結(jié)束后，在安靜狀態(tài)下處死I組大鼠；IV組與V組大鼠每日運(yùn)動(dòng)后灌胃白靈菇多糖；最后一次力竭運(yùn)動(dòng)后，處死II組與IV組大鼠，使III組與V組大鼠均休息12 h后再進(jìn)行處死。

1.2.3 試驗(yàn)材料處理

各組大鼠處死前8 h禁飲，處死后立即提取適量的肝組織破碎得到肝勻漿，后于4℃，2 000 r·min-1條件下離心20 min，除去沉淀部分，3 000 r·min-1離心20 min，獲得沉淀即為肝組織樣品，使用超聲波儀器對(duì)其予以破碎處理，待用。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

1.3.1 白靈菇多糖對(duì)大鼠抗氧化能力的影響

判斷是否力竭應(yīng)觀察大鼠運(yùn)動(dòng)時(shí)，速度降低，臀部在籠體后壁，后肢體隨皮帶自然轉(zhuǎn)動(dòng)達(dá) 30 s，利用電刺激方法沒(méi)有效果，可判斷為力竭[3]。使用前期處理大鼠肝組織參照說(shuō)明書進(jìn)行GSH-Px、NOS、-SH、MDA、NO、SOD等活性物質(zhì)的測(cè)定。

1.3.2 白靈菇多糖對(duì)大鼠NO-NOS、ATPase活性的影響

大鼠所獲肝組織材料按南京建成生物有限公司提供試劑盒的說(shuō)明進(jìn)行NO-NOS，ATPase等物質(zhì)檢測(cè)，以每毫克蛋白每小時(shí)新產(chǎn)生的無(wú)機(jī)磷的微摩爾數(shù)為一個(gè)酶的活性單位，即1 μmol·mg-1h-1。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s） 表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布者轉(zhuǎn)換為正態(tài)分布后行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 白靈菇多糖對(duì)大鼠抗氧化能力的影響

白靈菇多糖對(duì)大鼠抗氧化能力情況見表1。

由表1所示，運(yùn)動(dòng)力竭試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)后，II組、III組的GSH-Px活力、SOD活力與-SH含量明顯低于I組，MDA水平明顯高于I組，V組抗氧化指標(biāo)要比II組、III組有顯著提高，與I組相當(dāng)；與II組相比，IV組的各項(xiàng)指標(biāo)顯著恢復(fù)，但差于I組。

2.2 白靈菇多糖對(duì)大鼠NO-NOS、ATPase活性的影響

白靈菇多糖對(duì)大鼠NO-NOS、ATPase活性的影響見表2。

由表2所示，服用白靈菇多糖后，NOS活力及NO含量、線粒體Na+/K+-ATPase、Ca2+/Mg2+-ATPase活力明顯低于I組，但高于II組；休息12 h后NOS活力、NO含量和線粒體指標(biāo)與I組一致，但人高于II組、III組與 IV 組，差異顯著（P＜0.05）。

表1 白靈菇多糖對(duì)大鼠抗氧化能力的影響Tab.1 Effect of Pleurotus nebrodensis polysaccharide on antioxidant capacity of rats

表2 白靈菇多糖對(duì)大鼠NO-NOS、ATPase活性的影響Tab.2 Effects of Pleurotus nebrodensis polysaccharide on NO-NOS and ATPase activities in rats

3 討論

依據(jù)相關(guān)的臨床研究顯示[3]，白靈菇多糖具有較強(qiáng)的還原力，且能夠?qū)PPH·、超氧陰離子與羥基自由基具有良好的清除效果，除此之外，還能抑制脂質(zhì)過(guò)氧化，原因在于白靈菇多糖分子上的醇羥基能夠與自由基產(chǎn)生作用，從而具有較強(qiáng)的還原力，醇羥基能夠傳遞質(zhì)子與電子，能與DPPH·進(jìn)行結(jié)合，其活性基團(tuán)能與金屬離子反應(yīng)，可清除超氧陰離子與羥基自由基[4]。當(dāng)對(duì)大鼠使用白靈菇多糖后，GSH-Px活力、SOD活力與-SH含量明顯提升，MDA含量明顯降低，表明白靈菇多糖具有良好的增強(qiáng)機(jī)體抗氧化的能力；肝組織線粒體Na+/K+-ATPase、Ca2+/Mg2+-ATPase活力明顯提升，休息12 h后，NOS活力、NO含量恢復(fù)正常，說(shuō)明白靈菇多糖具有良好的提升機(jī)體恢復(fù)的能力，原因在于白靈菇多糖能夠在較大程度上清除DPPH·、超氧陰離子與羥基自由基，因而能夠獲得上述良好的效果。

通過(guò)研究，認(rèn)為白靈菇多糖能夠增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，并且能夠增強(qiáng)機(jī)體的恢復(fù)能力，可作為力竭運(yùn)動(dòng)后快速恢復(fù)的首選物質(zhì)，但其實(shí)際運(yùn)用仍然需要進(jìn)行進(jìn)一步的研究。