復脈口服液的制備及質量控制分析

王澤鳳

新鄉市中心醫院藥學部，河南 新鄉 453000

復脈口服液由黃芪、黨參、當歸等藥材組成，具有益氣養血、化瘀復脈效果，可用于治療胸痹心悸，同時對心慌、氣短、乏力、頭暈、脈促結代等癥狀具有改善效果。本次研究通過正交試驗確定該口服液制備工藝，并對其成分進行薄層定性鑒別及定量分析研究，旨在為復脈口服液質量控制提供依據。

1 制備

1.1 材料與儀器

1.1.1 處方：黃芪20 g、黨參15 g、當歸12 g、白芍12 g、桃仁12 g、赤芍12 g、葛根20 g、杏仁9 g、石菖蒲15 g、炙甘草10 g。

1.1.2 試劑：濃硫酸（分析純）、6%苯酚、80%苯酚、5%三氯乙酸、15%三氯乙酸、6 mol/L鹽酸、6 mol/L氫氧化鈉、標準葡聚糖、60%乙醇、乙酸乙酯、吡啶、醋酸、苯胺、臨苯二甲酸、黃芪甲苷對照品、阿魏酸對照品、芍藥苷對照品、苦杏仁苷對照品、葛根素對照品、β-細辛醚對照品、甘草酸對照品。

1.1.3 儀器：Sartorous十萬分之一電子分析天平（型號：CP225D）、旋轉蒸發器（型號：RE-52A，上海亞榮生化儀器廠）、紫外可見分光光度計（型號：Evolution201，美國Thermo公司）、高速離心機（型號：JW-2018H，安徽嘉文儀器裝備有限公司）、電子恒溫水浴鍋（型號：HH-S4型）、薄層成像儀（型號：ViSuALiZER2，瑞士卡瑪公司）、薄層色譜自動點樣儀（型號：AS30，德國Biostep公司）。

1.2 方法與結果

1.2.1 測定藥材浸泡時間及吸水量：按處方比例稱取相應藥材，以水浸泡，水量沒過所有藥材，分別浸泡0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、2.5 h、3 h、3.5 h、4 h、4.5 h、5 h，測定各時點藥材吸水量，當吸水量無明顯變化時認為藥材浸泡完全。藥材吸水量=（藥材濕重-藥材干重）/藥材干重。當藥材浸泡2 h后吸水量趨于穩定，浸泡4 h后吸水量不再變化。

1.2.2 確定正交試驗因素水平：按處方比例稱取相應藥材，加水浸泡2 h，采用水煎煮法。以料液比、提取時間、提取次數為試驗因素，分別選擇3個水平，見表1。

表1 因素水平

1.2.3 濃縮提取液：應用旋轉蒸發器減壓蒸發濃縮提取液，加熱提取液至沸騰，使溶媒分子逸出，再將其冷凝后排出，將提取液濃縮至一定體積的樣品。

1.2.4 測定指標性成分含量：采用苯酚—硫酸法測定樣品中總多糖含量（黃芪多糖、黨參多糖、當歸多糖、白芍多糖、桃仁多糖、赤芍多糖、葛根多糖、杏仁多糖、石菖蒲多糖、甘草多糖）。稱取標準葡聚糖20 mg于容量瓶，加蒸餾水至 500 ml，分別吸取 0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1 ml、1.2 ml、1.4 ml、1.6 ml、1.8 ml后各自加蒸餾水補至 2 ml，加入6%苯酚1 ml，搖勻，加入濃硫酸5 ml，冷卻，沸水浴顯色，冷卻，于490 nm測光密度。繪制標準曲線。取樣品1g加15%三氯乙酸1 ml研磨，再加少許5%三氯乙酸研磨，取上清液于離心管，再加少許5%三氯乙酸研磨，取上清液，重復3次，最后將所要樣液倒入離心管，離心后取上清液，水浴2 h，冷卻后定容取樣，于490 nm測光密度。以標準曲線計算多糖含量，并記錄。

1.2.5 確定制備工藝：列出正交試驗表，并對試驗結果進行方差分析。可知提取液總多糖含量影響最大的是C（提取次數），其次是A（料液比），最后是B（提取時間）。結合正交試驗結果及方差分析結果，確定最佳制備工藝為A3B2C3，即料液比為12,10,10提取3次，每次提取2 h，見表2、表3。

表2 正交試驗結果

表3 正交試驗結果方差分析

2 質量控制分析

2.1 薄層色譜分析

根據上述最佳制備方案制取復脈口服液樣品，采用薄層色譜法測定樣液中黃芪甲苷、蒼術內酯Ⅲ、阿魏酸、芍藥苷、苦杏仁苷、葛根素、β-細辛醚、甘草酸含量。取樣品液10μl，應用薄層點樣儀點樣，采用乙酸乙酯—吡啶—醋酸—水（7:3:0.2:1.4）展開劑展開，取出吹干，應用苯胺—臨苯二甲酸顯色劑顯色，應用薄層掃描儀于370 nm下掃描行定量分析。

2.2 線性關系

稱取黃芪甲苷對照品、蒼術內酯Ⅲ對照品、阿魏酸對照品、芍藥苷對照品、苦杏仁苷對照品、葛根素對照品、β-細辛醚對照品、甘草酸對照品各10 mg，加60%乙醇溶液10 ml定容，制作混合對照品液。分別吸取混合對照品液 0.5 ml、1 ml、1.5 ml、2 ml、2.5 ml、3 ml至容量瓶，加60%乙醇溶液至10 ml定容，點樣、展開、顯色、掃描。測得y（峰面積），與x（進樣質量，μg）行線性回歸分析，結果發現上訴8種化合物線性關系良好（r＞0.99）。同時逐級稀釋混合對照品液，測得各化合物檢測限為0.02 μg～0.12μg，定量限為0.06μg～0.38μg，見表4。

表4 幾種化合物線性回歸結果、檢測限、定量限

2.3 精密度試驗

同一混合對照品液在同一張板點8個樣、展開、顯色、掃描得峰面積，測同板精密度；同一混合對照品液在8張板上點樣、展開、顯色、掃描得峰面積，測異板精密度。結果顯示同板精密度試驗峰面積RSD為2.7%～6.2%，異板精密度試驗峰面積RSD為5.9%～8.3%，精密度良好。見表5。

2.4 穩定性試驗

取1份復脈口服液樣品，進行薄層色譜分析，顯色后0 min、5 min、10 min、15 min、20 min、25 min、30 min應用薄層色譜掃描儀測量峰面積，以各化合物峰面積RSD為評價指標，考察穩定性。結果顯示各化合物峰面積RSD為0.5%～2.4%，穩定性良好。見表5。

2.5 重復性試驗

取8份復脈口服液樣品，分別進行8次薄層色譜分析，計算各化合物含量，以8次測量各化合物含量結果RSD為評價指標，考察重復性。結果顯示各化合物含量RSD為2.1%～6.4%，重復性良好，見表5。

2.6 加樣回收率試驗

取8份復脈口服液樣品，每份2 ml，分別加入黃芪甲苷對照品、蒼術內酯Ⅲ對照品、阿魏酸對照品、芍藥苷對照品、苦杏仁苷對照品、葛根素對照品、β-細辛醚對照品、甘草酸對照品2 mg，應用薄層色譜分析，測得各化合物含量。回收率=（測定含量-供試液理論含量）/加入對照品量×100%。進行3次測驗取平均值，結果顯示各化合物回收率為93.4%～99.7%，回收率良好，見表5。

3 討論

中藥材在煎煮前需先浸潤藥材，以便有效成分滲透至水中［2］。本次研究發現，復脈口服液處方藥材浸泡2 h后吸水量趨于穩定，浸泡4 h后吸水量不再變化，綜合考慮工效等因素，建議煎煮前浸泡藥材2 h。中藥生產濃縮方式普遍采用蒸發濃縮，包括常壓蒸發濃縮及減壓蒸發濃縮［3］。本次研究提取液體積較大，常壓蒸發濃縮耗時長且所需溫度高，因此采用減壓蒸發濃縮。經過正交試驗，比較不同制備工藝下提取液中總多糖含量，最終本次研究確定該口服液最佳制備工藝為在料液比12,10,10基礎上提取3次，每次提取2 h。

黃芪主要藥理有效成分有黃芪皂苷、黃芪多糖、黃酮類等，具有免疫調節、降血糖、抗病毒等作用，同時可通過調節樹突狀細胞的功能狀態，從而影響動脈粥樣硬化的發生、發展，因其多重功效，在心腦血管疾病中多有應用［4］。黨參主要藥理有效成分有黨參皂苷、黨參多糖等，對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼、羥自由基、超氧陰離子具有清除能力，具有抗氧化、增強免疫力、擴張血管、增強造血功能等作用［5］。當歸主要藥理有效成分有當歸多糖、苯酞類二聚體、阿魏酸等，可顯著提高造血干細胞的增殖、分化，并延緩其衰老，具有免疫促進、造血功能等作用［6］。白芍主要藥理有效成分有芍藥苷、白芍苷R1、白芍多糖等，可促進NO合成釋放，舒張血管平滑肌，增加心肌營養性血流量，且能促進人骨髓成纖維樣基質細胞系（human bone marrow fibroblastoid stromal cellline，HFCL）由G0/G1期進入S期，促進HFCL的能量代謝，具有補血、抗炎、抗氧化、改善微循環等作用［7］。桃仁主要藥理有效成分有氰苷、苦杏仁苷、壬酸等，可調節脂類代謝，抑制血清中乳酸脫氫酶、肌酸磷酸激酶升高，改善心肌損傷，具有抗凝、抗血栓、改善血流動力學等作用［8］。赤芍主要藥理有效成分有赤芍總苷、亞油酸乙酯、棕櫚酸乙酯等，可調節多種心肌酶、超氧化物歧化酶、脂質氧化產物水平，維持細胞內外環境平衡，抑制凋亡基因、促凋亡基因表達，保護心肌功能，還可降低血液粘度、血小板聚集、纖維蛋白原量、紅細胞聚集指數等，延長凝血酶原時間、活化部分凝血酶原時間，具有保肝、擴血管、抗氧化、抗血栓、抗腫瘤、抗內毒素、神經保護、心臟保護等作用［9］。葛根主要藥理有效成分有葛根素、大豆苷、葛根多糖等，具有擴血管、抗心律失常等作用［10］。杏仁主要藥理成分有苦杏仁苷、脂肪油、蛋白質等，具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗動脈粥樣硬化作用［11］。石菖蒲主要藥理成分有木脂素、細辛醚，可抑制心肌損傷標記物如過氧化物酶、心肌肌鈣蛋白等的表達及活性，可增強心肌功能，具有降脂、抗炎、抗腫瘤、免疫增強、心臟保護等作用［12］。炙甘草主要藥理成分有甘草酸、甘草苷等，具有抗心律失常、抗炎、鎮痛、免疫調節等作用［13］。

綜合分析復脈口服液組方各中藥材的主要藥理成分后，將黃芪甲苷、蒼術內酯Ⅲ、阿魏酸、芍藥苷、苦杏仁苷、葛根素、β-細辛醚、甘草酸作為質量控制分析指標，本次研究亦證明水性藥液中含有上述有效成分。薄層色譜分析具有簡單、低成本、靈敏度高等優點，且能同時進行多樣本分析，不同化合物能以不同顏色顯示，且具有較高分離度，便于區分［14］。同時本次研究證明薄層色譜分析法，研究證明該方法精密度、穩定性、重復性均較好，可用于復脈口服液質量控制。通過薄層色譜分析顯示最佳工藝制備的復脈口服液樣液有效成分穩定且回收率高，質量較好。后續可進行相關動物實驗以探究該藥物具體療效與作用機制。