經(jīng)耳緣靜脈注射ADSCs修復(fù)兔SANFH的效果及細(xì)胞定植研究*

齊新文

遵義醫(yī)科大學(xué)第五附屬（珠海）醫(yī)院骨二科，廣東 珠海 519100

激素性股骨頭壞死（Steroid-induced avascular necrosis of the femoral head,SANFH）是因長(zhǎng)期大劑量應(yīng)用激素所引致的一種代謝性疾?。?］，其致殘性高，對(duì)社會(huì)產(chǎn)生較大影響［2］。因此，尋求針對(duì)SANFH有效的治療方法，具有重要的臨床意義［3］。本研究通過(guò)經(jīng)耳緣靜脈注射的方式移植經(jīng)Brdu標(biāo)記的脂肪干細(xì)胞（Adipose mesenchymal stem cells，ADSCs），觀察ADSCs在壞死股骨頭區(qū)的定植情況及其對(duì)SANFH的修復(fù)效果，試圖尋求一種有效干預(yù)SANFH的新方法，研究結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

45只體重為2.5～3.0 kg的雄性新西蘭大白兔，均為8月齡，于廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購(gòu)買(mǎi)，許可證號(hào)為SCXK(粵)20140035。各兔單獨(dú)分籠飼養(yǎng)，自由飲水及進(jìn)食飼料。實(shí)驗(yàn)中所有操作與動(dòng)物倫理學(xué)要求相符。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器

溴脫氧尿嘧啶核苷（Bromodeoxyurdine，BrdU）（廣州璽美生物科技有限公司）；馬血清（SH30074.03，Hyclone）；DMEM培養(yǎng)基（SH30243.01，Hyclone）； 125mg注射用甲基強(qiáng)的松龍（武漢新星生物藥業(yè)有限公司）；離心機(jī)（Thermo-ST16,上海仁器儀器公司）;石蠟切片機(jī)（RM2235,德國(guó)Leica公司）；電子顯微鏡（日本尼康公司）。

1.3 方法

1.3.1 建立兔激素性股骨頭壞死模型：從實(shí)驗(yàn)兔中隨機(jī)選取3只兔作分離ADSCs用，均不用于造模，余42兔作為建模兔。將各建模兔經(jīng)耳緣靜脈注射10 ml/kg馬血清，3周后各兔經(jīng)耳緣靜脈注射5 ml/kg馬血清。最后一次注射馬血清后兩周，經(jīng)腹腔注射5 ml/kg甲基強(qiáng)的松龍，連續(xù)注射3 d，兩周后各建模兔麻醉后完善髖部正位片及髖部磁共振成像（Magnetic Resonance Imaging，MRI）檢查了解股骨頭情況。以髖關(guān)節(jié)正位片見(jiàn)股骨頭密度欠均勻、囊性變，同時(shí)髖部MRI見(jiàn)股骨頭軟骨下帶狀低信號(hào)，關(guān)節(jié)積液增多，認(rèn)為兔激素性股骨頭壞死模型建立成功［4］。……