復合枯草芽孢桿菌制劑對肉雞生長性能的影響

袁麗紅，王乙茹，錢錦花，楊向東，程志斌*

（1.云南農業大學，昆明 650201；2.玉溪農業職業技術學院，云南 玉溪 653100；3.昆明云嶺廣大種禽飼料有限公司，昆明 650200）

飼用抗生素耐藥、殘留、安全等問題促使我國農業部定于2020 年7 月禁止一切以促生長為目標的藥物添加劑在畜禽飼料中使用[1-2]。因此，飼用益生菌等安全飼料添加劑的開發成為當前飼料行業的熱點[3-4]。枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）是最早研發與應用于畜禽飼料的飼用益生菌[5]。大量研究表明，枯草芽孢桿菌主要通過分泌多種水解酶類補充腸道消化酶[6-7]，通過抑制有害菌調控腸道菌群平衡[8-10]，這些益生作用可改善畜禽營養攝入及健康狀況，有利于維持和保障畜禽正常的生產性能[11-13]。

本課題組篩選了2株枯草芽孢桿菌，枯草芽孢桿菌-I 有較強的消化酶分泌能力，但無明顯的抑菌作用；枯草芽孢桿菌-Ⅱ是1 株具有抑制多種腸道有害菌的特殊菌株。鑒于飼喂單一功效的枯草芽孢桿菌已有大量試驗報道，因此本試驗將篩選的2株枯草芽孢桿菌組合以評估復合枯草芽孢桿菌制劑對肉雞的飼喂效果，旨在指導肉雞養殖生產中更好的選用商業枯草芽孢桿菌制劑產品。

1 材料與方法

1.1 試驗用枯草芽孢桿菌及其益生作用的評估

枯草芽孢桿菌-Ⅰ和枯草芽孢桿菌-Ⅱ由課題組前期篩選。開展動物飼喂試驗之前，經實驗室評估2株枯草芽孢桿菌的產酶及抑菌益生作用，見表1。產酶益生作用的評估方法參考陶榮霞[14]的報道，以飼料原料小麥麩皮為培養基接種待測定的2株枯草芽孢桿菌，37 ℃下48 h 培養后，測定蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶的活力[14]。抑菌益生作用采用體外抑菌實驗的牛津杯法，參考朱沛霽[15]的報道。

表1 試驗用枯草芽孢桿菌的產酶及抑菌益生作用

1.2 試驗動物

216只1日齡AA肉公雞分成3個組，如下：Ⅰ組，飼喂基礎飼糧；Ⅱ組，在基礎飼糧中添加300 g·t-1枯草芽孢桿菌-Ⅰ（1×1010cfu·g-1）；Ⅲ組，在基礎飼糧中添加300 g·t-1復合枯草芽孢桿菌制劑（5×109cfu·g-1枯草芽孢桿菌-Ⅰ和5×109cfu·g-1枯草芽孢桿菌-Ⅱ）。每個處理組12 個重復，每個重復6只雞，飼喂試驗周期21 d。

1.3 試驗飼糧

試驗飼糧參照NRC（1994）肉雞營養需要量配制，基礎日糧組成及營養水平見表2。3 組試驗飼糧中均不添加藥物飼料添加劑及其他飼用益生菌、功能性替抗添加劑。

1.4 飼養管理

試驗前，對雞舍及雞籠等相關養殖設施設備器具進行徹底的沖洗和消毒，通風凈化后再開始試驗。雛雞進舍前24 h 雞舍升溫，控制溫度不低于34 ℃。投喂試驗飼糧3 次·d-1，自由采食和飲水。育雛第1 周溫度為31～34 ℃，第2 周28～30 ℃，第3 周26～29 ℃。按場內常規免疫程序執行。勤觀察試驗雞的健康狀況，及時記錄處理。

1.5 測定指標

以每個重復為單位統計肉雞的初重、末重及采食量，計算21 d 內的平均日增重、平均日采食量、料重比。試驗雞均帶有腳標，發現敷肛的腹瀉雞做好腳標記錄，并用溫水清洗處理。死淘雞（包括：死亡和異常生理淘汰的雞）如實記錄。

1.6 統計分析

試驗數據利用SPSS 軟件中的單因素方差分析模塊，選用LSD法進行統計，P＞0.05差異顯著。

2 結果與分析

2.1 復合枯草芽孢桿菌對AA肉雞生長性能的影響

表3 結果顯示，Ⅲ組肉雞的料重比顯著低于I與Ⅱ組（P＜0.05），且I 與Ⅱ組的料重比差異不顯著（P＞0.05）。此外，末重、平均日增重、平均日采食量等生長性能指標，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組之間統計差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 復合枯草芽孢桿菌對AA肉雞腹瀉與死亡情況的影響

由表4結果可知，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組肉雞的腹瀉率分別為8.3%、16.7%、9.7%；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組肉雞的死淘率分別為4.2%、8.3%、1.4%。由此可見，Ⅲ組添加復合枯草芽孢桿菌的肉雞群體健康狀況最好。

表2 基礎日糧組成及營養水平

表3 枯草芽孢桿菌對AA肉雞生長性能的影響

表4 枯草芽孢桿菌對AA肉雞腹瀉與死亡情況的影響

3 討論

待飼喂的枯草芽孢桿菌-Ⅰ和枯草芽孢桿菌-Ⅱ的產酶與抑菌益生作用評估結果顯示（表1），枯草芽孢桿菌-Ⅰ能夠產較高的蛋白酶以及極其少量的纖維素酶，這說明枯草芽孢桿菌-Ⅰ主要產蛋白酶為主，該菌株產蛋白酶的益生作用與陶榮霞[14]、竺禮斌[16]和宋鵬等[17]的報道一致。枯草芽孢桿菌-Ⅱ能夠抑制大腸桿菌、雞沙門氏菌、產氣莢膜梭菌、金黃色葡萄球菌，該菌株抑菌的益生作用與朱沛霽[15]、許國洋等[18]和張媛媛等[19]的報道一致。此外，枯草芽孢桿菌-I 無抑菌作用，枯草芽孢桿菌-Ⅱ只能分泌很少的蛋白酶、幾乎不分泌淀粉酶、脂肪酶和纖維素酶。上述結果表明，不同的枯草芽孢桿菌菌株，其益生作用差異較大，這與大量的前人綜述報道一致[5,20-21]。進一步推測，這可能是動物飼喂試驗生產性能差異的主要原因，據此本研究進一步開展了動物試驗以驗證這一推測。

無抗日糧條件下，與對照組相比，單一添加枯草芽孢桿菌-Ⅰ的肉雞生長性能無改善作用（P＞0.05，表3）。該研究結果與朱金林等和胡長慶等的報道一致[22-23]。朱金林等研究發現，與對照組相比，飼用枯草芽孢桿菌對1～21 日齡肉雞的平均日增重、平均日采食量、料重比等生長性能指標無顯著影響[22]。胡長慶等也表明，他們篩選飼喂的4 株枯草芽孢桿菌對1～21 日齡肉雞的平均日增重無明顯改善[23]。課題組推測枯草芽孢桿菌-Ⅰ雖有產酶功能，但要發揮補充腸道內源酶不足的益生作用，顯然受到肉雞正常腸道消化酶分泌及飼料原料選擇和營養水平的影響[22-23]。幼齡肉仔雞生理各項功能發育不健全，良好的生長性能恰恰不僅僅受到營養的影響，更直接面臨環境各種病原菌的危害，易發多種腹瀉、感染等腸道疾病，造成幼齡肉仔雞死亡及生長性能下降[24]。由于枯草芽孢桿菌-Ⅰ沒有抑菌益生作用，這可能是單一添加枯草芽孢桿菌-Ⅰ的肉雞生長性能沒有改善的關鍵原因。

與對照組相比，添加復合枯草芽孢桿菌的肉雞料重比顯著降低（P＜0.05，表3）。研究結果與趙希彥和潘康成等的報道一致[25-26]。趙希彥發現，在飼料中添加枯草芽孢桿菌使1～21 日齡肉雞飼料轉化效率顯著提高[25]。根據潘康成等的研究結論，飼用枯草芽孢桿菌改善肉雞料重比的效果，前期（1～21日齡）優于后期（22～42日齡）[26]。本試驗用的復合枯草芽孢桿菌中含有一株能夠顯著抑制肉雞腸道有害菌沙門氏菌、產氣莢膜梭菌、大腸桿菌的枯草芽孢桿菌-Ⅱ（表1），這可能是該組肉雞獲得良好生產性能的直接原因。

胡均等和陳彩文等的報道顯示，添加枯草芽孢桿菌可顯著增加肉雞成活率[9,27]。本次研究結果也顯示（表4）：復合枯草芽孢桿菌組肉雞的腹瀉率和死淘率顯著低于對照組和單一枯草芽孢桿菌-Ⅰ組。秦瑤等篩選了2株能夠抑制沙門氏菌和大腸桿菌的枯草芽孢桿菌菌株，且證明大部分枯草芽孢桿菌菌株以分泌消化酶的益生作用為主，獲得抑菌益生作用的特定菌株較難[28]。劉秀俠等也報道支持這一觀點[29]。Zhang 等用篩選的有抑菌功效的枯草芽孢桿菌菌株（編號：UBT-MO2）添加入飼料，發現顯著抑制肉雞腸道中的有害菌，這與體外抑菌實驗結果相符[28-29]，是具有抑菌益生作用的特定枯草芽孢桿菌菌株改善肉雞生長性能的關鍵原因。以上研究報道與本研究結果基本一致。

4 結論

本研究表明，飼糧中添加復合枯草芽孢桿菌、尤其是含有能夠顯著抑制腸道有害菌的枯草芽孢桿菌菌株，能顯著改善無抗日糧條件下肉仔雞的飼料轉化效率與健康狀況，保障肉雞正常的生長性能。