腹腔鏡結直腸癌手術治療對結直腸癌患者血清中 miR-17、miR-21、miR-20a 和 miR-92 水平的影響

陳明干，丁新德，章波，朱松明

（上海交通大學醫學院附屬新華醫院崇明分院 普外科，上海 202150）

關鍵字：腹腔鏡結直腸癌手術；結直腸癌；miR-17；miR-21；miR-20a；miR-92

結直腸癌（colorectal cancer，CRC）是西方國家癌癥死亡的第二大常見原因[1]。作為一種異質性疾病，CRC 因為多種遺傳和表觀遺傳改變的積累而發生發展，這些改變使全球基因表達譜得到拓展[2]。正是這種遺傳進展促成了CRC 的多樣性表型。miRNA 是最近發現的一類非編碼RNA，其通過降解靶向mRNA或通過類似于小干擾RNA 介導的基因沉默機制來調節基因表達[3]。ZHANG 等[4]研究發現，PRL-3 誘導的miR-21、miR-17 和miR-19a 能促進結腸癌的增殖和轉移。CHAI 等[5]發現，miR-20a 能夠靶向BNIP2，并在結直腸腺癌SW480 和SW620 細胞系中提供化療耐藥性。TSUCHIDA 等[6]發現，miR-92 是結腸癌中miR-17-92 簇的關鍵致癌成分。因此，本研究旨在探究腹腔鏡結直腸癌手術對CRC 患者血清中miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 水平的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納 入2015年6月－ 2018年6月 本 院 收 治 的CRC 患者120例作為研究對象。其中，男71例，女49例；年齡29 ～51歲，平均（39.13±9.37）歲。120例CRC 患者均經本院病理科證實。納入標準：術前結直腸腫瘤臨床分期為Ⅱ期及Ⅲ期者。排除標準：①同時患有其他癌癥者；②精神疾病者；③近3 個月經過化療放療的患者；④嚴重心、肝、腎功能損傷者。兩組患者一般資料比較，差異無統計學意義（P ＞0.05），具有可比性。受試者均簽署知情同意書。

1.2 手術方法

采用腹腔鏡結直腸癌手術。基于加速康復外科理念，患者在術前8 h 內禁食、4 h 內禁飲，手術前1晚口服洗腸散清潔腸道。在腫瘤下方切斷封閉直腸，保證切緣和腫瘤的距離足夠，中高位結直腸癌大于5cm，低位結直腸癌大于3cm。修理結腸系膜血管，距腫瘤預切點置入荷包鉗，切除、移去標本，檢查近端結腸的血運情況以及吻合的長度是否足夠，必要時繼續游離結腸脾曲。游離結腸脾曲時，將橫結腸向右側牽引，降結腸向內側牽引，超聲刀切斷脾結腸韌帶以及部分胃結腸韌帶。收緊結扎荷包線，放入腹腔，縫合關閉左下腹橫切口。重新建立氣腹。擴肛，碘伏水沖洗直腸腔，圓形吻合器經肛門于直腸切割線附近刺穿，與抵釘座對合，完成吻合。用50 ml 注射器往直腸腔內注氣。沖洗及引流管放置重建氣腹，反復以生理鹽水沖洗盆腔，確切止血，盆底腹膜可不關閉，腹腔鏡監視下將腹腔引流管放到直腸膀胱陷凹。

1.3 觀察指標

1.3.1 實時熒光定量PCR（RT-qPCR） 采集120例CRC 患者行腹腔鏡結直腸癌手術前8 h 和術后24 h時的肘前部靜脈血5 ml。采用紅細胞溶解法分離有核細胞，TRIZOL 法抽取總RNA，RT-qPCR 法對血清中miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 水平進行相對定量檢測。引物序列見表1，交由北京擎科公司合成。

表1 目的基因和內參基因RT-qPCR 引物序列Table 1 Quantitative PCR primer sequence of target gene and internal reference gene

1.3.2 生活質量評分 采用生活質量核心調查問卷第3 版（quality of life core questionnaire version 3.0，QLQ-C30）評分，對患者行腹腔鏡結直腸癌手術前后軀體、認知、情緒、角色和社會功能評分進行認定。

1.4 統計學方法

采用SPSS 23.0 軟件進行統計學分析。計量資料用均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗，采用Pearson 相關系數確定相關性。P ＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患者手術前后QLQ-C30 評分比較

經過腹腔鏡結直腸癌手術治療后，患者的軀體、認知、情緒、角色和社會功能評分均得到明顯提高，差異有統計學意義（P ＜0.05）。見表2。

表2 患者手術前后QLQ-C30 評分比較 （分，±s）Table 2 Comparison of QLQ-C30 scores before and after surgery （score，±s）

表2 患者手術前后QLQ-C30 評分比較 （分，±s）Table 2 Comparison of QLQ-C30 scores before and after surgery （score，±s）

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2.2 手術前后患者血清miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 水平比較

經過腹腔鏡結直腸癌手術治療后，患者血清中miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 的相對水平均明顯下降，治療前后差異具有統計學意義（P ＜0.05）。見附圖。

2.3 手術前后患者QLQ-C30 評分變化與血清中miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 變 化 的 相關性

采用Pearson 相關系數對手術前后QLQ-C30評分變化與血清中miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 的變化進行相關性分析，結果顯示，miR-17、miR-20a 和miR-92 的相對表達量變化與QLQ-C30 評分變化有相關性（P ＜0.05），而miR-21 則無相關性（P ＞0.05）。見表3。

附圖 手術前后患者血清miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 水平比較Attached fig. Comparison of serum levels of miR-17, miR-21, miR-20a and miR-92 before and after surgery

表3 手術前后患者QLQ-C30 評分變化與血清中miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 變化的相關性Table 3 Correlation between changes of QLQ-C30 score and serum miR-17, miR-21, miR-20a and miR-92 before and after surgery

3 討論

CRC 是世界上第四大致命的癌癥，全球CRC 的死亡率約為50%[7]。許多國家的發病率逐年上升，這可能與飲食和生活習慣的改變有關[8]。腹腔鏡結腸直腸癌手術現已廣泛用于治療結直腸腫瘤，該手術在過去15年中使用率穩步增加[9-10]。本研究發現，采用腹腔鏡結直腸癌手術治療后，患者的軀體、認知、情緒、角色和社會功能評分均得到明顯提高，提示：腹腔鏡結直腸癌手術已成為外科醫生治療CRC 的重要工具，能夠有效改善患者身體狀況。

miRNA 屬于一類內源表達的約22 個核苷酸的非編碼小RNA[11]。這些小RNA 通過與蛋白質編碼基因的mRNA 配對來影響基因調控，通過降低翻譯效率或mRNA 水平來抑制基因表達[12]。有研究表明，miRNA 表達的失調有助于多種多樣的人類疾病的發生發展，包括CRC[13]。本研究采用腹腔鏡結直腸癌手術治療CRC，術后患者的健康狀況得到明顯改善，療效明顯。PRL-3 在結腸癌細胞中過表達，并且通過 激 活STAT3 誘 導miR-21、miR-17 和miR-19a 表達[4]，這些miRNA 有助于結腸癌細胞的增殖和加強侵襲性。然而，本研究中患者術后血清中miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 的相對水平均明顯下降，提示：腹腔鏡結直腸癌手術能夠減緩癌細胞增殖和侵襲。miR-20a 的調節改變了SW620 和SW480 細胞對化療藥物的敏感性；敲除miR-20a 使SW620 細胞對化學治療劑敏感，而在SW480 細胞中過表達miR-20a導致化學抗性[5]。提示：經腹腔鏡結直腸癌手術治療后，能夠有效降低耐藥性，使化療藥物敏感。最近的3 項研究[6，14-15]將miR-92 鑒定為miR-17-92 區域內的關鍵致癌介質，證明了miR-92 能抑制c-Myc 誘導的細胞凋亡，并通過c-Myc 抑制磷酸酶和張力蛋白同源物兩個腫瘤抑制因子來促進淋巴瘤形成，提示：腹腔鏡結直腸癌手術治療能使細胞的凋亡水平恢復到正常。本研究通過相關性分析發現，miR-17、miR-20a和miR-92 的相對表達量變化與QLQ-C30 評分變化有相關性（P ＜0.05），而miR-21 則無相關性（P ＞0.05），提示：患者血清中miR-17，miR-20a 和miR-92 水平可作為臨床評價療效的一種輔助標志物。

綜上所述，腹腔鏡結直腸癌手術治療后，能夠有效改善患者身體狀況，患者血清中miR-17、miR-20a和miR-92 的水平可以作為評估治療效果的潛在標志物。