不同底棲餌料對克氏原螯蝦生長、消化酶活性、血清生化指標(biāo)及肌肉營養(yǎng)成分的影響

姜愛蘭，王信海，金 倩，王飛飛，王夏雯，張智慧，吳學(xué)軍, 藺玉華

(江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 宿遷農(nóng)科所，江蘇 宿遷 223800)

克氏原螯蝦(Procambarusclarkii)，隸屬于甲殼綱(Cmstacea)、十足目(Decapoda)、螯蝦科(Cambaridae)、原螯蝦屬(Procambarus)，是一種原產(chǎn)于北美洲的淡水蝦類。由于其味道鮮美、營養(yǎng)豐富、價(jià)格相對低廉，越來越受到消費(fèi)者的喜愛，是現(xiàn)在世界上最主要的淡水螯蝦養(yǎng)殖種類之一，也已成為我國內(nèi)陸水產(chǎn)市場的主要產(chǎn)品，目前在我國十幾個(gè)省市的湖泊和溝渠中分布[1-3]。截止目前，有些學(xué)者對克氏原螯蝦的人工繁殖及成蝦的生長發(fā)育作了研究[4-5]，營養(yǎng)學(xué)上在蛋白質(zhì)、脂肪需求量、賴氨酸需求量、殼聚糖添加上做了一些工作[6-9]，而底棲餌料方面的研究較少。

目前，人工飼料已成為克氏原螯蝦養(yǎng)殖中的重要營養(yǎng)來源，但由此也通常造成營養(yǎng)的供給不當(dāng)，導(dǎo)致養(yǎng)殖成本增高、餌料系數(shù)增高、生長速度慢、蝦體免疫力低下及環(huán)境污染等問題，養(yǎng)殖效益明顯降低。因此，急需尋找新的飼料來源和養(yǎng)殖方法。而底棲生物餌料含豐富、全面的營養(yǎng)成分，且易消化，對環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)，是水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物理想的天然餌料。底棲生物可以降低餌料系數(shù)[10]、凈化水質(zhì)[11]、改良底質(zhì)[12]、提高蝦體免疫力和抗病力[13]。鑒于此，筆者開展了不同底棲餌料對克氏原螯蝦生長、消化、血清生化指標(biāo)和肌肉營養(yǎng)成分影響的研究，以期為克氏原螯蝦鮮活動(dòng)物性餌料的開發(fā)提供數(shù)據(jù)，進(jìn)而為克氏原螯蝦養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

克氏原螯蝦購自宿遷市玲瓏水產(chǎn)養(yǎng)殖專業(yè)合作社養(yǎng)殖基地。實(shí)驗(yàn)前將蝦先放于室內(nèi)直徑為2.0 m的玻璃鋼圓槽中暫養(yǎng)7 d，期間飼喂克氏原螯蝦配合飼料，暫養(yǎng)結(jié)束、禁食1 d后，選擇360尾健康、初始體質(zhì)量為(7.27±0.25)g的蝦苗隨機(jī)分為4組，分別為對照組D(投喂配合飼料)、實(shí)驗(yàn)組S1(投喂水絲蚓)、實(shí)驗(yàn)組S2(投喂搖蚊幼蟲)、實(shí)驗(yàn)組S3(投喂菱形螺)，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，共12個(gè)水族箱(80 cm×45 cm×45 cm)，每箱放養(yǎng)30尾蝦苗。配合飼料及各底棲餌料的營養(yǎng)成分見表1。

表1 配合飼料及各底棲餌料的營養(yǎng)組成(干物質(zhì)) %

1.2 飼養(yǎng)管理

在實(shí)驗(yàn)期間，每天投喂鮮活餌料可食部分兩次，時(shí)間為早上8:00和晚上18:00，分別占每天投喂量的40%和60%，日投喂量為蝦體重的5%，并根據(jù)攝食、生長情況加以調(diào)整。實(shí)驗(yàn)周期為60 d，實(shí)驗(yàn)用水為曝氣后的地下深井水，飼養(yǎng)期間用氣泵增氧，每天換1/3的水，清除殘餌和糞便，每天早晨測一次環(huán)境因子，養(yǎng)殖期間水溫控制在26～28 ℃，pH在7.5～8.0，DO≥6.0 mg/L。

1.3 樣品采集

實(shí)驗(yàn)結(jié)束、禁食1 d后，稱量各組蝦質(zhì)量，并記錄各組蝦的存活數(shù)。每組隨機(jī)選取6尾蝦，將蝦體水分用濾紙吸干，用1 mL的一次性注射器從蝦的頭胸甲后部刺入心臟，抽取血液。將抽取的血液置于2 mL Eppenddorf管中于4 ℃、5000 r/min離心10 min，取血清放于-20 ℃冰箱凍存以備測血清生化指標(biāo)(24 h內(nèi)測定)；隨后取其肝胰腺和全腸，去除腸道內(nèi)的內(nèi)容物，置于液氮中保存以備測消化酶活性；將采集完肝腸后的蝦體去除頭胸甲和背甲，取蝦肉用剪刀剪碎，均勻混合，放入冰箱(-20 ℃)中凍存以備測肌肉營養(yǎng)成分。

1.4 各項(xiàng)指標(biāo)測定

1.4.1 生長指標(biāo)測定 存活率(%)=實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)蝦的尾數(shù)/實(shí)驗(yàn)開始時(shí)蝦的尾數(shù)×100%

增重率(%)=[(實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)體質(zhì)量-實(shí)驗(yàn)開始時(shí)體質(zhì)量)/實(shí)驗(yàn)開始時(shí)體質(zhì)量]×100%

特定增長率(%/d)=(ln實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)體質(zhì)量- ln實(shí)驗(yàn)開始時(shí)體質(zhì)量)/實(shí)驗(yàn)期(d)×100%

1.4.2 消化酶活力測定 稱取肝胰腺和全腸，置于玻璃勻漿器中，按質(zhì)量體積比1∶9的比例加入4 ℃的去離子水制成組織勻漿，以4000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，取上清液測定消化酶活性。淀粉酶活性、胰蛋白酶活性及脂肪酶的活性均用南京建成生物研究所的試劑盒測定，測定步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4.3 血清生化指標(biāo)的測定 各項(xiàng)生化指標(biāo)(谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、甘油三酯、總膽固醇、總蛋白、白蛋白)采用南京建成生物研究所的試劑盒測定。

1.4.4 肌肉中營養(yǎng)成分測定 水分含量的測定采用常壓干燥法，粗蛋白質(zhì)含量的測定采用凱氏定氮法，粗脂肪含量的測定采用索氏抽提法，灰分含量的測定采用馬福爐灼燒法。

1.5 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理

實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析 (One-way ANOVA)，若有顯著性差異(P<0.05)則進(jìn)行Duncan’s多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同底棲餌料對克氏原螯蝦生長性能的影響

由表2可以看出，經(jīng)過兩個(gè)月的飼喂，與對照組相比，投喂底棲餌料的各實(shí)驗(yàn)組蝦的特定生長率均顯著提高(P<0.05)，各實(shí)驗(yàn)組的增重率都有提高，其中水絲蚓組的增重率顯著提高(P<0.05)，各組間的存活率無明顯差異。

表2 不同底棲餌料對克氏原螯蝦生長性能的影響

注:同一列數(shù)字后不同小寫字母表示組間差異顯著(P<0.05)。下同。

2.2 不同底棲餌料對克氏原螯蝦消化酶活性的影響

不同底棲餌料對克氏原螯蝦消化酶活性的影響如表3所示。由表3可以看出，飼喂底棲餌料的實(shí)驗(yàn)組克氏原螯蝦的胰蛋白酶和脂肪酶的活性均顯著高于對照組(P<0.05)，其中飼喂水絲蚓組胰蛋白酶的活性顯著高于搖蚊幼蟲組和菱形螺組(P<0.05)，飼喂底棲餌料各實(shí)驗(yàn)組的淀粉酶的活性均顯著低于對照組(P<0.05)。

2.3 不同底棲餌料對克氏原螯蝦血清生化指標(biāo)的影響

由表4可知，與對照組相比，各實(shí)驗(yàn)組蝦的總蛋白、白蛋白和甘油三酯含量均差異不顯著(P>0.05)，總膽固醇含量、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性均顯著降低(P<0.05)；各生化指標(biāo)在各個(gè)實(shí)驗(yàn)組間均無顯著差異(P>0.05)。

表3 不同底棲餌料對克氏原螯蝦消化酶活性的影響

表4 不同底棲餌料對克氏原螯蝦血清生化指標(biāo)的影響

2.4 不同底棲餌料對克氏原螯蝦肌肉常規(guī)成分的影響

從表5可知，飼喂底棲餌料的實(shí)驗(yàn)組的克氏原螯蝦肌肉的各常規(guī)營養(yǎng)成分均顯著高于對照組(P<0.05)，其中搖蚊幼蟲組的粗脂肪含量顯著高于水絲蚓組和菱形螺組(P<0.05)，水絲蚓組的灰分含量最高，顯著高于搖蚊幼蟲組和菱形螺組(P<0.05)。

表5 不同底棲餌料對克氏原螯蝦肌肉常規(guī)成分的影響 %

3 討論

3.1 不同底棲餌料對克氏原螯蝦生長性能的影響

蛋白質(zhì)是動(dòng)物生長過程中最為重要的營養(yǎng)成分，動(dòng)物的增重受食物中蛋白質(zhì)品質(zhì)的影響較大[14]，而在人工養(yǎng)殖條件下，水生動(dòng)物的增重主要來源于人工投喂的餌料，所以餌料的適口與否直接關(guān)系到水生動(dòng)物的存活和生長發(fā)育[15]，大量的生產(chǎn)實(shí)踐顯示，用鮮活的動(dòng)物性餌料投喂克氏原螯蝦，具有餌料系數(shù)低、存活率高、肉質(zhì)鮮美、生長速度加快等優(yōu)點(diǎn)[16]。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，克氏原螯蝦的生長受餌料的影響較大，飼喂底棲餌料的實(shí)驗(yàn)組克氏原螯蝦的增重率都有提高，特定生長率均顯著提高，其中投喂水絲蚓的實(shí)驗(yàn)組生長是最快的，存活率也是最高的。

水絲蚓因含大量蛋白質(zhì)、糖、脂肪和礦物質(zhì)，營養(yǎng)豐富，可作為水產(chǎn)養(yǎng)殖的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)飼料，其粗蛋白含量可達(dá)到60%，多種必需氨基酸含量也高達(dá)35%[17]。趙朝陽等[18]在養(yǎng)殖克氏原螯蝦過程中，采用餌料生物有氧增殖技術(shù)培養(yǎng)大量的水絲蚓作為生物餌料，結(jié)果顯示克氏原螯蝦的養(yǎng)成規(guī)格增加了1倍。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，說明水絲蚓所含蛋白質(zhì)接近或相當(dāng)于克氏原螯蝦生長所需的理想蛋白，故投喂水絲蚓的實(shí)驗(yàn)組克氏原螯蝦生長最快。

3.2 不同底棲餌料對克氏原螯蝦消化酶活性的影響

食性不同，魚類消化酶的分泌也不同，在養(yǎng)殖過程中選用人工投喂的餌料可以在一定程度上影響消化酶的分泌[19]，其中投喂的餌料的質(zhì)量是影響甲殼類動(dòng)物消化酶活性變化的關(guān)鍵因素，消化酶活性的變化在一定程度上可以反映出動(dòng)物對餌料營養(yǎng)成分的消化吸收程度。夏曉飛等[20]研究了不同開口餌料對克氏原螯蝦幼蝦消化酶活性的影響，發(fā)現(xiàn)幼蝦的蛋白酶活性與投喂的餌料密切相關(guān)，投喂鹵蟲無節(jié)幼體組幼蝦的胃蛋白酶和胰蛋白酶活性極顯著高于投喂草魚魚糜組。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，飼喂底棲餌料的各實(shí)驗(yàn)組克氏原螯蝦的胰蛋白酶和脂肪酶的活性均顯著高于對照組，其中飼喂水絲蚓的實(shí)驗(yàn)組的克氏原螯蝦體內(nèi)的胰蛋白酶的活性顯著高于飼喂搖蚊幼蟲和菱形螺的實(shí)驗(yàn)組，飼喂底棲餌料各實(shí)驗(yàn)組的淀粉酶的活性均顯著低于對照組。

Personle等[21]的研究顯示，在活餌料中含有的某些微量活性物質(zhì)有可能會(huì)促使魚類體內(nèi)蛋白酶活性的增加，而配合飼料中有可能因缺乏這些誘導(dǎo)因子，致使蛋白酶的活性低于活餌料組。在本實(shí)驗(yàn)中，投喂底棲餌料的各實(shí)驗(yàn)組的克氏原螯蝦的胰蛋白酶活性顯著高于對照組，這與Personle等的研究結(jié)果一致。淀粉酶的活性與胰蛋白酶活性情況相反，投喂配合飼料的對照組的淀粉酶的活性明顯高于投喂底棲餌料的實(shí)驗(yàn)組，這說明克氏原螯蝦體內(nèi)淀粉酶的活性與餌料關(guān)系密切，可能是因?yàn)閷φ战M配合飼料中的淀粉含量高于各實(shí)驗(yàn)組，而淀粉含量誘導(dǎo)了克氏原螯蝦體內(nèi)淀粉酶的活性。目前，關(guān)于甲殼類脂肪酶活性和餌料關(guān)系的報(bào)道較少，夏曉飛等[20]研究了不同開口餌料對克氏原螯蝦幼蝦消化酶活性的影響，發(fā)現(xiàn)脂肪酶活性與不同開口餌料沒有密切關(guān)系。蘇時(shí)萍等[22]研究發(fā)現(xiàn)，飼料蛋白質(zhì)濃度對克氏原螯蝦脂肪酶活性有顯著性影響，并隨著飼料蛋白水平的提高，呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，投喂各底棲餌料實(shí)驗(yàn)組的脂肪酶的活性均高于對照組，說明可能各底棲餌料的蛋白含量均高于對照組，餌料蛋白含量高激活了消化系統(tǒng)對脂肪酶的分泌。

3.3 不同底棲餌料對克氏原螯蝦血清生化指標(biāo)的影響

血液與機(jī)體的代謝、營養(yǎng)狀況等有著密切的聯(lián)系，血液中的生化指標(biāo)是衡量水生生物是否處于相對健康狀態(tài)的重要指標(biāo)，準(zhǔn)確掌握魚類、甲殼動(dòng)物等的血液生化指標(biāo)有利于掌握其生理健康狀況及對餌料營養(yǎng)水平進(jìn)行評估[23-24]。血液中的蛋白質(zhì)可以維持血液的滲透壓、修補(bǔ)組織等，與機(jī)體免疫功能有關(guān)[25-26]；甘油三酯可以為合成新的細(xì)胞膜提供脂類，它的水平可以反映機(jī)體內(nèi)能量的水平[27]。在本實(shí)驗(yàn)中，與對照組相比，飼喂各底棲餌料對克氏原螯蝦蝦體血清中總蛋白、白蛋白和甘油三酯含量的影響不明顯，說明飼喂底棲餌料對蝦體免疫和能量代謝未產(chǎn)生明顯影響。

血清中總膽固醇可用于合成新的細(xì)胞膜，可以反映機(jī)體的脂肪沉積情況。在本實(shí)驗(yàn)中，各實(shí)驗(yàn)組的總膽固醇含量明顯降低，其原因可能是各底棲餌料體內(nèi)相對較高的蛋白質(zhì)和脂肪含量可以加快脂類代謝，促進(jìn)蝦體生長發(fā)育，從而降低了血清中總膽固醇的含量。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶在蛋白質(zhì)、脂肪、糖類轉(zhuǎn)化的過程中起重要作用，其活性常用來作為脊椎動(dòng)物以及對蝦肝胰腺功能的評估因子[28-29]；轉(zhuǎn)氨酶的活性的變化可以反映組織器官的功能狀況。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，各實(shí)驗(yàn)組蝦的谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性均顯著降低，說明飼喂底棲餌料可能在防止蝦體肝損傷方面發(fā)揮了積極作用，進(jìn)而有利于促進(jìn)蝦體的健康生長。

3.4 不同底棲餌料對克氏原螯蝦肌肉營養(yǎng)成分含量的影響

生存的環(huán)境、投喂餌料的營養(yǎng)成分、成長的不同時(shí)期等都有可能影響魚類肌肉的營養(yǎng)成分含量[30]。逯尚尉等[31]在研究中發(fā)現(xiàn)，點(diǎn)帶石斑魚(Epinephelusmalabaricus)在飼喂魚肉和混合餌料的情況下其肌肉中粗蛋白含量明顯高于飼喂配合飼料組，飼喂小雜魚比配合飼料更利于保持其優(yōu)良的肉質(zhì)。張濤等[32]的研究表明，投喂配合飼料組的西伯利亞鱘(Acipenserbaeri)的仔魚粗蛋白含量顯著低于投喂水絲蚓、鹵蟲無節(jié)幼體和枝角類的實(shí)驗(yàn)組。在本實(shí)驗(yàn)中，飼喂底棲餌料的實(shí)驗(yàn)組的克氏原螯蝦肌肉的各營養(yǎng)成分含量均顯著高于對照組，說明飼喂底棲餌料更有利于提高克氏原螯蝦的肉質(zhì)。