益生菌補(bǔ)充劑對(duì)斷奶仔兔飼料效率、生長(zhǎng)性能和微生物種群的影響

孔慶娟，郭丹丹

集約化肉兔生產(chǎn)系統(tǒng)，特別是斷奶期間會(huì)引起許多生理和環(huán)境應(yīng)激，這些問題導(dǎo)致大腸桿菌、球蟲、腸病等腸道致病菌聚集和傳播，對(duì)家兔生長(zhǎng)性能、飼料效率和健康狀況產(chǎn)生負(fù)面影響。歐盟在10多年前就禁止使用抗生素，近年來人們一直在進(jìn)行研究，尋找抗生素替代品。蘇雙良等（2013）研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)充有益的正常菌群，如枯草芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌可以以改善腸道環(huán)境。益生菌在豬和家禽上的作用模式已有相關(guān)研究（何佳等，2017；謝強(qiáng)等，2017），但目前在家兔體內(nèi)補(bǔ)充益生菌的研究很少。有關(guān)益生菌對(duì)斷奶兔飼料效率、生長(zhǎng)性能和微生物數(shù)量影響的信息仍然有限。因此，本研究旨在探討單株或雙株益生菌補(bǔ)充劑對(duì)斷奶仔兔飼料效率、生長(zhǎng)性能及遠(yuǎn)端胃腸道微生物數(shù)量的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)選擇64只28 d斷奶（公母各半）新西蘭白兔，隨機(jī)分為4組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧（粉料，表1），試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)日糧中添加1×106cfu/g枯草芽孢桿菌（BS組）、1×107cfu/g乳酸菌（LA組）及0.5×106cfu/g枯草芽孢桿菌+0.5×107cfu/g乳酸菌（BL組）。試驗(yàn)時(shí)間持續(xù)6周，所有仔兔均在室溫下飼養(yǎng)。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.2 樣品收集與分析 每天對(duì)提供和剩余的飼料稱重，以此計(jì)算平均日采食量。每周采集一次飼料樣品，分別在28 d、42 d和70 d對(duì)仔兔稱重，計(jì)算平均日增重。生長(zhǎng)指數(shù)=活體重×100/料重比。本研究所有仔兔在63 d時(shí)，連續(xù)5 d每天收集總糞便和總排尿量，參考McDonald等（2002）的方法測(cè)定有機(jī)物、干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、中性洗滌纖維、總能、粗纖維、粗脂肪、非纖維碳水化合物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率系數(shù)和氮平衡。70 d時(shí)注射戊巴比妥鈉60～70 mg/kg，處死32只仔兔，立即分離回腸、盲腸和結(jié)腸，對(duì)芽孢桿菌、大腸桿菌和乳酸菌計(jì)數(shù)。測(cè)定盲腸內(nèi)容物pH，用氣相色譜法測(cè)定揮發(fā)性脂肪酸濃度。參考Agin等（2005）的研究方法對(duì)糞便進(jìn)行評(píng)分并分析糞便一致性指數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS軟件完全隨機(jī)設(shè)計(jì)模型分析，試驗(yàn)性別和日糧處理為2×4因素，研究其交互效應(yīng)。各組均值之間的顯著性差異通過Tukey法多重比較檢驗(yàn)進(jìn)行評(píng)估，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 益生菌對(duì)斷奶仔兔生長(zhǎng)性能的影響 由表2可知，公兔和母兔的日增重、料重比和生長(zhǎng)指數(shù)均無顯著差異（P＞0.05），而母兔組28～42 d平均日采食量顯著升高（P＜0.05），28～70 d有升高趨勢(shì)（P=0.05）。在42～70 d時(shí)，LA和BL組斷奶仔豬的體重顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。LA組42 d平均日增重顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。與不添加益生菌的家兔相比，添加BL的家兔生長(zhǎng)速度更快（P＜0.05），F(xiàn)CR也更好（P＜0.05）。與28～70 d對(duì)照組相比，添加LA或BL的家兔日增重顯著升高（P＜0.05）。BL組生長(zhǎng)指數(shù)明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）。

2.2 益生菌對(duì)斷奶仔兔糞便特征的影響 由表3可知，性別和日糧處理對(duì)糞便評(píng)分和糞便一致性指數(shù)均有影響。在35～42 d和28～42 d，雌兔糞便評(píng)分和糞便一致性指數(shù)均高于雄兔（P＜ 0.05）。在 35～ 42 d和 28～ 42 d時(shí)，補(bǔ)充LA或BL的家兔糞便評(píng)分和糞便一致性指數(shù)均低于對(duì)照組（P＜0.05）。與其他處理相比，BS組對(duì)家兔糞便評(píng)分和糞便一致性指數(shù)無顯著影響（P＞ 0.05）。

2.3 益生菌對(duì)斷奶仔兔養(yǎng)分表觀消化和氮平衡的影響 表4結(jié)果表明，添加LA或BL組的干物質(zhì)、有機(jī)物、粗蛋白質(zhì)、中性洗滌纖維和總能消化率均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。對(duì)照組較益生菌組顯著降低仔兔粗纖維表觀消化率（P＜0.05）。各組對(duì)仔兔氮平衡無顯著影響（P＜0.05），但LA組較對(duì)照組有提高氮沉積的趨勢(shì)（P=0.06）。

2.4 益生菌對(duì)斷奶仔兔盲腸pH和揮發(fā)性脂肪酸含量的影響 由表5可知，各組對(duì)盲腸pH、揮發(fā)性脂肪酸總量及單個(gè)脂肪酸占比無顯著影響（P＞0.05）。然而，性別和處理對(duì)盲腸丁酸含量的影響具有顯著交互效應(yīng)（P＜0.05），其中公兔盲腸丁酸含量有升高趨勢(shì)（P=0.06）。

2.5 益生菌對(duì)斷奶仔兔腸道微生物含量的影響 由表6可知，本研究未發(fā)現(xiàn)性別和處理對(duì)腸道微生物含量的影響具有顯著相互作用（P＜0.05）。公兔較母兔顯著提高了回腸芽孢桿菌和大腸桿菌含量（P＜0.05）。母兔回腸芽孢桿菌含量顯著低于盲腸和結(jié)腸（P＜0.05）。BS組回腸、結(jié)腸芽孢桿菌含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。BS或BL組仔兔盲腸芽孢桿菌含量也顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。添加LA的仔兔盲腸、結(jié)腸大腸桿菌含量及各節(jié)段平均大腸桿菌含量均低于對(duì)照組或BS組（P＜0.05）。由于LA處理后乳酸菌增多，大腸桿菌減少，與其他處理相比，LA組的革蘭氏陽性菌與革蘭氏陰性菌的比值最高（P＜0.05）。

表3 益生菌補(bǔ)充劑對(duì)斷奶仔兔糞便特征的影響

表4 益生菌補(bǔ)充劑對(duì)斷奶仔兔養(yǎng)分表觀消化系數(shù)和氮平衡的影響

表5 益生菌補(bǔ)充劑對(duì)斷奶仔兔盲腸pH和揮發(fā)性脂肪酸含量的影響

表6 益生菌補(bǔ)充劑對(duì)斷奶仔兔腸道微生物含量的影響

3 討論

單獨(dú)添加嗜酸乳桿菌或枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌復(fù)合飼料的家兔與對(duì)照組相比，日增重較大，料重比較低，說明嗜酸乳桿菌對(duì)斷奶仔兔生長(zhǎng)性能有促進(jìn)作用，這可能是由于添加益生菌的仔兔營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率和氮沉積率更高。日糧添加益生菌對(duì)斷奶兔生長(zhǎng)性能和飼料效率的積極影響在喂養(yǎng)后的前兩周明顯，而在飼養(yǎng)后的4周無明顯差異。Jensen等（1998），研究發(fā)現(xiàn)，仔豬斷奶后2～3周，腸道菌群穩(wěn)定，腸道功能恢復(fù)正常。因此，在斷奶3周添加益生菌對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)性能的影響可能不那么重要。枯草芽孢桿菌和嗜酸乳酸菌之間可能存在協(xié)同作用，因?yàn)樵诟靼雱┝肯绿砑涌莶菅挎邨U菌和嗜酸嗜酸乳酸菌在幾乎所有參數(shù)上的結(jié)果都與完全劑量下單獨(dú)添加相似。枯草芽孢桿菌存活后可釋放多肽，有助于芽孢桿菌等典型的弱蛋白水解益生菌的生長(zhǎng)。此外，乳酸菌與芽孢桿菌共培養(yǎng)后細(xì)菌活性均有提高。因此，芽孢桿菌可以刺激乳酸菌的生物合成（Rossland等，2005）。

本研究以斷奶仔兔糞便評(píng)分作為判定斷奶兔糞便狀況的一個(gè)指標(biāo)。日糧添加益生菌降低糞便分?jǐn)?shù)，且有更高的盲腸揮發(fā)性脂肪酸含量。揮發(fā)性脂肪酸為腸道提供了一個(gè)強(qiáng)大的水驅(qū)動(dòng)力和鈉濃度，從而減少糞便中的水分含量，降低糞便分?jǐn)?shù)（Cummings等，1991）。但在本研究中，單獨(dú)補(bǔ)充枯草芽孢桿菌并沒有導(dǎo)致斷奶兔糞便分?jǐn)?shù)的任何改善。以嗜酸乳桿菌使仔兔腸道乳酸桿菌數(shù)量升高，可提高腸道水解酶活性，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率和飼料利用率。此外，由于小腸黏膜中乳糖酶和蔗糖酶活性增加，添加嗜酸乳桿菌可改善腸道功能（Collington等，1990）。此外，在含嗜酸乳酸菌日糧中，糞便分?jǐn)?shù)越低，腸道揮發(fā)性脂肪酸濃度越高，有助于提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率。腸道有機(jī)酸濃度越高，腸道pH越低，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率越高，但單獨(dú)添加枯草桿菌的飼料并不能提高斷奶兔的營(yíng)養(yǎng)消化率和氮沉積率。

乳酸菌對(duì)斷奶仔兔盲腸揮發(fā)性脂肪酸總濃度的改善趨勢(shì)可能與盲腸中乳酸菌活性增加有關(guān)。此外，低腸道pH對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率也有有益影響。日糧添加乳酸菌提高了盲腸乙酸濃度，同時(shí)，盲腸中丙酸和丁酸的濃度無顯著差異，這可能是由于仔兔盲腸在嚴(yán)格厭氧條件下產(chǎn)生了以乙酸為主的異型發(fā)酵乳酸菌（Lee等，2009）。由于乙酸可以滲透到細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中，導(dǎo)致細(xì)菌內(nèi)部pH降低，電化學(xué)質(zhì)子梯度崩潰，導(dǎo)致盲腸大腸菌等敏感細(xì)菌的抑菌和死亡。腸道大腸菌群的減少有助于減輕動(dòng)物斷奶胃腸道問題（Oglesbee和Jenkins，2012）。

4 結(jié)論

日糧單獨(dú)添加1×107cfu/g乳桿菌或0.5×106cfu/g枯草桿菌+ 0.5×107cfu/g乳桿菌可以提高腸道有益菌群數(shù)量、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率、盲腸發(fā)酵、飼料效率和生長(zhǎng)性能。此外，僅添加乳桿菌的家兔腸道大腸菌群和糞便評(píng)分均有所下降。但飼料添加1×106cfu/g芽孢桿菌對(duì)斷奶兔生長(zhǎng)性能和飼料效率無顯著影響。