白刺鏈霉菌(Streptomyces albospinus)CT205產(chǎn)環(huán)己酰亞胺含量測定方法的建立

王小姣，李夢雅，王世梅

(南京農(nóng)業(yè)大學資源與環(huán)境科學學院 江蘇省固體有機廢棄物資源化高技術研究重點實驗室 江蘇省有機固體廢棄物協(xié)同創(chuàng)新中心教育部資源節(jié)約型肥料工程技術研究中心，江蘇 南京 210095)

白刺鏈霉菌(Streptomycesalbospinus)CT205是本實驗室分離保存的1株拮抗放線菌，其生防制劑防控黃瓜枯萎病、草莓根腐病等效果顯著[1-2]。孫敏等[3]對S.albospinusCT205發(fā)酵液中活性物質物質進行了分離純化，并借助色譜分析，確定活性物質為環(huán)己酰亞胺 (Cycloheximide)，又稱放線酮。在農(nóng)業(yè)應用上，環(huán)己酰亞胺主要用于植物病蟲害的防控[4-6]，在醫(yī)學及分子生物學領域，環(huán)己酰亞胺主要作為蛋白質合成抑制劑，應用于蛋白表達、細胞凋亡機制等代謝調控方面的研究[7-9]。建立定量、快速檢測菌株CT205發(fā)酵產(chǎn)生的活性物質環(huán)己酰亞胺含量的方法，是亟需解決的問題。本研究利用高效液相色譜法(HPLC)、生物活性法及分光光度法等檢測手段分別測定菌株CT205發(fā)酵上清液及粗提物中活性物質的含量，以期建立合適的檢測方法，為菌株CT205的開發(fā)利用提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1菌株 白刺鏈霉菌(Streptomycesalbospinus)CT205；啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae)，本實驗室分離保存[2]。

1.1.2 培養(yǎng)基 ①PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯200.0 g(去皮)，葡萄糖20.0 g，瓊脂20.0 g，去離子水定容至1 000 mL，pH值自然；②種子培養(yǎng)基: 黃豆粉30.0 g，葡萄糖45.0 g，酵母粉5.0 g，CaCO35.0 g，去離子水1 000 mL，pH值7.5；③發(fā)酵培養(yǎng)基：可溶性淀粉30.0 g，蔗糖20.0 g，黃豆粉8.0 g，CaCO33.0 g，蛋白胨2.0 g，NaCl 2.0 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，K2HPO4·7H2O 0.5 g，去離子水1 000 mL，pH 8.0。

1.1.3 試劑與儀器 環(huán)己酰亞胺標準品(北京索萊寶科技有限公司)，甲醇、乙酸乙酯(色譜純)，其他試劑均國產(chǎn)分析純試劑(國藥集團化學試劑有限公司)。……