氯化膽堿中N,N-二甲基乙醇胺的測定方法

周潔 高衎 李春剛 唐祁勻(上海現代制藥海門有限公司，江蘇 南通 226100)

1 引言

N,N-二甲基乙醇胺，又名N，N-二甲基-2-羥基乙胺、2-二甲基氨基乙醇，具有基因毒性示警結構[1]。可用作局部麻醉劑、紡織助劑、燃料油添加劑、離子交換樹脂等，極為廣泛地應用于人們的生產和生活中[2-4]。作為一種基因毒性雜質，極低濃度的N,N-二甲基乙醇胺即可損傷DNA，嚴重威脅了患者的生命安全[5-8]。因此，N,N-二甲基乙醇胺含量的準確測定十分關鍵。受到其他類似結構化合物的分析方法的啟發，擬通過氣相色譜法、氣質聯用對其進行研究。本文通過對色譜柱、檢測器的篩選及色譜參數的優化，建立了一種定量測定產品中N,N-二甲基乙醇胺含量的氣相色譜法。該方法經濟、實用，具有很高的應用價值。

2 儀器與試藥

2.1 儀器

安捷倫E7890型氣相色譜儀；安捷倫7697A型頂空進樣器；Empower色譜工作站；梅特勒ML240型電子分析天平；色譜柱Aglient DB-624(30m×0.53mm×3.0μm)。

2.2 試藥

N,N-二甲基乙醇胺標準品(阿拉丁，B170912批，純度為99.5%)；氯化膽堿(國藥集團，69008560批，純度為99.5%)；甲醇(德國默克，10951907818批，色譜級)；二甲亞砜(德國默克，K48040300625 批，色譜級)。

3 方法與結果

3.1 色譜條件

以6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷為固定液的毛細管柱為色譜柱；起始溫度為40℃，維持5min，以每分鐘20℃的速率升至230℃，維持2.5min；進樣口溫度230℃，分流比1:1；檢測器(FID)溫度為250℃；流速為5mL·min-1。頂空條件：加熱箱溫度為100℃；定量環溫度為105℃；傳輸線溫度為120℃；GC循環時間為25min；樣品平衡時間為20min；進樣體積為1.0mL。

3.2 溶液配制

3.2.1 供試品溶液的配制

取氯化膽堿約0.2g，精密稱定，置于20mL頂空瓶中，精密加入二甲亞砜2.0mL，超聲使完全溶解，密封即得。

3.2.2 N,N-二甲基乙醇胺標準溶液的配制

取N,N-二甲基乙醇胺標準品約250mg，精密稱定，置于50mL容量瓶中，加二甲亞砜適量，超聲使完全溶解，冷卻，用二甲亞砜定容，搖勻，作為N,N-二甲基乙醇胺標準儲備液。分別精密移取N,N-二甲基乙醇胺標準儲備液0.5mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.5mL，置于不同的50mL容量瓶中，用二甲亞砜稀釋到刻度，搖勻即得。

3.2.3 回收率溶液的配制

取氯化膽堿約0.2g，精密稱定，置于20mL頂空瓶中，平行稱取9份。分別精密加入80%、100%、120%的N,N-二甲基乙醇胺標準溶液2.0mL，密封即得。

表2 重復性實驗結果

3.3 專屬性

精密量取“3.2”項下的供試品溶液、N,N-二甲基乙醇胺標準溶液及空白溶劑二甲亞砜各適量，分別頂空進樣1.0mL，記錄色譜圖。試驗結果表明，空白溶劑不干擾測定，N,N-二甲基乙醇胺峰與氯化膽堿及其殘留溶劑峰分離度均大于2.0，方法專屬性良好。

3.4 定量限、檢測限

取“3.2.2”項下配制的N,N-二甲基乙醇胺標準溶液，逐步稀釋，使S/N約為10，記錄此時濃度為定量限。繼續稀釋，使S/N約為3，記錄此時濃度為檢測限。結果見表1。

表1 定量限與檢測限結果

3.5 線性關系

取“3.2.2”項下配制的5種不同濃度的N,N-二甲基乙醇胺標準溶液各適量，分別頂空進樣1.0mL，記錄色譜圖。按“3.1”項下的方法進行測定。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制N,N-二甲基乙醇胺標準曲線，計算回歸方程。測得在50～150μg·mL-1范圍內，N,N-二甲基乙醇胺濃度與峰面積的線性關系良好，線性方程為 y=1.6914x-62.3380，r=0.9991。

3.6 重復性

取供試品(69008560批)適量，照“3.2.1”項下平行配制6份。以“3.2.2”項下的N,N-二甲基乙醇胺標準溶液作為對照，按外標法計算供試品溶液中的N,N-二甲基乙醇胺的含量。結果見表2。

3.7 加樣回收率試驗

精密量取“3.2.3”項下的回收率溶液各適量，分別頂空進樣1.0ml，記錄色譜圖。試驗結果表明，不同濃度水平的樣品回收率均在98%～102%范圍內，相對標準偏差均＜5.0%，詳見表3。本方法準確度良好，滿足定量測定的要求。

表3 回收率試驗結果

4 結語

本研究建立了一種測定氯化膽堿中N,N-二甲基乙醇胺含量的氣相色譜法，經驗證，該方法專屬、靈敏、準確，滿足定量分析的要求。然而N,N-二甲基乙醇胺作為一種基因毒性雜質，控制限度極低，單一氣相色譜很難達到要求，往往需要結合GC-MS進行后續研究。該方法為N,N-二甲基乙醇胺的GC-MS測定法提供了摸索基礎，也能夠幫助企業初步判斷N,N-二甲基乙醇胺的含量，節省后續GC-MS的檢驗成本。