香茯健脾苦蕎茶的制備工藝及其含量測定△

孫芮芮，李明杰，李慧峰，裴妙榮

山西中醫(yī)藥大學(xué)，山西 晉中 030600

1 材料

1.1 儀器

2695型高效液相色譜儀、2998型檢測器、Empower色譜工作站(美國沃特世公司)；AB135-S型電子天平(十萬分之一，瑞士Mettler公司)；HANGPING FA2104型(萬分之一天平，上海精科天美有限公司)；98-1-B型電子調(diào)溫電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司)；GZX-9076 MBE型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)。

1.2 試藥

蘆丁對(duì)照品(上海詩丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司，批號(hào)：5981，純度：95.2%)；乙腈(色譜純，批號(hào)：20180318，歐普森天津市彪仕奇科技發(fā)展有限公司)；甲醇(分析純，批號(hào)：20180318，天津市進(jìn)豐化工有限公司)；甲醇(色譜純，批號(hào)：20160510，歐普森天津市彪仕奇科技發(fā)展有限公司)；冰乙酸(分析純，批號(hào)：20150921，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司)。

香薷、茯苓、苦蕎購自太原市萬民大藥房，以上飲片均經(jīng)山西中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室裴香萍副教授鑒定為正品。

2 方法與結(jié)果

2.1 香薷揮發(fā)油提取工藝

根據(jù)單因素試驗(yàn)考察結(jié)果，以揮發(fā)油提取率為考察指標(biāo)，選擇對(duì)提取影響較大的料液比(A)、提取時(shí)間(B)、浸泡時(shí)間(C)3個(gè)因素，每個(gè)因素設(shè)定3個(gè)水平。單因素考察表見表1。采用L9(34)正交表安排正交試驗(yàn)，設(shè)計(jì)L9(34)正交試驗(yàn)，結(jié)果見表2～3。

表1 香薷揮發(fā)油提取工藝因素水平

表2 香薷揮發(fā)油提取工藝正交試驗(yàn)

表3 香薷揮發(fā)油提取工藝正交試驗(yàn)方差分析

由表2可知，B因素對(duì)揮發(fā)油提取率影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。研究對(duì)實(shí)驗(yàn)最佳提取水平組合A3B2D3及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析所得最佳提取水平組合A3B3D2進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，分別對(duì)A3B2D3、A3B3D2提取工藝進(jìn)行2次水平操作，量取提取揮發(fā)油體積，計(jì)算提取率。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果見表4。

表4 香薷揮發(fā)油提取工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表4可知，結(jié)果與正交試驗(yàn)最佳提取水平組合數(shù)據(jù)差異不大，綜合考慮取A3B3D2，即料液比為1∶12，浸泡1.5 h，提取4.0 h，為最佳提取工藝。此工藝穩(wěn)定可靠，合理可行。

2.2 香薷、茯苓水提工藝

根據(jù)單因素試驗(yàn)考察結(jié)果，以出膏率為考察指標(biāo)，選擇對(duì)提取影響較大的3個(gè)因素：加水量、提取時(shí)間(A)、料液比(B)，提取次數(shù)(D)，每個(gè)因素設(shè)定3個(gè)水平。單因素考察表見表5。采用L9(34)正交表安排正交試驗(yàn)，結(jié)果見表6～7。

表5 香薷、茯苓水提工藝因素水平

表6 香薷、茯苓水提工藝正交試驗(yàn)

表7 香薷、茯苓水提工藝出膏率的方差分析

由表6可知，由數(shù)據(jù)分析所得最佳提取水平組合為A3B3D3，由實(shí)驗(yàn)所得最佳提取水平組合為A1B3D3。由表6～7直觀分析可得：各因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響次序?yàn)镈>B>A，其中D因素對(duì)出膏率影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。研究對(duì)實(shí)驗(yàn)最佳提取水平組合A1B3D3及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析所得最佳提取水平組合A3B3D3進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，分別對(duì)A3B3D3、A1B3D3提取工藝進(jìn)行2次水平操作，所得提取液濃縮成稠膏，置于60 ℃烘箱中烘干，計(jì)算出膏率。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果見表8。

5.1 推廣秸稈氣化技術(shù)，有利于提高農(nóng)民生活質(zhì)量，促進(jìn)農(nóng)村奔小康的進(jìn)程。通過秸稈氣化技術(shù)，利用農(nóng)村豐富的秸稈資源，以較低的成本向農(nóng)民供應(yīng)秸稈燃?xì)猓龅搅恕皟扇藷穑糇鲲垺保锤纳屏司幼…h(huán)境，又降低了勞動(dòng)強(qiáng)度，實(shí)現(xiàn)村內(nèi)少柴草，室內(nèi)無煙塵的愿望。

表8 香薷、茯苓水提工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

由表8可知，結(jié)果與正交試驗(yàn)最佳提取水平組合數(shù)據(jù)差異不大，綜合考慮取A1B3D3，即10倍量的水，提取0.5 h，提取3次為最佳提取工藝。此工藝穩(wěn)定可靠，合理可行。

2.3 香茯健脾苦蕎茶工藝

2.3.1香茯健脾苦蕎茶工藝考察 香茯健脾苦蕎茶由香薷和茯苓的水提液經(jīng)苦蕎吸附干燥制成，需將苦蕎膨化到一定程度與香薷和茯苓的提取液混合。將膨化的苦蕎按不同比例與提取液混合，進(jìn)行比較，見表9和圖1。

表9 苦蕎、提取液吸附比例比較

注：A.吸附比例1∶0.5；B.吸附比例1∶1；C.吸附比例1∶1.5；D.吸附比例1∶2。圖1 苦蕎、提取液吸附比例比較

結(jié)果表明，苦蕎與提取液的比例為1∶1時(shí)吸附效果最佳。

2.3.2香茯健脾苦蕎茶制備工藝 取香薷183 g，提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液備用；藥渣與茯苓817 g 加10倍量水煎煮3次，每次 30 min，濾液與上述蒸餾后的水溶液合并，濃縮至1000 mL，另稱取膨化并整粒的苦蕎1000 g，加入上述水提液濃縮液，混勻使藥液充分吸附于苦蕎內(nèi)，干燥，噴以香薷揮發(fā)油，混勻，分裝，即得[9]。

2.4 香茯健脾苦蕎茶的含量測定

2.4.1樣品處理 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取蘆丁對(duì)照品1.06 mg，置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解，并定容至刻度，搖勻，即得。所得蘆丁對(duì)照品的質(zhì)量濃度為0.106 mg·mL-1。

供試品溶液的制備：取本品粉末(過三號(hào)篩)約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率：250 W，頻率：40 kHz)30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

苦蕎陰性對(duì)照品溶液的制備：取缺苦蕎的陰性樣品1 g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法制備缺苦蕎的陰性對(duì)照溶液。

2.4.2色譜條件的選擇 檢測波長的選擇：取蘆丁對(duì)照品溶液在210～400 nm進(jìn)行全波長掃描，所得光譜圖見圖2。結(jié)果表明，蘆丁在256 nm左右處有最大吸收，故選擇256 nm作為含量測定的檢測波長。

圖2 蘆丁對(duì)照品溶液光譜圖

色譜柱：Diamonsil C18(2)(200 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；流動(dòng)相：甲醇-0.5%冰乙酸(34∶66)；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；檢測波長：256 nm；進(jìn)樣量：10 μL[10]。在此條件下色譜峰達(dá)到完全分離且保留時(shí)間適中，陰性無干擾，見圖3。

注：A.對(duì)照品溶液；B.供試品溶液；C.苦蕎陰性對(duì)照品。圖3 香茯健脾苦蕎茶色譜圖

2.4.3線性關(guān)系考察 分別精密吸取蘆丁對(duì)照品(0.106 mg·mL-1)4、6、8、10、12、14、16、18、20 μL，以對(duì)照品進(jìn)樣量X為橫坐標(biāo)，以峰面積的積分值為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性回歸，回歸方程Y=3 844.7X-113 658，r=0.999 9，故蘆丁在424～2120 ng線性關(guān)系良好。

2.4.4精密度考察 進(jìn)樣蘆丁對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算其 RSD為0.93%，表明該儀器的精密度良好。

2.4.5穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10 μL，在0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣，計(jì)算RSD為1.04%，表明該供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.6重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品(批號(hào)：20180501)溶液6份，分別按2.4.1項(xiàng)下方法制備，每份分別進(jìn)樣10 μL，計(jì)算得平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.47%，計(jì)算得RSD為1.73%，表明重復(fù)性良好。

2.4.7回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法試驗(yàn)，稱取6份 0.5 g已知含量的供試品，加入適量的蘆丁對(duì)照品，制備方法同供試品溶液一樣，計(jì)算回收率，平均回收率為98.11%，RSD為1.77%，證明實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性好。

2.4.8含量測定 再取3批樣品，各2份，每份1 g，精密稱定，按2.4.1項(xiàng)下方法制成供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，測定，計(jì)算含量，結(jié)果見表10。

表10 香茯健脾苦蕎茶3批樣品中蘆丁含量測定結(jié)果

3 結(jié)論

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)對(duì)香薷揮發(fā)油提取率及水提取香薷、茯苓的出膏率進(jìn)一步優(yōu)化，香薷揮發(fā)油提取率的最佳工藝為12倍量的水，浸泡1.5 h，提取4.0 h；香薷、茯苓的出膏率最佳提取工藝為10倍量的水，提取0.5 h，提取3次。香茯健脾苦蕎茶最佳制備工藝為將藥液按1∶1吸附在苦蕎上。

本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC測定香茯健脾苦蕎茶中蘆丁含量的方法，采用0.5%冰醋酸-甲醇(66∶34)為流動(dòng)相，結(jié)果顯示，目標(biāo)色譜峰分離效果良好、精密度、重復(fù)性和回收率的測定均符合要求。此方法穩(wěn)定可靠，可用于苦蕎茶的質(zhì)量控制。