一起規模化蛋雞場非典型性新城疫的綜合診斷與防治

呂奇鵬，楊孝樸

（甘肅農業大學，甘肅 蘭州 730070）

1 材料

1.1 發病雞場

青海省大通縣某規模化蛋雞場共有雞舍8棟，其中1號、2號雞舍為育成雞舍，3號至8號為產蛋雞舍，采用5層階梯式籠養，自動上料、飲水，人工撿蛋，每棟產蛋雞舍存欄產蛋雞10 000 只。2018年6月2日下午5點，3號雞舍飼養員反應，該棟雞舍的雞群采食量明顯減少，約為 650 kg，產蛋率也由前段時間的 82.7% 下降為 60.2%，死亡雞 12 只，其余雞舍均正常。

1.2 樣品采集

采集病死雞的脾、肺、肝臟和腸管等病變組織樣品10份，編號為A1-A10。其中A1、A2為脾臟的病變組織，A3、A4為肺臟的病變組織，A5、A6為肝臟的病變組織，A7、A8為腎臟的病變組織，A9、A10為腸管的病變組織。

采集3號雞舍發病雞泄殖腔試子樣品5份，編號為B1-B5。

采集3號雞舍發病雞新鮮糞便樣品5份，編號為B6-B10。

1.3 主要儀器

超凈工作臺、立式壓力蒸汽滅菌鍋、電子分析天平、電子恒溫箱、移液槍、96孔微型反應板、生物顯微鏡、數顯恒溫水浴鍋、切片機、展片機、烘片機等。

1.4 主要試劑

SPF雞胚和SPF雛雞；新城疫標準陽性血清、新城疫抗原；禽流感H5、H7、H9抗原；制作切片和染色常用的試劑；配置pH7.2 PBS、雞紅細胞懸液（1%）、固定液、抗原液和青鏈霉素液等。

2 方法

2.1 臨床診斷

2.1.1 臨床癥狀觀察 分為群體觀察和個體觀察。群體觀察主要觀察雞群的精神狀態、采食量和飲水量，糞便顏色和形態，產蛋量，并聽雞群的呼吸聲。個體觀察主要觀察精神、呼吸系統和糞便。

2.1.2 流行病學調查 主要詢問了該養殖場的新城疫的免疫情況，近幾年新城疫發病情況，并了解本地區其他養雞場新城疫的發病狀況。

2.2 病理診斷

2.2.1 病理解剖 對死亡的雞進行解剖，主要觀察消化系統、呼吸系統、生殖系統以及心血管系統的病理變化。

2.2.2 病理組織學觀察 分別從具有典型剖解變化的病死雞內臟切取適當大小的肺（A3）、肝（A6）、腎（A7）和腸管（A10）組織塊，經固定、脫水、透明、浸蠟和包埋處理后切片，采用 HE 染色，光學顯微鏡下 400 倍觀察組織變化，并拍照。同時取正常健康雞相同部位組織塊，同法制作組織切片，進行對照觀察[1]。

2.3 病原學診斷

2.3.1 病毒培養 按操作流程進行樣品處理，雞胚接種及病毒收獲。收集36～96 h內死亡的雞胚和活胚尿囊液。

2.3.2 病毒鑒定及毒力測定 某些病毒能夠與雞的紅細胞發生凝集現象，即紅細胞凝集試驗（HA）；這種紅細胞凝集現象可于病毒懸液中加入特異免疫血清所抑制，即血凝抑制試驗（HI），可以通過標準血清對分離的病毒進行鑒定[2]。另外進行雞胚最小致死量平均死亡時間（MDT）的測定[3]和腦內致病指數（ICPI）的測定[4]。利用MDT將新城疫病毒株分為強毒力型、中等毒力型、溫和型三種：強毒力型的 MDT≤60 h，中等毒力型的MDT 在61～90 h；溫和型的MDT＞90 h。每只雞8 d內觀察數值的平均數即為ICPI，最強毒力病毒的ICPC接近最大值2.0，溫和型毒株的ICPC值接近于0。

2.4 防治

2.4.1 藥物干預 對于發病的3號雞舍，采用先藥物干預再緊急免疫接種的處置方法。由于疫情發現及時，雖然產蛋率和采食量明顯下降，但死亡率并未明顯增高，為減少雞場的損失，針對實際情況，對發病的3號雞舍采取先用藥物干預，再用疫苗緊急接種。藥物干預方法為：（1）清瘟敗毒散拌料：每1 kg清瘟敗毒散拌料250 kg，連續飼喂 3 d；（2）飲水中加入毒抗（主要成分為黃芪多糖）：每100 g毒抗兌水250 kg，連用3 d。

2.4.2 緊急預防 未發病的其他雞舍先用雞新城疫Ⅳ系弱毒疫苗4倍量飲水免疫接種，24 h 后再用藥物預防。藥物及用法為：按1 kg清瘟敗毒散拌料500 kg，100 g毒抗兌水500 kg，連用3 d。 發病雞舍（3號雞舍）先用2.4.1方法處治后，停藥1 d，再用雞新城疫Ⅳ系弱毒疫苗4倍量飲水免疫接種，24 h內的死亡率小于 0.05% 時，再用藥物進行預防。藥物及用法同上。

3 結果

3.1 臨床診斷

3.1.1 臨床癥狀 經群體檢查發現，3號雞舍內雞群整體精神萎靡，垂頭縮頸，眼半閉，張嘴呼吸，能聽到“咯咯”的喘鳴聲，個別雞只站立不穩，頭頸向一側扭轉，糞便稀薄，呈黃綠色或黃白色，有的雞只可以見到蛋清樣的糞便。將雞倒提時有大量酸臭的液體從口內流出。

3.1.2 流行學調查 通過詢問了解到該養雞場近三年來發生過 4 次類似疾病，其中有 2 次被診斷為新城疫；周邊3個規模養雞場近年來也發生過 2次新城疫疫情。總之，根據病雞臨床癥狀和該雞場近三年疫病發生情況及周邊雞場存在散發新城疫的實際，初步懷疑為雞新城疫。

3.2 病理診斷

3.2.1 剖檢病理變化 對死亡的蛋雞進行解剖，發現病變主要集中在消化系統、呼吸系統、生殖系統以及心血管系統。消化系統主要表現為腺胃腫脹，乳頭出血，肌胃角質膜下出血，腸道淋巴濾泡有棗核狀的出血，盲腸扁桃體嚴重腫脹、出血和壞死，泄殖腔積氣積液。呼吸系統可見氣管內有大量黏液，并伴有出血。生殖系統主要表現為卵泡變形，卵黃變稀，卵黃囊嚴重充血，其中3只雞的卵黃破裂，形成卵黃性腹膜炎，輸卵管病變不明顯。另外，心外膜及冠狀脂肪上可見針尖大小的點狀出血。

3.2.2 病理組織學變化 腎臟，腎小管上皮細胞發生不同程度的變性，上皮細胞脫落至腎小管管腔，導致部分腎小管組織結構不清，管腔發生不同程度的堵塞。肺臟，肺泡壁毛細血管發生充血，肺泡壁增厚，少量肺泡上皮細胞脫落，散落在肺泡腔中。同時，部分肺泡腔中有少量的紅細胞。肝臟，肝臟組織機構不清，中央靜脈有血液成分，肝索紊亂，竇狀隙變窄，肝細胞發生空泡樣變性和壞死，肝細胞核消失，少量炎性細胞浸潤。腸道黏膜充血，腸上皮細胞有不同程度變性、脫落，腸管變薄，少量炎性細胞。綜上所述，根據臨床癥狀和病理變化，再結合流行病學調查，初步診斷為一起疑似非典型性雞新城疫病例。

3.3 病原學診斷

3.3.1 病毒分離培養 雞胚在接種樣品后40～90 h，全部死亡，雞胚尿囊液清亮，頭部嚴重出血。對收集的尿囊液進行細菌檢測，無細菌。

3.3.2 血凝試驗（HA） 對采集的20份樣品進行血凝試驗，均可以凝集1%的雞紅細胞，血凝效價分別為25～28，病死雞組織樣品的血凝效價總體高于發病雞舍活雞泄殖腔試子和糞便樣品的血凝效價。

3.3.3 血凝抑制試驗（HI） 根據血凝試驗結果制備4HUA病毒液，用新城疫標準陽性血清和禽流感H5、H7、H9標準陽性血清分別對這20份樣品進行血凝抑制試驗。20份樣品都能被新城疫標準陽性血清抑制，不能被禽流感H5、H7、H9標準陽性血清抑制。

3.3.4 雞新城疫病毒毒力測定結果 對確定的20份新城疫病毒樣品進行MDT和ICPI檢測。MDT檢測結果均在61～96 h，ICPI檢測結果均在0.4～1.1。參照新城疫病毒毒力強弱的判定標準， 20份新城疫病毒有17份屬于中等毒力，3份屬于溫和型。通過分離病毒和進行血凝試驗（HA）及血凝抑制試驗（HI），確診為一起非典型性雞新城疫。

3.4 非典型新城疫的防治

發病雞舍采取相關措施后采食量逐天增加，產蛋率逐天上升。通過藥物干預，病雞的精神狀況和糞便顏色也基本恢復正常。停藥1 d后，緊急接種新城疫Ⅳ系疫苗，疫苗接種后第三天，雞死亡2只，采食量達到1 250 kg，產蛋率達到 84.6%。未發病雞舍采取先緊急接種Ⅳ系疫苗，24 h后藥物預防，未發現新的新城疫疫情。

4 討論

對于近年來常發生的非典型性新城疫如何快速的診斷，根據不同的發病情況采取及時合理的治療措施是當前基層一線獸醫必須掌握的基本技能；新城疫的預防僅靠疫苗免疫不夠，必須要采取更加綜合的防控措施控制新城疫的發生，減少損失；發生非典型性新城疫時，關鍵要平衡風險，采取緊急免疫措施，并及時進行藥物預防，還應注意防止細菌性疾病的繼發感染。