孕中期與孕晚期羊水細胞培養方法的差異性研究

閆梅 陳佛蘭 葉建翔

惠州市第一婦幼保健院，廣東 惠州516007

羊水中因存在胎兒細胞，使得羊膜腔穿刺術抽取羊水進行染色體分析成為可能，隨著孕周的增加，羊水內有活性的胎兒細胞相對減少，培養成功率有所下降，但對大孕周羊水的培養仍然具有一定的價值。本研究擬在孕中期羊水細胞培養方法的基礎上，對孕晚期的羊水培養方法進行改進，目的在于提高孕晚期羊水細胞培養的成功率，給臨床錯過有效檢查時機的孕晚期孕婦提供一個補救的方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2015 年5 月至2018 年7月來產前診斷中心進行遺傳咨詢并具有產前診斷指征的孕婦2303 例，年齡（29.8±8.4）歲，孕周（19.4±3.3）周。在孕中期穿刺（16～27W）的孕婦2218 例，在孕晚期（28～38W）穿刺的孕婦85 例。

1.2 方法

1.2.1 孕中期羊水培養方法。羊膜腔穿刺無菌抽取20mL 羊水，分別注入2 支無菌的15mL 刻度管內，1600r/min 離心棄上清，將沉渣分別接種在2 瓶裝有4mL 培養液的培養瓶內，37℃5%的CO2培養箱內培養7 天觀察細胞生長情況后換液，再放入培養箱內繼續培養直至收獲。

1.2.2 孕晚期羊水培養方法。羊膜腔穿刺無菌抽取20mL 羊水，分別注入2 支無菌的15mL 刻度離心管內，1600r/min 離心棄上清，由于孕晚期羊水離心沉渣過多，接種時適當棄掉一部分沉渣再接種到裝有4mL 培養液的培養瓶內用力吸打懸液，一周后換液，無論是否有細胞貼壁，均將換下來的細胞培養液懸液重新接種到一個新的培養瓶內，加入半量的新鮮培養液并用力吸打多次，然后再放入培養箱內靜止培養，定期在相差顯微鏡下觀察細胞的生長情況，待細胞克隆達到滿足一個低倍鏡大小，數量在3 個以上時即可傳代直至收獲。……