平敏煎對慢性蕁麻疹模型大鼠的影響*

★ 喻國華 施德全 李智萍

（1.江西中醫藥高等專科學校皮膚科 江西 撫州 344000；2.撫州市婦幼保健院 江西 撫州 344000）

蕁麻疹是由多種因素引起的皮膚、粘膜小血管擴張及滲透性增強而出現的一種局限性水腫隆起，以風團和瘙癢為主要臨床表現。慢性蕁麻疹（CU）目前認為其發病主要與Ⅰ型變態反應有關，血清IgE 作為介導Ⅰ型變態反應的主要抗體，在變態反應疾病中起關鍵作用［1］。IL-4 是 Ig E 的特異性誘導劑，能促使 B 細胞產生IgM 并轉變為IgE，在IgE 正反饋效應中起到重要的作用［2］。5-HT 是組織液外滲，風團形成的主要機制［3］，在臨床上至少有3/4 的CU 患者找不到過敏源，致使CU 非常頑固。西醫以抗組胺藥物治療為主，輔以免疫調節、脫敏等治療，抗組胺藥雖有效，但停藥后復發率高，長期用藥耐藥性增加的等問題一直沒得到解決。因此積極開展中藥治療CU 的實驗研究，尋找中藥抗變態反應的有效藥物，并探索其可能的作用機制非常有必要。本課題采用現代免疫學技術，觀察平敏煎對CU 小鼠相關因子的影響。

1 實驗材料

1.1 實驗動物wistar 大鼠60 只，體重200～220g，雄雌各半，飼養室溫度22℃±2 ℃，相對濕度70%±5%。均購自南昌大學醫學院實驗動物中心，許可證號SCXK（贛）2018-0018，實驗期間分籠喂養，每籠飼養大鼠5 只。

1.2 實驗藥物平敏煎的組成為：生地黃、何首烏、防風、荊芥、白鮮皮、刺蒺藜、五味子、烏梅、丹皮、地骨皮各10g，煅龍骨、生黃芪20g，苦參、黃柏各9g，當歸6g，全蝎3g，蜈蚣2 條。生藥均由江西中醫藥高等專科學校附屬醫院中藥房提供。氯雷他定片，10mg/片，上海先靈葆雅制藥有限公司，國藥準字：H20180410。將藥片研磨成粉末加入生理鹽水配成10mg/mL 溶液待用。

1.3 主要試劑及儀器設備P 物質（SP）試劑盒，上海江萊生物科技有限，批號：20170824；5-羥色胺（5-HT），上海博谷生物科技有限公司，批號：80362801；人白介素4（IL-4）試劑盒（上海恒遠生物科技有限公司，批號：20171036；干擾素-γ（上海滬峰生物科技有限公司，批號：20173028）。卵白蛋白，上海康朗生物科技有限公司，批號：F20170521；AI（OH）懸液，國藥集團化學試劑公司， 批號：F20170417；ELX80O 型酶標儀，美國BIOTEK 公司；XYJ—2 型臺式高速離心機，江蘇醫療儀器設備廠；切片機，德國克林藍公司；熒光分光光度計，上海精密儀器儀表有限公司。

2 實驗方法

2.1 平敏煎制備按照生藥劑量比例根據文獻折算給藥量，并擴大5 倍。稱取上述藥品，加入10倍清水中浸泡30min 后，然后將藥材及浸泡液轉至煎藥鍋中加水至水面超過藥面一指，武火煮沸后改用文火煎熬，煎熬過程中用玻璃棒時時攪拌，文火煎熬40min 后將藥液倒出至另一容器中，藥鍋中再次加水如前煎熬30min 后將藥液倒出。將兩次所得藥液用8 層紗布過濾、混勻后于火上濃縮為每1mL 藥液含1g 生藥的提取物，裝入潔凈玻璃瓶中，封口膜封口，置于4℃冰箱保存備用。

2.2 造模除正常組外，每組小鼠腹腔內注射卵白蛋白1mL 與AI（OH）懸液1mL 的混合液進行初次免疫，第10d 重復1 次。從初次免疫后第6d開始給藥，共14d。

2.3 動物分組與給藥方法取大鼠 60 只，隨機分為正常組、模型組、氯雷他定組、平敏煎高、中、低劑量組，每組 10 只。正常組和模型組每日灌服生理鹽水4mL/只；低劑量組、中劑量組、高劑組分別灌服平敏煎2.5g/kg、5g/kg、10g/kg；氯雷他定組灌服氯雷他定溶液10mg/kg。

2.4 取材與檢測

2.4.1 平敏煎對大鼠血清IgE、IL-4、SP、IFN-γ、5-HT 水平的影響上述大鼠未處死前頸動脈取血，離心2000r/min，取血清，采用雙抗夾心 ELISA 法測定血清中IgE 含量。采用放射免疫分析法測定SP、IFN-γ、IL-4 含量，采用熒光分光光度法測定5-HT含量，均嚴格按照說明書步驟操作。

2.4.2 平敏煎對大鼠腹腔肥大細胞脫顆粒的影響 取血后，處死大鼠，立即腹腔內注射肥大細胞沖洗液，剖開腹腔，吸出全部液體，1500r/min 離心5min，棄上清制成肥大細胞懸液。進行細胞涂片，鏡檢。隨機計數100 個細胞，計數脫顆粒細胞數，計算脫顆粒百分數和抑制率。

2.4.3 統計學分析采用SPSS18.0 軟件分析，計量資料用描述，用兩樣本t檢驗對各組數據進行比較，當P＜0.05 時，差異具有統計學意義。

3 結果

3.1 平敏煎對大鼠血清IgE、IL-4、SP、IFN-γ、5-HT水平的影響與正常組比較，模型組大鼠血清IgE、SP、IL- 4 水平極顯著升高，IFN-γ、5-HT 水平極顯著降低（P＜0.01），表明病理狀態下，機體免疫細胞分泌產生IgE、IL-4 異常旺盛， IFN-γ、5-HT分泌不足；與模型組比較，各治療組均能降低IgE、SP、IL-4 水平，提高IFN-γ、5-HT 水平（P＜0.05或P＜0.01），具體見表1。

表1 平敏煎對大鼠血清 IgE、IL- 4、SP、IFN-γ、5-HT水平的影響（，n=10）

表1 平敏煎對大鼠血清 IgE、IL- 4、SP、IFN-γ、5-HT水平的影響（，n=10）

注：與正常組相比，*P＜0.01；與模型組相比，#P＜0.05，△P＜0.01。

組別 IgE/ng·mL-1 IL- 4/μg·L-1 IFN-γ/μg·L-1 SP/ng·mL-1 5-HT/μg·L正常 5.68±0.65 18.64±2.73 46.01±1.72 58.01±9.86 124.23±2.89模型 9.96±0.67* 27.47±3.42* 35.65±4.58* 109.74±8.13★ 58.78±5.34*氯雷他定 5.72±1.12 20.25±2.28 44.63±4.26 62.19±7.26 119.69±7.68平敏煎高劑量組 5.73±0.79△ 20.15±3.26△ 43.52±3.28△ 61.01±11.32△ 120.57±13.36△平敏煎中劑量組 5.98±0.77# 23.13±2.34# 39.34±2.47# 89.53±3.48# 76.63±12.45#平敏煎低劑量組 6.24±0.83# 25.52±3.15# 37.43±3.74# 92.35±9.48# 68.54±11.26#

3.2 平敏煎對大鼠腹腔肥大細胞脫顆粒的影響與正常組比較，模型組脫顆粒率極顯著升高（P＜0.01），表明病理狀態下，肥大細胞大量脫顆粒，釋放多種炎癥介質。與模型組比較，均可減少肥大細胞脫顆粒，差異有顯著性（P＜0.05 或P＜0.01），具體見表2。

表2 平敏煎對大鼠腹腔肥大細胞脫顆粒的影響（，n=10）

表2 平敏煎對大鼠腹腔肥大細胞脫顆粒的影響（，n=10）

注：與正常組比較，*P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，△P＜0.01。

組別 脫顆粒率/% 抑制率/%正常 19.23±5.12 -模型 60.10±11.35* -氯雷他定 28.91±9.24 53.65±10.93平敏煎高劑量組 29.47±8.31△ 52.92±11.28平敏煎中劑量組 39.51±11.43# 38.36±15.17平敏煎低劑量組 42.53±9.84# 32.18±7.94

4 討論

氣血不足，營衛失和是慢性蕁麻疹的病理基礎。氣不足則衛外失固，風邪乘虛而入；血不足則虛風內生，肌膚失養而出現風團、皮膚瘙癢不已等癥，且反復發作，纏綿難愈。故治法應兼顧標本，以補益氣血，調理臟腑為主，兼祛外邪，消風止癢。方中生地、何首烏、當歸、丹皮、地骨皮養血潤燥，養陰祛風；荊芥、防風、白鮮皮、刺蒺藜祛外風；全蝎、蜈蚣屬蟲類藥，病久者以其搜風入絡、搜剔化疲通絡藥；生黃芪與當歸配益氣養血；苦參、黃柏祛濕止癢，防濕邪纏綿；烏梅、五味子酸收藥，與祛風藥合用，一散一收，開合有度，祛邪而不傷正。全方共奏益氣養血、潤燥祛風、化疲通絡的功效。

目前，蕁麻疹的發病機制尚不完全清楚，其中心環節是肥大細胞活化脫顆粒，釋放多種炎性介質等引起毛細血管擴張及通透性增加，導致真皮淺層急性水腫。皮膚中的P 物質能導致肥大細胞脫顆粒釋放介質，引起組胺、類胰蛋白酶等生物活性物質的快速釋放，可促進免疫細胞吞噬作用和細胞因子的分泌［4-5］，并增加血管通透性，促進白細胞外滲參與促炎過程［6］。SP 可直接刺激嗜酸性粒細胞釋放過氧化物酶、乳酸脫氫酶和氧自由基、血栓烷B2 等［7］。

血清Ig E 作為介導Ⅰ型變態反應的主要抗體，在變態反應疾病中起關鍵作用。IL-4、IFN-γ 分別是Th1、Th2 細胞的自分泌因子，而且與Ig E 的生成密切相關。IL-4 可選擇性導致嗜酸性粒細胞從循環血管溢出向炎癥部位移行、聚集，增強肥大細胞來源的炎癥介質活性，也是促肥大細胞生長因子。IFN-γ 是由Th1 細胞分泌可誘導Th 細胞向Th1 細胞分泌，抑制IL- 4 誘導Th 細胞向Th2 細胞分化；可拮抗IL- 4 誘導B 淋巴細胞增殖及產生IgE［8］。5-HT 在慢性蕁麻疹發病中也取到重要作用，王俠生［9］通過測定尿5-羥吲哚乙酸、5-HT 發現均有異常，提示蕁麻疹的發病可能與5-HT 有關。

實驗結果顯示，模型組大鼠血清SP、IL- 4、Ig E、水平極顯著升高，IFN-γ、5-HT 水平極顯著降低。通過平敏煎治療后，IFN-γ、5-HT 水平顯著升高，而其余的都顯著下降，提示平敏煎具有調節炎癥介質釋放，抑制體內IgE 生成，從而抑制Ⅰ型變態反應的發生。