關于氨基糖苷類抗菌藥物分析方法的思考

祝曉鳳

（阿克蘇地區藥品檢驗所，新疆 阿克蘇 843000）

與其他抗菌物質有所不同的是，在臨床上氨基糖苷類抗菌藥物有著較為嚴重的腎毒性和耳毒性，這和藥物中的雜質，特別是藥物中的有毒雜質密切相關。因此，需要建立有效的藥物分析方法，從而控制藥物中有毒雜質的含量，從而不斷的提升藥品的綜合質量，此事已然迫在眉睫[1]。本文綜述了近年來氨基糖苷類抗生素的分析方法，為氨基糖苷類抗生素分析方法的發展提供了思路。

1 介紹氨基糖苷類抗菌藥物分析方法

1.1 微生物檢定法

抗生素微生物檢定法是我國常用的、低成本、易推廣的微生物檢測方法，但微生物法是多組分藥物的總效價，不能充分反映藥物的內在質量，另外，該方法受多種因素的影響，并且操作比較耗時。

1.2 高效液相色譜-蒸發光散射檢測

蒸發光散射探測器是一種通用的探測器，其原理是，當樣品以流動相進入檢測器時，霧化器蒸發流動相的溶劑，在進入加熱管以后溶劑便立刻揮發，被分析物質的粒子被激光散射，散射光為光，收集并響應倍增管，其反應不取決于物質的光學特性，而是取決于被分析物質的粒子數量和大小，任何比流動相波動性小的物質都能被檢測出來。在2015版《中國藥典》中，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料（pH范圍0.8～8.0）和0.2 mol L-1三氟乙酸溶液甲醇（84:16）為流動相，用HPLC-ELSD法測定了硫酸依替米星的有關物質[2]。妥布霉素、硫酸慶大霉素、硫酸小諾霉素等氨基糖苷類抗菌物質的測定規定了采用高效液相色譜ELSD法。

1.3 高效液相色譜-脈沖安培電化學

近幾年以來，脈沖電流檢測器（PAD）在歐美等國家檢測氨基糖苷類抗生素的應用日益增多，其的藥典已在許多品種中使用，在中國，高效液相色譜-脈沖安培電化學法已逐漸成為氨基糖苷類抗生素分析的熱點。高效液相色譜-脈沖安培電化學法有著高效、選擇性好、高靈敏度、響應范圍廣等優點，但是此方法也存在著無法解決的問題[3]。

2 高效液相色譜柱后衍生

2.1 衍生化方法

衍生化方法分為兩種：柱前衍生和柱后衍生。在色譜圖分析之前，柱前衍生參照與感應體的試劑的反應，然后在色譜圖系統中的分離和檢測之前將反應導體。這種方法大多數情況下都是在離線進行，麻煩的操作和派生很多副產品。柱后衍生是分析化學中常用的在線處理技術，這意味著在所選擇的色度圖形條件下將多列混合物的色度圖列分離，當各成分從列中流出時，在某種反應條件下與導體試劑發生反應，然后導體生成物相互依賴，檢測二次條目檢測器，柱后衍生具有優勢，其優點在于：不改變分離成分的色度圖行為、移動相選擇限制少、單純性及迅速性、準確可靠性高的結果、良好的再現性及儀器價格適中[4]。

2.2 高效液相色譜柱后衍生技術在氨基糖苷分析中的應用

為了檢測氨基葡萄類抗生素，柱后衍生化技術使用活性基，在氨基、誘導體化試劑等氨基葡萄類抗生素的結構上通過紫外吸收或熒光形成誘導體。電離機的檢測界限為0.57 ng，是hlc-elsd法的200倍以上，這個方法操作簡單，分離能力高，高靈敏度，高精度。但是，這個方法有幾個缺點。據報道，雙醛、2、4-二氧化碳（fdnb）、氨基葡糖類抗菌劑等誘導體試劑均為氨基基，如果目標不包括初級氨基，因為其不能派生，所以不會被檢測。（2）柱后衍生化具有幾種提取效果，在色度圖峰值之間的分辨率降低。

2.3 三種方法的比較

與HPLC-ELSD法相比，柱后衍生化法和HPCPAD法具有分離效果、靈敏度高的優點。與HPLCPAD方法相比，兩種方法分離能力和靈敏度大致相同。在經濟適用性方面，后期專欄衍生產品是適度的價格，容易普及，但電氣化學器具更昂貴，在中國不怎么普及。