曙紅Y與馬波沙星相互作用的分光光度法研究及應(yīng)用

李華岑，徐坤，鞏丹

(河南省獸藥飼料監(jiān)察所，鄭州 450008)

馬波沙星(MBLX)為新一代氟喹諾酮類抗菌藥，主要用于敏感菌引起的犬陰道炎、包皮炎以及由肺炎鏈球菌等敏感菌引起的犬呼吸道感染，母豬乳房炎-子宮炎-無(wú)乳綜合癥(MMA)的治療。氟喹諾酮類藥物報(bào)道的測(cè)定方法有分光光度法[1-4]，熒光法[5-6]，原子吸收法[7]，高效液相色譜法[8-10]等。在原有研究基礎(chǔ)上[11]，進(jìn)行了曙紅Y(EY)與馬波沙星相互作用的分光光度法研究，建立了曙紅Y測(cè)定馬波沙星的新方法，用于馬波沙星注射液中馬波沙星含量的測(cè)定，結(jié)果滿意。

1 材料與方法

1.1 材料 PE公司lamda35型雙光束紫外光譜儀；BT 224S分析天平(Sartorius公司)；馬波沙星(中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，批號(hào)H0801511，含量99.8%)：50.8 mg·L-1；5.0×10-4mol·L-1曙紅Y溶液；0.01%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)溶液；0.1%十六烷基三甲基溴化銨(CTMAB)；0.1%十二烷基苯磺酸鈉(SDBS)；馬波沙星注射液(河北遠(yuǎn)征藥業(yè)有限公司，批號(hào)為DN2180302，規(guī)格：50 mL：5g)；所用水為純化水；其它試劑為分析純。

1.2 方法 在10 mL容量瓶中依次加入1.00 mL曙紅Y溶液、適量馬波沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測(cè)液、1.0 mL 0.01% PVP溶液，加0.1 mol/L鹽酸0.6 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，以水為參比立即進(jìn)行光譜掃描或固定波長(zhǎng)為536 nm進(jìn)行吸光度測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 吸收光譜 以水為空白，對(duì)體系進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可知，馬波沙星(10 mg·L-1)在400～600 nm范圍內(nèi)幾乎沒(méi)有吸收，曙紅B(5.0×10-5mol·L-1) 在516 nm有最大吸收峰，加入馬波沙星后體系最大吸收紅移到536 nm，紅移20 nm，且吸光度明顯增加。說(shuō)明體系中應(yīng)該有馬波沙星與曙紅Y的復(fù)合物生成。

2.2 酸度對(duì)體系的影響 在10 mL容量瓶中，依次加入1.00 mL曙紅Y溶液、2.0 mL馬波沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別用1、0.1、0.01、0.001 mol/L鹽酸稀釋至刻度，搖勻，以水為參比立即進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)用0.01mol/L鹽酸稀釋后體系最大吸收波長(zhǎng)紅移最大。隨后考察了0.1 mol/L鹽酸加入體積的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)體系中加入0.4～0.8 mL 0.1 mol/L鹽酸時(shí)，最大吸收波長(zhǎng)紅移波長(zhǎng)最大，且最大吸收波長(zhǎng)穩(wěn)定在536 nm波長(zhǎng)處，選擇0.1 mol/L鹽酸加入量為0.6 mL。

圖1 吸收光譜圖

2.3 體系吸光度的穩(wěn)定性 體系的吸光度隨時(shí)間減小，10 min后溶液變渾濁并慢慢產(chǎn)出沉淀，為了提高體系的穩(wěn)定性考察了非離子表面活性劑對(duì)吸光度的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加入0.01% PVP 1.0 mL后體系不再發(fā)生渾濁、吸光度非常緩慢的變小，2 h內(nèi)體系吸光度僅減小3%。為提高測(cè)定準(zhǔn)確性，選擇體系混勻后立即測(cè)定。

2.4 表面活性劑的影響及反應(yīng)機(jī)理探討 加入0.01% PVP 1.0 mL，體系吸光度有一定的增大。加入陰離子表面活性劑0.1% SDBS 0.3mL，體系最大吸收波長(zhǎng)由536nm變?yōu)?15nm，并且吸收光譜圖和曙紅Y本身的吸收光譜圖相似。加入陽(yáng)離子表面活性劑0.1% CTMAB 0.02 mL，體系的吸光度增大。

非離子表面活性劑PVP的存在可能會(huì)聚集體系中MBLX與EY的復(fù)合物，形成膠束增敏體系使體系的吸光度增大。

在EY溶液中加入MBLX或CTMAB，對(duì)體系進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果見(jiàn)圖2。由圖可知，MBLX (20 mg.L-1)與CTMAB(2 mg·L-1)的加入均能使EY(5.0×10-5mol·L-1)的最大吸收波長(zhǎng)發(fā)生紅移，推測(cè)MBLX、CTMAB與EY的結(jié)合方式是相似的。CTMAB與EY的結(jié)合可能主要是CTMAB分子中的季銨N+正電荷與EY分子中的羧酸基-COO-負(fù)電荷間的作用。MBLX分子中有叔胺，在酸性條件下，容易形成季銨N+正電荷，可以和EY分子中的羧酸基-COO-負(fù)電荷結(jié)合生成離子復(fù)合物(MBLX和EY分子結(jié)構(gòu)圖見(jiàn)圖3)。

圖2 吸收光譜圖

體系中加入30mg/L 的SDBS時(shí)，體系最大吸收波長(zhǎng)由536 nm變?yōu)?15 nm，并且體系的吸收光譜圖和曙紅Y本身的吸收光譜圖相似。大量SDBS的存在會(huì)抑制EY與MBLX復(fù)合物的形成，因?yàn)殪o電引力是一種非定向性的作用力，在大量SDBS陰離子的存在下，MBLX大部分可能會(huì)與SDBS結(jié)合，生成MBLX與SDBS的復(fù)合物，從而抑制MBLX與EY復(fù)合物的生成，而MBLX與SDBS的復(fù)合物在536 nm沒(méi)有吸收或有很弱的吸收，從而使體系的吸光譜圖和曙紅Y本身的吸收光譜圖相似。

圖3 馬波沙星與曙紅Y的分子結(jié)構(gòu)圖

因而，推測(cè)馬波沙星與曙紅Y主要通過(guò)靜電引力結(jié)合，形成離子復(fù)合物。

2.5 線性范圍、檢出限和精密度 馬波沙星在10.2～50.8 mg·L-1濃度范圍內(nèi)服從比爾定律；回歸方程為：A=0.0057c(mg·L-1)+0.4349，相關(guān)系數(shù)為0.9947。按cL=3S/K得方法檢出限為3 mg·L-1。對(duì)濃度為20 mg·L-1的馬波沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行平行測(cè)定求得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.6%(n=6)。

2.6 樣品測(cè)定 精密量取馬波沙星注射液1 mL，置200 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻；取適量供試品溶液按實(shí)驗(yàn)方法對(duì)樣品進(jìn)行分析，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 馬波沙星注射液的測(cè)定和回收(n=6)

3 討論與結(jié)論

馬波沙星和曙紅Y在酸性條件下主要通過(guò)靜電引力結(jié)合生成復(fù)合物，由于復(fù)合物分子表面不帶凈電荷會(huì)凝聚生成沉淀，為了增加體系的穩(wěn)定性，體系經(jīng)過(guò)考察后加入非離子表面活性劑聚乙烯吡咯烷酮。加入聚乙烯吡咯烷酮后體系不再生成沉淀，吸光度穩(wěn)定性大大增強(qiáng)。測(cè)定樣品時(shí)為提高精密度和準(zhǔn)確度，對(duì)照品和供試品應(yīng)同時(shí)配置，并應(yīng)注意試劑加入順序，鹽酸溶液應(yīng)最后加入，體系混合均勻后應(yīng)立即測(cè)定其吸光度。