缺氧誘導(dǎo)因子1α對(duì)肺組織急性炎癥的調(diào)控作用研究

張科東 周鳳 付紅艷 馬萍

1寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科,銀川750004;2寧夏醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科,銀川750001

缺氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)是調(diào)節(jié)氧穩(wěn)態(tài)平衡的核心轉(zhuǎn)錄因子,在機(jī)體的生理和病理過(guò)程中起著關(guān)鍵作用,目前已發(fā)現(xiàn)有100多個(gè)基因受其調(diào)控,在氧穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)、代謝以及腫瘤細(xì)胞的低氧適應(yīng)等方面發(fā)揮著重要作用[1]。低氧可誘導(dǎo)HIF-1α的表達(dá),但低氧并非其唯一誘導(dǎo)因素。有研究表明,在常氧狀態(tài)下,一些炎性因子如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及細(xì)菌代謝產(chǎn)物等也可通過(guò)不同途徑促進(jìn)HIF-1α的表達(dá)[2]。HIF-1α在胞內(nèi)積聚后,迅速進(jìn)入胞核,促進(jìn)下游基因的轉(zhuǎn)錄,從而在多個(gè)不同的層面對(duì)炎癥發(fā)揮調(diào)控作用,但HIF-1α對(duì)急性炎癥的調(diào)控作用及機(jī)制目前仍不清楚。本研究通過(guò)應(yīng)用HIF-1α基因敲除(Hif-1α+/-)小鼠,建立Hif-1α+/-小鼠的急性肺損傷模型,研究HIF-1α在肺組織急性炎癥中的作用,并初步闡明其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Hif-1α+/-小鼠及其野生型對(duì)照(Hif-1α+/+)小鼠由廣州呼吸疾病健康研究院、呼吸疾病國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供,6～8周齡,體質(zhì)量20～23 g,無(wú)特定病原體級(jí)環(huán)境中喂養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)獲得廣州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物管理和使用委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 主要試劑 脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司,TNF-α和KC檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自美國(guó)E-bioscience公司,TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)羅氏公司。

1.3 方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)分組 將Hif-1α+/-小鼠及Hif-1α+/+小鼠隨機(jī)分為Hif-1α+/-實(shí)驗(yàn)組、Hif-1α+/-對(duì)照組、Hif-1α+/+實(shí)驗(yàn)組和Hif-1α+/+對(duì)照組,每組8～10只。

1.3.2 ALI小鼠模型的建立 用1%戊巴比妥麻醉各組小鼠。實(shí)驗(yàn)組小鼠經(jīng)鼻滴入LPS 10μg(溶解于50μl生理鹽水),確保LPS全部進(jìn)入氣道及肺泡,建立ALI模型;對(duì)照組小鼠則經(jīng)鼻滴入等量生理鹽水。……