硫氮雜茚聯吡唑的合成及其抗驚厥活性

劉大川, 王 影

(1. 蚌埠醫學院 a. 藥學院; b. 公共基礎學院，安徽 蚌埠 233030)

癲癇在民間被稱為“羊癲風”或“羊角風”，是由大腦神經元突發性的異常放電導致的短暫大腦功能障礙，屬慢性疾病。全球癲癇患者人數眾多，其中中國癲癇患病率為0.7%，每年新發病例近40萬。雖然部分癲癇癥狀可通過手術、生酮飲食等方式治療，但大部分患者仍然需要長期服用藥物。新型抗癲癇藥物的研究迫在眉睫[1-3]。

1,3-硫氮雜茚結構是一種獨特的活性骨架，研究人員以其為基礎，合成了諸多有藥理活性的化合物[4-7]。部分化合物表現出良好的抗癲癇活性[8-9]。五元含氮雜環作為一類經典的分子，在有機合成化學、農藥學、藥物化學及生物學領域有廣泛的研究和應用，其中含有吡唑基團或取代吡唑基團的化合物，具有較好的抗菌活性[10]、抗腫瘤活性[11]、抗炎活性[12]、硝化抑制作用[13]等和抗驚厥活性[14]。

Scheme 1

基團拼合原理表明，將具有類似活性的兩個分子拼合到一個分子內，有可能獲得具有較好活性或較低毒副作用的新結構。根據該原理，研究人員發現了貝諾酯、苯丁酸氮芥等多種藥物。

本文將1,3-硫氮雜茚結構與3,5-二甲基吡唑環兩種活性結構進行了拼合，并在1,3-硫氮雜茚環的6-位引入不同長度的脂肪鏈或不同取代芐基，以調節脂水分配系數和分子中的電荷分布，控制化合物透過血腦屏障的劑量和與受體結合的程度。以對甲氧基苯胺為起始原料，經催化環合、肼代、乙酰丙酮環合、脫甲基和烷基化反應合成了一系列吡唑聯6-取代芐基-1,3-硫氮雜茚環為骨架的系列化合物(6a～6o， Scheme 1)，其結構經1H NMR,13C NMR, IR和MS(EI)表征。采用動物模型驗證了6a～6o的活性。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

BURKER AV-300 MHz型核磁共振儀(CDCl3為溶劑，TMS為內標)；FT-IR 1730型傅立葉變換紅外光譜儀(KBr壓片)；AXIMA CFR Plus型飛行時間質譜儀。

所用試劑均為分析純或化學純。

1.2 合成

(1) 2-氨基-6甲氧基-1,3-硫氮雜茚(2)的合成

將對甲氧基苯胺6.15 g(50 mmol)和硫氰酸銨19.0 g(250 mmol)加至150 mL圓底燒瓶中，加入冰乙酸50 mL，于室溫反應0.5 h。冰浴冷卻，滴加液溴9.9 g(55 mmol)的冰乙酸(3.0 mL)溶液，滴畢，反應5 h(TLC跟蹤)。倒入500 mL水中，用氨水調至pH 9，抽濾，濾餅真空干燥得灰白色固體26.2 g，收率69%， m.p.158～161 ℃[15]。

(2)3的合成

在反應瓶中依次加入25.0 g(28 mmol)和乙二醇20 mL，滴加98%濃硫酸1.5 mL，滴畢，于80 ℃反應0.5 h。加入水合肼10 mL，升溫至140 ℃，反應5 h(TLC監測)。倒入50 mL冰水中，有淡綠色針狀固體析出，抽濾，濾餅避光干燥得33.3 g，收率60%, m.p.167～169 ℃;1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 8.76(s, 1H), 7.30(d,J=2.6 Hz, 1H), 7.21(d,J=8.8 Hz, 1H), 6.80(dd,J=8.8 Hz, 2.6 Hz, 1H), 4.94(s, 2H), 3.73(s, 3H); MS(EI)m/z: 196{[M+H+]}。

(3)4的合成

將32.0 g(10 mmol)與乙酰丙酮1.0 g(10 mmol)加入反應瓶中，加入二氧六環20 mL，于100 ℃反應1 h。減壓蒸除溶劑,黃色粗品經硅膠柱層析(洗脫劑：CH2Cl2)純化得白色固體41.9 g，收率72.3%， m.p.124～126 ℃；1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 7.76(d,J=8.9 Hz, 1H), 7.31(d,J=2.3 Hz, 1H), 7.05(d,J=8.9 Hz, 1H), 6.04(s, 1H), 3.90(s, 3H), 2.77(s, 3H), 2.32(s, 3H);13C NMR(75 MHz, CDCl3)δ: 159.17, 157.11, 151.80, 145.81, 142.17, 134.13, 122.83, 114.85, 109.97, 104.30, 55.76, 13.82, 13.62; IRν: 1604.77(C=N), 1577.77(C=C) cm-1; MS(EI)m/z: 260{[M+H+]}。

(4)5的合成

將42.6 g(10 mmol)溶于二氯甲烷50 mL中，冰浴冷卻，滴加三溴化硼7.5 g(30 mmol)，滴畢，于室溫反應5 h。緩慢滴加冰水至無白色煙霧產生，減壓蒸除二氯甲烷，殘余物抽濾，濾餅用水洗滌后經硅膠柱層析(洗脫劑：CH2Cl2)純化得淡黃色固體50.95 g，收率38.82%, m.p.186～188 ℃;1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 7.73(d,J=8.7 Hz, 1H), 7.28(s, 1H), 6.96(d,J=8.7 Hz, 1H), 6.05(s, 1H), 5.30(s, 1H), 2.77(s, 3H), 2.32(s, 3H);13C NMR(75 MHz, CDCl3)δ: 160.53, 157.77, 153.05, 146.74, 146.19, 134.41, 123.03, 115.12, 110.02, 107.00, 90.41, 13.71, 13.56; IRν: 1602.81(C=N), 1579.77(C=C) cm-1; MS(EI)m/z: 246{[M+H+]}。

(5)6a～6o的合成通法

將50.5 g(2 mmol)，取代氯芐1.1 eq.和碳酸鉀0.5 g(3.6 mmol)加入反應瓶中，加入乙腈20 mL和芐基三乙基氯化銨(TEBA)0.1 g，攪拌下于60 ℃反應12～48 h(TLC跟蹤)。減壓蒸除溶劑，殘余物用50 mL熱水洗滌30 min，抽濾，濾餅真空干燥得6a～6o。

2-(3,5-二甲基-1H-1-吡唑基)-6-丁氧基-1,3-硫氮雜茚(6a): 白色固體，收率76.52%, m.p.92～94 ℃;1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 7.75(d,J=8.9 Hz, 1H), 7.30(s, 1H), 7.04(d,J=8.7 Hz, 1H), 6.04(s, 1H), 4.04(t,J=6.4 Hz, 2H), 2.77(s, 3H), 2.32(s, 3H), 1.94～1.74(m, 2H), 1.59～1.45(m, 2H), 1.02(t,J=7.1 Hz, 3H);13C NMR(75 MHz, CDCl3)δ: 156.69, 151.77, 145.68, 142.16, 134.10, 122.78, 115.31, 109.93, 105.04, 68.34, 31.34, 19.26, 13.86, 13.82, 13.62; IRν: 1604.77(C=N), 1577.77(C=C) cm-1; MS(EI)m/z: 302{[M+H+]}。

2-(3,5-二甲基-1H-1-吡唑基)-6-戊氧基-1,3-硫氮雜茚(6b): 白色固體，收率61.28%, m.p.89～91 ℃;1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 7.75(d,J=8.9 Hz, 1H), 7.30(d,J=2.5 Hz, 1H), 7.04(d,J=8.9 Hz, 1H), 6.04(s, 1H), 4.03(t,J=6.6 Hz, 2H), 2.77(s, 3H), 2.32(s, 3H), 1.83(dd,J=14.4 Hz, 6.8 Hz, 2H), 1.54～1.33(m, 4H), 0.96(t,J=7.1 Hz, 3H);13C NMR(75 MHz, CDCl3)δ: 158.99, 156.63, 151.70, 145.61, 142.09, 134.04, 122.72, 115.24, 109.87, 104.97, 68.58, 28.93, 28.15, 22.41, 13.97, 13.75, 13.55; IRν: 1604.77(C=N), 1577.77(C=C) cm-1; MS(EI)m/z: 316{[M+H+]}。

2-(3,5-二甲基-1H-1-吡唑基)-6-己氧基-1,3-硫氮雜茚(6c): 白色固體，收率67.71%, m.p.78～80 ℃;1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 7.75(d,J=9.0 Hz, 1H), 7.30(d,J=2.7 Hz, 1H), 7.04(d,J=8.8 Hz, 1H), 6.04(s, 1H), 4.03(t,J=6.5 Hz, 2H), 2.77(s, 3H), 2.32(s, 3H), 2.00～1.74(m, 2H), 1.82～1.40(m, 2H), 1.46～1.19(m, 4H), 0.94(t,J=7.1 Hz, 3H);13C NMR(75 MHz, CDCl3)δ: 159.00, 156.63, 151.70, 145.62, 142.08, 134.04, 122.72, 115.24, 109.87, 104.97, 68.59, 31.53, 29.20, 25.68, 22.55, 13.98, 13.75, 13.56; IRν: 1608.63(C=N), 1577.77(C=C) cm-1; MS(EI)m/z: 330{[M+H+]}。

2-(3,5-二甲基-1H-1-吡唑基)-6-庚氧基-1,3-硫氮雜茚(6d): 白色固體，收率70.32%, m.p.85～87 ℃;1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 7.75(d,J=8.9 Hz, 1H), 7.30(d,J=2.5 Hz, 1H), 7.04(dd,J=8.9 Hz, 2.5 Hz, 1H), 6.04(s, 1H), 4.03(t,J=6.5 Hz, 2H), 2.77(s, 3H), 2.32(s, 3H), 1.95～1.74(m, 2H), 1.55～1.27(m, 8H), 0.92(t,J=6.6 Hz, 3H);13C NMR(75 MHz, CDCl3)δ: 159.00, 156.63, 151.69, 145.61, 142.07, 134.03, 122.72, 115.24, 109.86, 104.96, 68.59, 31.73, 29.13(d,J=17.1 Hz), 25.96, 22.56, 14.04, 14.04, 13.75, 13.56; IRν: 1608.63(C=N), 1577.77(C=C) cm-1; MS(EI)m/z: 344{[M+H+]}。

2-(3,5-二甲基-1H-1-吡唑基)-6-辛氧基-1,3-硫氮雜茚(6e): 白色固體，收率62.78%, m.p.80～82 ℃;1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 7.75(d,J=8.9 Hz, 1H), 7.30(d,J=2.5 Hz, 1H), 7.04(dd,J=8.9 Hz, 2.5 Hz, 1H), 6.04(s, 1H), 4.03(t,J=6.5 Hz, 2H), 2.77(s, 3H), 2.32(s, 3H), 1.96～1.73(m, 2H), 1.60～1.12(m, 10H), 0.90(t,J=7.0 Hz, 3H);13C NMR(75 MHz, CDCl3)δ: 159.00, 156.63, 151.70, 145.61, 142.08, 134.03, 122.72, 115.24, 109.86, 104.97, 68.60, 31.76, 29.24, 26.00, 22.61, 14.05, 14.05, 13.75, 13.56; IRν: 1608.63(C=N), 1577.77(C=C) cm-1; MS(EI)m/z: 358{[M+H+]}。

2-(3,5-二甲基-1H-1-吡唑基)-6-芐氧基-1,3-硫氮雜茚(6f): 白色固體，收率56.18%, m.p.117～119 ℃;1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 7.77(d,J=8.9 Hz, 1H), 7.58～7.34(m, 6H), 7.12(dd,J=8.9 Hz, 2.5 Hz, 1H), 6.05(s, 1H), 5.15(s, 2H), 2.77(s, 3H), 2.33(s, 3H);13C NMR(75 MHz, CDCl3)δ: 159.27, 156.19, 151.77, 145.97, 142.11, 136.64, 134.04, 128.55, 128.00, 127.44, 122.80, 115.45, 109.93, 105.57, 70.57, 13.76, 13.56; IRν: 1604.77(C=N), 1579.70(C=C) cm-1; MS(EI)m/z: 336{[M+H+]}。

2-(3,5-二甲基-1H-1-吡唑基)-6-(2-氟芐氧基)-1,3-硫氮雜茚(6g): 白色固體，收率61.18%， m.p.126～128 ℃;1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 7.78(d,J=8.9 Hz, 1H), 7.56(t,J=7.3 Hz, 1H), 7.42(d,J=2.4 Hz, 1H), 7.36(d,J=5.9 Hz, 1H), 7.22(d,J=7.5 Hz, 1H), 7.18～7.05(m, 2H), 6.05(s, 1H), 5.22(s, 2H), 2.78(s, 3H), 2.33(s, 3H3);13C NMR(75 MHz, CDCl3)δ: 162.02, 159.37, 158.74, 155.93, 151.79, 146.12, 142.12, 134.05, 129.68(dd,J=7.9 Hz, 6.1 Hz), 124.20(d,J=3.5 Hz), 122.81, 115.31(t,J=10.6 Hz), 109.94, 105.66, 64.34, 13.74, 13.54; IRν: 1604.77(C=N), 1577.97(C=C) cm-1; MS(EI)m/z: 354{[M+H+]}。

2-(3,5-二甲基-1H-1-吡唑基)-6-(3-氟芐氧基)-1, 3-硫氮雜茚(6h): 白色固體，收率63.36%, m.p.101～103 ℃;1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 7.78(d,J=8.9 Hz, 1H), 7.38(s, 2H), 7.28～7.15(m, 2H), 7.11(d,J=8.9 Hz, 1H), 7.05(s, 1H), 6.05(s, 1H), 5.14(s, 2H), 2.77(s, 3H), 2.32(s, 3H);13C NMR(75 MHz, CDCl3)δ: 164.54, 161.27, 159.39, 155.86, 151.80, 146.14, 142.12, 139.26(d,J=7.3 Hz), 134.07, 130.08(dd,J=8.7 Hz, 3.9 Hz), 123.04～122.13(m), 115.33, 115.13(d,J=28.9 Hz), 114.66, 114.27, 113.98, 109.94, 105.65, 69.72, 13.71, 13.51; IRν: 1604.77(C=N), 1597.77(C=C) cm-1; MS(EI)m/z: 354{[M+H+]}。

2-(3,5-二甲基-1H-1-吡唑基)-6-(4-氟芐氧基)-1,3-硫氮雜茚(6i): 白色固體，收率72.10%, m.p.97～99 ℃;1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 7.77(d,J=8.9 Hz, 1H), 7.45(dd,J=8.4 Hz, 5.5 Hz, 2H), 7.38(d,J=2.5 Hz, 1H), 7.22～7.04(m, 3H), 6.05(s, 1H), 5.10(s, 2H), 2.77(s, 3H), 2.32(s, 3H);13C NMR(75 MHz, CDCl3)δ: 164.09, 160.82, 159.34, 155.99, 151.79, 146.06, 142.11, 134.05, 132.40, 129.27(d,J=8.1 Hz), 122.81, 115.47(d,J=14.5 Hz), 109.95, 105.59, 69.89, 13.72, 13.52; IRν: 1604.77(C=N); 1573.91(C=C) cm-1; MS(EI)m/z: 354{[M+H+]}。

2-(3,5-二甲基-1H-1-吡唑基)-6-(2-氯芐氧基)-1,3-硫氮雜茚(6j): 白色固體，收率52.52%, m.p.108～110 ℃;1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 7.79(dd,J=8.8 Hz, 2.6 Hz, 1H), 7.67～7.58(m, 1H), 7.49～7.39(m, 2H), 7.32(dd,J=6.3 Hz, 3.1 Hz, 2H), 7.21～7.10(m, 1H), 6.05(s, 1H), 5.25(s, 2H), 2.77(s, 3H), 2.33(s, 3H);13C NMR(75 MHz, CDCl3)δ: 159.41, 155.89, 151.78, 146.17, 142.12, 134.24(d,J=22.1 Hz), 132.56, 129.32, 129.13～129.04(m), 128.85(d,J=21.1 Hz), 126.89, 122.83, 115.30, 109.93, 105.77, 67.74, 13.73, 13.53; IRν: 1602.82(C=N), 1573.91(C=C) cm-1; MS(EI)m/z: 370{[M+H+]}。

2-(3,5-二甲基-1H-1-吡唑基)-6-(3-氯芐氧基)-1, 3-硫氮雜茚(6k): 白色固體，收率78.96%, m.p.112～114 ℃;1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 7.86～7.73(m, 1H), 7.56～7.47(m, 1H), 7.46～7.30(m, 4H), 7.18～7.05(m, 1H), 6.06(s, 1H), 5.13(s, 2H), 2.78(s, 3H), 2.33(s, 3H);13C NMR(75 MHz, CDCl3)δ: 159.52, 155.95, 151.92, 146.27, 142.24, 138.83, 134.57, 134.18, 129.91, 128.20, 127.45, 125.38, 122.96, 115.42, 110.08, 105.75, 69.80, 13.86, 13.66; IRν: 1602.85(C=N), 1573.91(C=C) cm-1; MS(EI)m/z: 370{[M+H+]}。

2-(3,5-二甲基-1H-1-吡唑基)-6-(4-氯芐氧基)-1,3-硫氮雜茚(6l): 白色固體，收率70.62%, m.p.110～112 ℃;1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 7.77(d,J=8.9 Hz, 1H), 7.42(d,J=9.8 Hz, 4H), 7.37(d,J=2.5 Hz, 1H), 7.10(dd,J=8.9 Hz, 2.5 Hz, 1H), 6.05(s, 1H), 5.11(s, 2H), 2.77(s, 3H3), 2.32(s, 3H);13C NMR(75 MHz, CDCl3)δ: 159.49, 156.02, 151.93, 146.22, 142.24, 135.25, 134.17, 133.88, 128.81, 122.95, 115.45, 110.09, 105.73, 69.87, 13.86, 13.66; IRν: 1604.77(C=N), 1573.91(C=C) cm-1; MS(EI)m/z: 370{[M+H+]}。

2-(3,5-二甲基-1H-1-吡唑基)-6-(2,6-二氯芐氧基)-1,3-硫氮雜茚(6m): 白色固體，收率52.80%, m.p.128～130 ℃;1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 7.79(dd,J=8.9 Hz, 1.9 Hz, 1H), 7.47(d,J=2.3 Hz, 1H), 7.44～7.24(m, 3H), 7.21～7.11(m, 1H), 6.05(s, 1H), 5.36(s, 2H), 2.78(s, 3H), 2.33(s, 3H);13C NMR(75 MHz, CDCl3)δ: 159.59, 156.37, 151.87, 146.47, 142.25, 137.07, 134.14, 132.06, 130.77, 130.46, 128.50, 122.91, 115.79, 115.38, 110.01, 106.21, 66.13, 13.76, 13.59. IRν: 1602.85(C=N), 1573.91(C=C) cm-1; MS(EI)m/z: 404{[M+H+]}。

2-(3,5-二甲基-1H-1-吡唑基)-6-(4-三氟甲基芐氧基)-1,3-硫氮雜茚(6n): 白色固體，收率50.12%, m.p.142～144 ℃；1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 7.79(d,J=9.0 Hz, 1H), 7.76(s, 1H), 7.67(d,J=7.3 Hz, 1H), 7.62(s, 1H), 7.56(d,J=7.5 Hz, 1H), 7.40(d,J=2.4 Hz, 1H), 7.13(dd,J=9.0 Hz, 2.4 Hz, 1H), 6.05(s, 1H), 5.19(s, 2H), 2.78(s, 3H), 2.33(s, 3H);13C NMR(75 MHz, CDCl3)δ: 159.57, 155.89, 151.97, 146.34, 142.26, 137.79, 134.19, 131.23, 130.61, 129.11, 127.40, 124.87(dd,J=7.4 Hz, 3.7 Hz), 124.10(dd,J=7.4 Hz, 3.6 Hz), 122.99, 115.38, 110.10, 105.74, 69.82, 13.84, 13.64; IRν: 1604.77(C=N), 1573.91(C=C) cm-1; MS(EI)m/z: 404{[M+H+]}。

2-(3,5-二甲基-1H-1-吡唑基)-6-(4-甲基芐氧基)-1, 3-硫氮雜茚(6o): 白色固體，收率72.52%, m.p.110～112 ℃;1H NMR(300 MHz, CDCl3)δ: 7.76(d,J=8.9 Hz, 1H), 7.37(d,J=6.8 Hz, 3H), 7.23(d,J=8.0 Hz, 2H), 7.11(dd,J=8.8 Hz, 2.2 Hz, 1H), 6.05(s, 1H), 5.10(s, 2H), 2.77(s, 3H), 2.39(s, 3H), 2.32(s, 3H);13C NMR(75 MHz, CDCl3)δ: 159.34, 156.40, 151.85, 146.04, 142.22, 137.89, 134.15, 133.72, 129.34, 127.70, 122.89, 115.61, 110.03, 105.67, 70.64, 21.26, 13.87, 13.68; IRν: 1606.70(C=N), 1577.77(C=C) cm-1; MS(EI)m/z: 350{[M+H+]}。

1.3 活性測試

參照美國國立衛生院(NIN)公布的“抗癲癇藥開發計劃”[16-17]的相關試驗方法，進行了化合物的活性評價實驗。在抗癲癇新藥實驗篩選模型中，最大電驚厥實驗(MES)一直被認為是最有效的重要動物實驗模型之一[18]。因此，本文采用MES模型評價了目標化合物的抗癲癇活性，用旋轉棒法評價了化合物的神經毒性(Tox)，用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT法)評價了化合物的細胞毒性。

(1) MES

采用昆明種小鼠，實驗前24 h，以110 V， 50 Hz的交流電，耳電極刺激0.2 s進行小鼠篩選，出現后肢強直表現的可以用于實驗。實驗時，采用腹腔注射藥物，使用相同的條件進行電刺激，不出現后肢強直的為陽性，表明該化合物有抗癲癇作用[19]。

將受試化合物溶于DMSO中，腹腔注射首先選擇300 mg·kg-1劑量，每組選用3只小白鼠，分別在給藥0.5 h和4 h后進行抗最大電驚厥活性短時效和長時效評價，以及相應時間的神經毒性評價。如果某個化合物在300 mg·kg-1劑量下，3只小鼠在接受測試化合物后，出現抗MES引起的癲癇現象，并且沒有表現出神經毒性，則測試該化合物在100 mg·kg-1是否表現出抗癲癇活性。

(2) Tox

小鼠腹腔給藥后，將小鼠放置在以6 rpm旋轉的直徑為1 inch的波浪形表面的圓柱上，在連續3次實驗中，每次均能保持1 min平衡而不落下的為神經毒性陰性，反之為陽性[20]。

(3) 定量評價統計方法

藥理學定量評價實驗是依照改良的寇氏法進行抗驚厥活性的半數有效量(ED50)和半數神經毒性(TD50)的計算，同時計算出相應的95%可信限[21]。

(4) MTT

待測化合物使用DMSO助溶，使藥物濃度為20 μmol·L-1。另設置空白對照組(只含培養基)和陰性對照組(即0 μmol·L-1藥物濃度組)。每組均設有3個復孔。使用MTT染色，并根據吸光度值計算細胞存活率[22]。本研究僅使用了MDA-MB-231細胞進行試驗，針對其他種類細胞的毒性有待進一步研究。

2 結果與討論

2.1 合成

目標化合物的合成是以對甲氧基苯胺為起始原料，在液溴的催化下與硫氰酸銨反應制得中間體2[23];2與水合肼在酸催化下進行肼代反應得到肼代物3，而后用乙酰丙酮進行環合引入二甲基吡啶基團得到化合物4;4在BBr3的作用下脫去6-位甲氧基上的甲基[24]并裸露酚羥基，然后采用具有不同取代基和取代位置的氯芐進行反應得到目標產物6a～6o。各反應步驟均有較好收率。

2.2 活性

(1) 抗癲癇活性和安全性初篩

300 mg·kg-1劑量的藥理實驗結果見表1。由表1可以看出，化合物6a、6b、6c、6g、6i、6j以及6m在300 mg·kg-1的劑量下，表現出不同程度的抗癲癇作用，且未見神經毒性。此外，化合物6m在4 h長效評價中也表現出一定的癲癇作用。因此我們選取這7個化合物進行100 mg·kg-1劑量下的抗癲癇活性測試，實驗結果見表2。

(2) 抗癲癇活性和安全性定量評價

根據初篩結果，選擇在100 mg·kg-1劑量下表現出活性的化合物6a、6b、6g和6m進行定量藥理活性評價實驗，以臨床常見藥物丙戊酸鈉作為對照藥物，測定其抗最大電驚厥實驗的半數有效量ED50和半數神經中毒劑量TD50，實驗結果見表3。由表3可以看出，這四個化合物均表現與對照藥物相近甚至優于丙戊酸鈉的活性，其中出化合物6g的活性相對較好，且毒性較低，保護指數為2.74，安全性優于對照藥物丙戊酸鈉。

表1 抗癲癇活性篩選(300 mg·kg-1劑量)

a抗最大電驚厥試驗;b旋轉棒法神經毒性實驗;c給藥與測試間隔時間;d陽性結果小鼠數目/被測小鼠數目。

表2 抗癲癇活性篩選(100 mg·kg-1劑量)

表3 抗癲癇活性定量評價

e半數有效量;f半數神經毒性劑量;gPI=保護指數(TD50/ED50);h95%置信區間;i丙戊酸鈉。

(3) 細胞毒性

由臨床數據可知，抗癲癇藥物的治療窗一般較窄，因此在治療濃度下對細胞的毒性可以從用藥角度評價藥物的安全性。因此我們用MTT法對所得活性較好的化合物6g進行細胞毒性評價，結果見表4。由表4可知，被測化合物的給藥后細胞存活率超過85%，因此該系列化合物在細胞層面的安全性較高。

表4 細胞存活率

(4) 構效關系

對于合成的目標化合物活性評價的結果顯示，合成的二甲基吡啶聯1,3-硫氮雜茚系列化合物中，部分化合物表現出了較好的抗癲癇活性。其中在脂肪鏈取代的化合物中，6a和6b在0.5 h時表現出了一定的短時效抗驚厥活性，該活性在無取代基和甲基取代的化合物5和4中未發現，并且隨著碳鏈長度的增加，活性消失，且即使增加到了8個碳取代，活性也未再出現。在不同取代的芳香性的芐基取代系列化合物中，鄰氟芐基取代的化合物6g和2,6-位二氯芐基取代的化合物6m在0.5 h給藥間隔表現出了一定的短時效抗癲癇活性，而該當取代基的位置和取代基團發生變化時活性消失，并且吸電子基取代的化合物活性好于推電子基團。最大電驚厥定量評價結果顯示，化合物6g的活性和保護指數均優于對照藥物，而后的細胞毒性實驗中，所有化合物表現出了較低的細胞毒性,。

本文以對甲氧基苯胺為起始原料，經過一系列反應合成得到17個3,5-二甲基取代吡唑-6-取代-1,3-硫氮雜茚系列化合物，并測試其抗電驚厥活性、神經毒性以及細胞毒性。結果表明，鄰氟芐基取代的化合物6g，活性和保護指數均優于丙戊酸鈉，細胞毒性實驗中該化合物也未見明顯毒性。因此可以考慮作為潛在的抗癲劑或先導物進行進一步研究。