醫(yī)學(xué)檢驗實驗室臨床化學(xué)自建檢測方法的質(zhì)量保證方案

吳培東

天津市第五中心醫(yī)院 （天津 300450）

近年來，隨著醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)的進步和臨床科研需求的增高，實驗室自建檢測方法已經(jīng)逐漸進入醫(yī)院檢驗科的實踐范圍。其中，臨床化學(xué)自建檢測方法開展的條件低，為保證自建檢測方法數(shù)據(jù)的可靠性，必須建立適宜的質(zhì)量保證方案。

1 我國開展醫(yī)學(xué)檢驗實驗室自建檢測方法的現(xiàn)狀

醫(yī)學(xué)檢驗實驗室自建檢測方法是在獨立的醫(yī)學(xué)（檢驗）實驗室內(nèi)依據(jù)生物化學(xué)、細胞學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等原理，自行設(shè)計、生產(chǎn)、驗證并使用的分析人體蛋白組分、酶類、抗體、DNA、RNA、線粒體和各類疾病的體外診斷檢驗方法，只作為內(nèi)部使用而不作為商品出售[1-2]。目前，我國開展的實驗室自建檢測方法主要分為3類：（1）實驗室自行購買國家批準對外銷售的商品試劑，制作或?qū)Τ善蜂N售試劑盒組成、操作過程進行改良和變更；（2）購買成品試劑盒中的單組分，如酶、緩沖液、抗體、細胞探針、引物等配制新的試劑供實驗使用；（3）開展此項目的實驗室購買或使用未經(jīng)批準的成品試劑。臨床化學(xué)類自建檢測方法以上3種類型均可涉及。

2 實驗室自建檢測方法的管理模式

近年來，各國在實驗室自建檢測方法管理上大致分為兩類：（1）以美國為代表的明確監(jiān)管模式；（2）以歐洲和日本為代表的無明確監(jiān)管的模式。目前，我國法規(guī)層面尚未有針對實驗室自建檢測方法的準確定義及管理措施，能起到管理效能的行政法規(guī)有國務(wù)院頒布的《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》和原國家衛(wèi)生與計劃生育委員會發(fā)布的《關(guān)于臨床檢驗項目管理有關(guān)問題的通知》，即便如此，我國仍有很多實驗室以科研和研發(fā)為目的開展了許多實驗室自建檢測方法。但因為外部監(jiān)管不具體，所以，做好內(nèi)部質(zhì)量管理是開展此類工作實驗室的首要任務(wù)，尤其制定質(zhì)量保證方案是前提。

在實驗室自建檢測方法中，臨床化學(xué)自建檢測方法的開展條件低，大多數(shù)三級醫(yī)院檢驗科均可開展，因此，加強自我管理是關(guān)鍵，且臨床化學(xué)類自建檢測方法必須保證一定的靈敏度、精密度及正確度相對偏差，對比實驗和線性范圍均需達到一定的范圍。目前，ISO 15189是檢驗程序的性能驗證文件，要求臨床實驗室對自身使用的檢驗程序進行正確度、精密度、線性、可報告范圍及參考區(qū)間等性能的驗證[3-4]；另外，需參照美國臨床和實驗室標(biāo)準協(xié)會（CLSI）頒布的相關(guān)文件（CLSI EP17-A2評價最低檢測限文件、CLSI EP5-A2評價精密度文件、CLSI EP15-A3評價正確度相對偏差文件、CLSI EP9-A3評價對比實驗文件、CLSI EP6-A評價線性范圍文件[5]）進行評估。

3 實驗室臨床化學(xué)自建檢測方法的質(zhì)量保證方案

3.1 儀器設(shè)備的質(zhì)量保證方案

3.1.1 檢查儀器設(shè)備的擺放及安裝

檢查儀器設(shè)備的環(huán)境、安裝、防塵、防潮、工作溫度以及噪聲是否符合廠商要求；檢查儀器設(shè)備電源、穩(wěn)壓設(shè)施、UPS和地線是否符合安裝要求，是否遠離高頻電源或高壓線纜，以防電磁干擾對儀器設(shè)備的影響；檢查儀器設(shè)備是否受陽光直接照射，是否遠離腐蝕性、揮發(fā)性物體。

3.1.2 建立、完善儀器設(shè)備的使用規(guī)章制度

建立、完善儀器設(shè)備的使用崗位責(zé)任制度，將集中管理和分散管理相結(jié)合，貴重儀器設(shè)備由專人管理，維護責(zé)任制度的相關(guān)規(guī)定；建立、完善儀器設(shè)備的操作制度，嚴格遵守操作規(guī)程，嚴禁違規(guī)操作；建立、完善開機檢查、使用、正常維護、報警排除及故障檢修制度；建立、完善室內(nèi)外質(zhì)量控制等級和分析制度，保證儀器設(shè)備的運行穩(wěn)定性。

3.1.3 加強儀器設(shè)備操作人員的培訓(xùn)

加強人員上崗前的培訓(xùn)，操作人員需充分了解儀器設(shè)備的結(jié)構(gòu)、工作原理、維護知識，熟悉調(diào)試、校準、儀器設(shè)備參數(shù)和參數(shù)修改的正確方法及儀器設(shè)備報警的快速識別和故障排除方法，充分掌握質(zhì)量管理方法和問題分析；此外，還需學(xué)習(xí)和掌握儀器設(shè)備涉及的物理、化學(xué)及電子方面的知識，提高外語閱讀能力。

3.2 臨床化學(xué)自建檢測方法的質(zhì)量管理體系

3.2.1 總分析誤差的評估和排除

總分析誤差包括隨機誤差和系統(tǒng)誤差。參照CLSI推薦的方案，將臨床化學(xué)自建檢測方法同可溯源的參比方法相結(jié)合，直接測定總分析誤差；根據(jù)防范要求測定自建方法120個樣品，每個樣品均需使用溯源的參比方法，重復(fù)10次后，計算總分析誤差。

3.2.2 統(tǒng)計質(zhì)量控制程序的選擇

根據(jù)測量程序觀察到的不精密度和偏倚以及不同質(zhì)量控制規(guī)則和不同控制測量數(shù)的失控特征選擇統(tǒng)計質(zhì)量控制程序，為了選擇適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計質(zhì)量控制程序，可通過功效曲線或功效函數(shù)描述不同控制規(guī)則和不同質(zhì)量控制測量數(shù)的失控特征。

3.3 臨床化學(xué)自建檢測方法分析性能的管理方案

3.3.1 最低檢測限

參照CLSI推薦的EP17-A2文件，應(yīng)用實驗室自建的臨床化學(xué)檢測方法所使用的試劑，對零含量標(biāo)準品重復(fù)實驗20次后，計算均值和標(biāo)準差，以此作為最低檢測限。

3.3.2 精密度

參照CLSI推薦的EP5-A2文件，應(yīng)用實驗室自建的臨床化學(xué)檢測方法，通過測定兩個不同濃度的質(zhì)控品，每個質(zhì)控品在同等條件下重復(fù)測定20次后，計算此方法的批內(nèi)變異系數(shù)（CV），批內(nèi)CV值低于6%作為合格標(biāo)準；同時，兩個不同濃度的質(zhì)控品以此方法連續(xù)測定20 d，計算批間CV，批間CV值低于8%作為合格標(biāo)準。

3.3.3 正確度相對偏差

正確度相對偏差的測定結(jié)果決定了是否能夠購買和提供公認的質(zhì)控物。參照CLSI推薦的EP15-A3文件，測定不同批次的標(biāo)準品和公認的質(zhì)控物，分別重復(fù)測定3次后，計算均值和參考值的相對偏差值，以低于8%作為合格標(biāo)準。

3.3.4 對比實驗

對比實驗適用于自配替代檢驗試劑的自建臨床化學(xué)檢測方法。參照CLSI推薦的EP9-A3文件，選擇40個自建臨床化學(xué)檢測方法測試范圍內(nèi)不同濃度的標(biāo)本，與銷售商品試劑同步檢測，使用線性回歸方程計算兩種試劑的相關(guān)系數(shù)和測量值上限預(yù)期偏差。

3.3.5 線性范圍

參照CLSI推薦的EP6-A文件，接近測量低限樣本和接近測量高限樣本各取1份，將低限樣本和高限樣本按照1:0、3:1、1:1、1:3、0:1 5個濃度比例配制梯度樣本，每個濃度樣本重復(fù)測定3次并計算均值；以理論值為自變量，以測量值為因變量，計算線性回歸方程，求得變異系數(shù)；將按比例的稀釋度作為理論值代入該線性回歸方程，求出估算值，進而求出估算值與測量值偏差；最后得出相對偏差與絕對偏差。

4 小結(jié)

實驗室臨床化學(xué)自建檢測項目由儀器、試劑、校準品、質(zhì)控品等組成。目前，國內(nèi)一些醫(yī)學(xué)實驗室已開展了自建檢測系統(tǒng)的實驗，因此，應(yīng)建立完備的質(zhì)量保證方案，為發(fā)展實驗室臨床化學(xué)自建檢測方法提供可靠的質(zhì)量保證。