一起青年麻鴨感染禽坦布蘇病毒的診斷

代芝藝 張 瑞 岳 穩(wěn) 鄭小蘭 王藝萍 劉榮昌 黃 瑜

（福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，福建省畜禽疫病防治工程技術(shù)研究中心 福州 350013）

自2010年初起，我國(guó)蘇、閩、浙等多個(gè)省種（蛋）鴨發(fā)生了一種以：“產(chǎn)蛋量驟降、卵泡出血”為主要特征的新發(fā)疫病，經(jīng)一系列研究證實(shí)該病病原為一種新的黃病毒（Flavivirus），稱該病為鴨坦布蘇病毒病（Duck Tembusu Virus Disease，DTVD）[1]。臨床上感染鴨群以采食量迅速下降、產(chǎn)蛋率急劇下降甚至停產(chǎn)及出現(xiàn)不同程度死亡為特征，各品種鴨均有發(fā)生。不同地區(qū)、不同品種鴨群發(fā)病率高低不一，同群發(fā)病率幾乎為100%，病死率在0%～5%，DTVD最早在種鴨和蛋鴨群中發(fā)生，隨后有從種（肉）鵝、種（肉）鴨、種（蛋）雞、鴿、麻雀以及發(fā)病鴨場(chǎng)周圍的蚊中檢測(cè)或分離到該病毒的報(bào)道[2-4]。鑒于DTV（Duck Tembusu Virus，DTV）感染宿主的范圍，黃瑜等將鴨坦布蘇病毒病統(tǒng)一科學(xué)命名為禽坦布蘇病毒病 （Avian Tembusu Virus Disease，ATVD），以避免不同命名的混亂[4]。 近年來，ATV（Avian Tembusu Virus，ATV）的感染以成年產(chǎn)蛋種鴨或麻鴨多見，后備或青年種（蛋）鴨感染該病較為少見。本文就一起廣東省某鴨場(chǎng)青年蛋麻鴨感染ATV的診斷作詳細(xì)報(bào)告，以期為同行提供參考借鑒。

1 發(fā)病情況

2019年7月，廣東省惠州市某鴨場(chǎng)飼養(yǎng)的青年蛋麻鴨發(fā)病，該場(chǎng)共飼養(yǎng)麻鴨近5 000羽，60日齡左右時(shí)開始發(fā)病。發(fā)病鴨群臨床表現(xiàn)為采食量下降，發(fā)熱、軟腳，排黃綠色糞便，后期消瘦；部分鴨表現(xiàn)站立不穩(wěn)、側(cè)臥、癱瘓等神經(jīng)癥狀；至70日齡，共死亡近200羽（病死率3%～4%）。期間使用抗生素、抗病毒藥物等均無明顯效果，遂來我所就診。

2 剖檢病變

對(duì)患鴨進(jìn)行剖檢，主要可見脾臟腫大、有輕微出血或壞死點(diǎn)，卵巢充血、出血，腦輕微水腫；其余臟器未見明顯病變。應(yīng)養(yǎng)殖戶要求，對(duì)該病例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室確診。

3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

無菌采集患鴨肝臟、脾臟、卵巢、腦等組織，與無菌生理鹽水以1:3的比例稀釋后勻漿，組織勻漿液經(jīng)反復(fù)凍融3次后以8 000 r/min離心5 min，吸取上清液進(jìn)行核酸提取。

3.1 （RT）PCR檢測(cè) 按照北京全式金Easy Pure Viral DNA/RNA Kit核酸提取試劑盒操作，對(duì)組織勻漿液進(jìn)行核酸提取。參照文獻(xiàn)說明，對(duì)禽坦布蘇病毒進(jìn)行檢測(cè)[5]，同時(shí)對(duì)采集樣品進(jìn)行常見鴨病病毒（禽流感病毒、新城疫病毒、鴨瘟病毒、鴨肝炎病毒、鴨呼腸孤病毒、番鴨細(xì)小病毒、小鵝瘟病毒等）及細(xì)菌性的鴨大腸桿菌、鴨疫里默氏菌檢測(cè)[6]。(RT)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物以1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離，結(jié)果僅禽坦布蘇病毒呈陽(yáng)性，其余病原檢測(cè)均為陰性（見圖1）。將被檢樣品PCR陽(yáng)性產(chǎn)物送生工生物工程 （上海）股份有限公司測(cè)序，獲得序列與ATV各代表株采用MEGA5.0軟件進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示其與已報(bào)道的ATV核苷酸同源性高達(dá)95%以上。

3.2 診斷結(jié)果 根據(jù)上述發(fā)病情況、剖檢病變、實(shí)驗(yàn)室（RT）PCR檢測(cè)及序列測(cè)定結(jié)果，可確定引起該群麻鴨發(fā)病的病原為禽坦布蘇病毒。

4 防治措施

現(xiàn)階段對(duì)禽坦布蘇病毒病的防控措施主要采取預(yù)防和治療相結(jié)合的方法。在鴨坦布蘇病毒病疫苗研究方面，ATV滅活苗、減毒活疫苗和基因工程苗等已經(jīng)取得一定進(jìn)展，比如ATV活疫苗（FX2010-180P株），以及通過抗原純化、超濾濃縮等工藝制備的禽坦布蘇病毒滅活疫苗（HB株）[7-8]。抗體研究方面主要集中在卵黃抗體和克隆抗體[9]。對(duì)于該病的預(yù)防，要做好生物安全防控：一是對(duì)傳染源的控制，包括不從疫區(qū)引進(jìn)種禽、種蛋，飼料來源要安全，防止帶毒禽（包括野鳥）和污染物品進(jìn)入；二是對(duì)傳播媒介的控制，包括做好消毒、消滅養(yǎng)殖場(chǎng)周邊蚊、蜱等傳播媒介；三是嚴(yán)格執(zhí)行隔離、消毒制度，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。

5 討論與體會(huì)

ATVD是近年來暴發(fā)的一種主要引起蛋鴨發(fā)病的新發(fā)病毒性傳染病，根據(jù)其臨床癥狀和流行病學(xué)，只可以作出初步的判斷。該起病例感染宿主為青年蛋麻鴨，感染日齡較早（60日齡），而臨床上大多數(shù)養(yǎng)殖戶通常在開產(chǎn)前才對(duì)蛋鴨進(jìn)行免疫。因此，提醒廣大養(yǎng)殖戶對(duì)于該病的預(yù)防應(yīng)早作免疫。ATV感染蛋鴨后通常主要引起鴨群產(chǎn)蛋異常，死亡率較低，而上述廣東省惠州病例，其鴨群病死率達(dá)3%~4%；ATV作為蟲媒RNA病毒，而廣東夏季炎熱多蚊，也給病毒的傳播提供了有利條件；該病毒是否變異、致病性是否增強(qiáng)，還有待進(jìn)一步研究。因此，提醒相關(guān)從業(yè)者應(yīng)加強(qiáng)對(duì)該病毒傳播媒介的控制以及病毒的監(jiān)測(cè)。本文從臨床診斷、病原檢測(cè)和基因序列分析等多方面著手，對(duì)廣東省惠州市某發(fā)病青年蛋麻鴨群進(jìn)行系統(tǒng)診斷，為ATV的臨床診斷提供了科學(xué)依據(jù)和借鑒。