觀賞魚腐皮病的診斷與治療

趙振宇，肖 嘯

（云南農業大學動物醫學院 650201）

隨著人們生活水平的提高， 觀賞魚越來越受到大眾的歡迎，增加了日常生活的樂趣，豐富了人們的愛好。 我國作為較早養殖觀賞魚的國家，在觀賞魚養殖方面取得了一定的發展。 但在國際市場的競爭下，國內觀賞魚養殖缺乏行業組織、養殖技術水平落后、 疾病防治水平不高等多種問題， 從而限制了行業的發展。 腐皮病由細菌感染引起, 不同地區和四季都有不同程度的流行，近年來，本病已是常見多發病，對魚的危害較為嚴重。 魚感染之后，往往會較長時間不愈，嚴重影響生長發育和繁殖。 此病的感染率可高達80%[1]。 但一般以夏、秋較易發病，28℃～32℃為其流行高峰期。

1 發病經過

2018 年5 月13 日，某風景區內養殖的群體觀賞魚中，出現了發病情況， 臨床上主要表現為體表皮膚異常病變， 不斷地腐爛，出現潰瘍病灶，并出現零星死亡。 該風景區和水產部門聯系，進行疾病診斷。 筆者后來得知，該批觀賞魚已經出現了較長時間的發病情況，初期臨床癥狀較輕，沒有引起重視，隨后病情快速傳播蔓延，以至于有1/3 左右的魚群出現了發病。 通過對水體進一步檢查，發現水質普遍較差，水體當中的包含氣溶素、溶血素、細胞毒素、腸毒素、HEC 毒素等含量嚴重超標，各種毒素存在，以及在各種致病源的相互作用之下，加重了疾病的傳播蔓延。

2 臨床癥狀

發病初期在患病魚的皮膚和下層肌肉出現紅斑，隨著病情進一步加重發展，魚的鱗片脫落，肌肉腐爛，病灶的直徑越來越大，深度加深，形成潰瘍，嚴重的會露出骨骼或內臟。 病灶呈圓形或橢圓形，周緣充血發紅，狀似打上了一個紅色印記，因此又稱為打印病[2]。 病情嚴重的患病魚身體消瘦，游動緩慢，食欲減退，終至衰竭而死。 通過對發病觀賞魚進行目測觀察可以發現患病魚的體色異常，發紅充血、出血、有紅點斑和黑點斑。 體表異常，掉鱗、腐爛、潰瘍，鰭缺損，無囊腫和包囊，有零星死亡。 眼睛正常，無混濁和失明。口腔無潰爛和異常。鰓正常，無褪色和腐爛[3]。

3 實驗室診斷

3.1 細菌分離與純化

選取患病魚具有典型癥狀的病灶組織， 體表經無菌水洗滌后， 用手術刀片將表皮污染物輕輕剝離再用無菌棉簽粘取皮膚分泌物，接種于普通營養瓊脂培養基，“Z”字形三區劃線，放入37℃的恒溫箱培養24h。 病原菌在普通營養瓊脂培養基上生長良好，形成表面濕潤、邊緣整齊、光滑、半透明、灰白色至淡黃色的2～3mm 圓形菌落，在綿羊血瓊脂平板上培養出來的半透明、光滑的菌群，溶血很明顯。 選取形狀、色澤可疑的菌落挑出1～3 個單菌落進行肉湯擴菌，之后接種于血平板，放入37℃恒溫培養箱培養24h。 將血瓊脂上有溶血情況的細菌進行革蘭氏染色，然后鏡檢，觀察細菌顏色和形態。 在鏡檢中，可見為短桿，呈單一或兩兩相連的革蘭氏陰性菌.

3.2 細菌生化試驗

微生物在代謝過程中， 由于各自產生的酶都具有不同的特性，其分解與合成代謝產物都不相同。 所以利用這些代謝產物不同的生化性質進行生化試驗， 找出試驗所需的生化管用小砂輪劃生化管的上部，然后用手掰開，將分離純化的菌液用接種環分別接種到各個生化管里，塞上無菌棉球，放恒溫箱37℃培養48h。

深化實驗發現該種致病菌能夠發酵水楊苷、 葡萄糖、 七葉苷、半乳糖，VP 試驗陰性。結合細菌分離培養和生化實驗，可以判定致病原因嗜水氣單胞菌。

3.3 藥敏試驗

取上述純培養物進行藥敏試驗。在無菌操作臺上，在酒精燈火下，用移液槍抽取適量培養物，將細菌均勻涂布于營養瓊脂培養基上，將鑷子在酒精燈火焰滅菌后略停，取藥敏片有規律的貼到平皿培養基表面，分別進行了青霉素、鏈霉素、慶大霉素、環丙沙星、新霉素、強力霉素、頭孢哌酮、頭孢曲松、卡那霉素、丁胺卡那霉素、 頭孢氨芐等抗生素藥敏試驗。 之后將平皿培養基置于37℃的溫箱中培養24h 后，分別測定抑菌圈的直徑。 藥敏實驗發現該種致病菌對頭孢哌酮、頭孢曲松、環丙沙星高敏，對丁胺卡那、頭孢氨芐中敏，對青霉素、鏈霉素、慶大霉素、新霉素、卡那霉素、強力霉素不敏感。

4 防治

嗜水氣單胞菌感染引起的觀賞魚腐皮病應該結合藥品實驗，選擇高敏抗生素進行對癥治療。 具體治療方案如下：選用頭孢曲松20～30mg 溶于10kg 水中，將魚浸泡15～20min，每天一次，連續一周。 在藥物控制病情后，對水質進行調節，選用經濟的生石灰15～25g/m3全池潑灑，15d 后進行第二次潑灑。 綜合以上治療措施，觀賞魚感染嗜水氣單胞菌的病情得以控制。 在今后防治過程中，應該嚴格控制水體質量，避免水質受到污染，每間隔3～5d 更換一次水，每次水流動3～5h，防止魚群之間相互撕咬。 同時還應該密切觀察整個魚群的進食和生長情況，一旦發現患病魚，應該將其挑出進行單獨隔離養殖，并向整個魚池當中潑灑15～20倍液的大蒜浸出液。或者潑灑300 倍液的碳酸氫鈉水溶液。或者使用60 倍液的EM 菌水溶液，每間隔3～5d 潑灑一次，連續使用2～3 次，對防控該種疾病傳播流行有很大幫助。

5 討論

最近幾年， 關于觀賞魚腐皮病的病原菌都有很多的研究，已經分離到的病原菌包括溫和氣單胞菌、豚鼠產氣單胞菌、維羅納氣單胞菌和無色桿菌等多種細菌。 本實驗從患腐皮病的觀賞魚個體分離到的病原體， 接種在綿羊血平板上培養24h 出現溶血，進一步實驗室檢查確定，該病是由嗜水氣單胞菌所引起的[4]。

嗜水氣單胞菌不僅會感染魚也會感染其他動物和人，是一種典型人-獸-魚共患病病原菌，因此會給人類的健康帶來威脅。細菌獲得耐藥性是因為嗜水氣單胞菌為了適應外界環境的變化和抗生素的普遍使用，使耐藥性越來越嚴重[5]。 細菌的天然耐藥性， 是因為質粒介導即獲得外源耐藥基因和染色體介導即染色體基因選擇性突變導致， 或著是因為二者共同介導產生對抗生素的耐藥性。 表明嗜水氣單胞菌對很多抗生素存在多重耐藥性，并且對作用性質相同的或結構近似的同類抗生素具有交叉耐藥性。