丹夏降壓顆粒對自發性高血壓大鼠收縮壓及左心室肥厚的影響*

王艷煒， 吳變穩， 趙天資， 郭亞楠， 苗華為

(1.河北省中醫院 心內科， 河北 石家莊 050011； 2.中國人民解放軍聯勤保障部隊第九八零醫院， 河北 石家莊 050000)

根據心血管病數據統計的結果顯示，2016年我國高血壓患者已達2.7億人[1]，高血壓損傷的靶器官主要是心臟、腦及腎臟[2]，其中左心室肥厚(left ventricular hypertrophy,LVH)是高血壓的嚴重心臟損害之一[3]。LVH主要是由于主動脈壓力增高，引起心肌細胞代償性增大，持續進展出現間質細胞增生、膠質纖維合成增加，引起心室重構[4-6]；在此基礎上，左心室順應性進行性下降，最終導致心功能不全[7]。目前已被證實，LVH是心血管事件的獨立危險因素[8-10]，在臨床治療的過程中，治療高血壓已從單純的降低血壓、提高到注重逆轉LVH、減輕靶器官損害、減少心血管事件的發生[11]。心肌營養素-1(CT-1)得名于其能在體外誘導心肌細胞肥大[12]，他主要存在于心臟、參與調節心臟生理過程，促進心肌細胞增殖、生長[13]。丹夏降壓顆粒是河北省中醫院苗華為教授的經驗方，在臨床治療高血壓的過程中已顯示出顯著的治療效果，本研究旨在觀察其對自發性高血壓大鼠(SHR)血壓及心室肥厚的影響，為該藥的臨床應用提供進一步的理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1動物及分組 16只SHR大鼠，12周齡，雄性，體質量200～250 g；8只Wistar大鼠，12周齡，體質量270～300 g；均購于北京維通利華實驗技術有限責任公司。將SHR大鼠隨機均分為模型組和中藥組，每組8只；8只Wistar大鼠作為對照組。中藥組大鼠給予以丹夏降壓顆粒溶液灌胃，給藥劑量按照《中藥藥理試驗方法學》按人與大鼠的換算系數0.018計算，每日給藥1次；模型組與對照組大鼠給予同等體積的蒸餾水，均連續8周。

1.1.2主要試劑及儀器 丹夏降壓顆粒成分：半夏10 g、陳皮10 g、竹茹8 g、枳實10 g、丹參20 g、川芎12 g、桃仁10 g、紅花10 g，由河北省中醫院藥劑科提供。CT-1 和 β-actin 抗體(美國 Abcam 公司) ，其余試劑均為國產分析純，恒壓恒流電泳儀、凝膠成像系統(美國伯樂公司)。

1.2 方法

1.2.1大鼠血壓測定 分別于給藥前、給藥第4周及第8周時，大鼠在安靜、清醒的狀態下應用無創尾動脈儀測量各組大鼠的收縮壓及心率。每只大鼠測量3次，每次測量的時間間隔5 min，取平均值作為大鼠的收縮壓及心率。

1.2.2心臟指數(HWI)和左心室指數(LVMI)測定 第8周灌胃結束時，麻醉大鼠，開胸取出心臟，以4 ℃ PBS沖洗心臟，剪去血管及脂肪組織，用濾紙吸干，稱取全心質量。然后剪去心房及右心室，稱取左心室質量。HWI為全心質量與體質量的比值，LVMI為左心室質量與體質量的比值。

1.2.3CT-1蛋白含量測定 采用Western blot檢測大鼠心室肌細胞CT-1蛋白含量，將心室肌組織剪碎，加入細胞裂解液，搖勻置于冰上，勻漿30 min，4 ℃離心收集上清，應用BCA檢測法測定蛋白質含量，按比例配置分離膠及濃縮膠，取50 μg蛋白行SDS-PAGE電泳，再將蛋白轉移至硝酸纖維素膜上，用含5%脫脂奶粉的封閉液于搖床上封閉1 h；按說明書稀釋CT-1一抗抗體，加入一抗抗體，4 ℃過夜；加入辣根過氧化物偶聯的二抗孵育1 h后洗膜，加入顯影液進行曝光、掃描。以心肌細胞的β-肌動蛋白(β-actin)作為內參，觀察各組大鼠心室肌細胞CT-1蛋白的相對表達量。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 收縮壓和心率

與對照組比較，模型組和給藥組大鼠收縮壓顯著升高，差異有統計學意義(P<0.01)；治療后中藥組大鼠收縮壓較模型組顯著降低，第8周時顯著低于第4周，差異有統計學意義(P<0.01)。中藥組給藥后收縮壓較給藥前降低，差異有統計學意義(P<0.01)。3組大鼠給藥前后的心率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1、表2。

表1 給藥前后各組大鼠收縮壓比較Tab.1 The changes of systolic blood

注：(1)與對照組比較，P<0.01；(2)與模型組比較，P<0.01；(3)與同組給藥第4周比較，P<0.01。

表2 治療前后各組大鼠心率比較Tab.2 The changes of heart rate in each

2.2 HWI及LVMI

給藥8周時，模型組和給藥組大鼠的HWI和LVMI均顯著高于對照組大鼠，差異具有統計學意義(P<0.01)。中藥組大鼠HWI和LVMI較模型組顯著下降，差異具有統計學意義(P<0.01)。見表3。

表3 治療8周時各組大鼠HWI及LVMI比較Tab.3 The comparison of left ventricular

注：(1)與對照組比較，P<0.01；(2)與模型組比較，P<0.01。

2.3 CT-1蛋白含量

給藥8周時，大鼠心肌細胞CT-1蛋白含量比較，模型組(0.428±0.025)和給藥組(0.365±0.008)均顯著高于對照組大鼠(0.303±0.004)，差異具有統計學意義(F=16.11，P<0.01)。中藥組大鼠心肌細胞CT-1蛋白含量較模型組顯著下降，差異具有統計學意義(P<0.01)。

3 討論

LVH與高血壓密切相關，但降壓并不是逆轉心室肥厚的唯一要素。參與這一復雜的病理生理過程的因素很多，如神經、體液、細胞因子等。CT-1作為IL-6 細胞因子家族的成員，是1995年Pennica等[12]發現的細胞因子，得名于其能在體外誘導心肌細胞肥大，CT-1存在于骨骼肌、卵巢、睪丸等多種組織，主要存在于心臟[13]，主要由心臟的心肌細胞和非心肌細胞生成[14-15]，具有廣泛的生物學活性。CT-1參與調節心臟生理過程，促進心肌細胞增殖、生長。在高血壓、心肌梗塞、心力衰竭、心肌炎等多種病理情況下，CT-1引起心室肥厚，一方面它能誘導心室肥厚的發生，且不同于α腎上腺素受體激活引起的心肌肥厚，CT-1誘導的心肌肥厚主要是心肌細胞拉長[16]。另一方面，CT-1通過刺激心肌成纖維細胞的增殖及膠原蛋白的合成，加速心肌纖維化，從而影響心室重構[17-18]。目前發現CT-1影響LVH的最重要機制是CT-1通過Janus激酶(janus kinase，JAK)-信號轉導和轉錄活化因子(signal transducer and activator of transcription，STAT)即JAK-STAT途徑引起心臟肥大，CT-1與其心肌細胞膜上的特異性跨膜受體即gp130/白血病抑制因子受體(LIFR)結合[19-20]，激活胞漿內與Jak激酶家族成員Jakl、Jak2 及Tyk2相關的酪氨酸激酶，使酪氨酸激酶磷酸化[21]，最后激活信號轉導和轉錄激活因子3(STAT3)，形成二聚體，轉導胞內信號。CT-1通過JAK-STAT3通路可激活血管緊張素原基因的啟動子，上調腎素-血管緊張素系統，促使血管緊張素原mRNA 產生增多誘導心肌細胞肥大[22]。

中醫理論認為，痰濁、瘀血是引起高血壓左室肥厚的重要病理因素高血壓引起LVH的機制是痰濁和瘀血[23]，痰濁、瘀血阻塞脈道，膠結血脈，心氣營運不暢，氣、血、痰膠結遂導致心肌肥厚[24-25]。鑒于此，丹夏降壓顆粒中的主要成分是半夏、陳皮、竹茹、枳實，功效即是燥濕、清熱、化痰，輔以丹參、川芎、桃仁、紅花等活血化瘀理氣藥，諸藥合用旨在通過清熱化痰，活血化瘀以達到降壓、逆轉心室肥厚的目的。本研究結果表明，中藥組給藥后收縮壓較給藥前降低(P<0.01)；給藥8周時，模型組和給藥組大鼠的HWI和LVMI均顯著高于對照組大鼠(P<0.01)；中藥組大鼠HWI和LVMI較模型組顯著下降(P<0.01)；大鼠心肌細胞CT-1蛋白含量比較，模型組(0.428±0.025)和給藥組(0.365±0.008)均顯著高于對照組大鼠(0.303±0.004)，差異具有統計學意義(F=16.11，P<0.01)。中藥組大鼠心肌細胞CT-1蛋白含量較模型組顯著下降，差異具有統計學意義(P<0.01)。

綜上所述，丹夏降壓顆粒降壓效果明確，但對于心率的影響不大，可以有效的降低HWI及LVMI，丹夏降壓顆粒不僅能改善心室肥厚，亦能在分子水平抑制CT-1表達。