HPV感染并宮頸病變患者外周血T細胞亞群的表達研究

唐蘇鐵，黃光墉，王金生

(1.深圳市寶安區福永人民醫院橋頭社區健康服務中心，廣東 深圳 518103；2.深圳市寶安區福永人民醫院檢驗科，廣東 深圳 518103)

在宮頸上皮內瘤變(CINⅠ)、宮頸癌發生與發展中，人乳頭瘤病毒(HPV)感染發揮重要作用[1]。且隨女性年齡增加，其體內雌激素水平持續降低，會影響內分泌、免疫功能，降低對HPV抵御和清除能力，這可能是HPV持續感染的關鍵[2-3]。而且，近年來，人們開始越來越多地關注宮頸疾病發生、發展中免疫狀態的作用，其中T淋巴亞群能對機體免疫狀態進行反映，被證實在HPV感染并宮頸病變中存在一定異常表達[4]。本研究為證實這一點，分析HPV感染宮頸病變發生與細胞免疫功能的相關性，選擇2016年5月～2018年5月本院200例HPV感染合并宮頸疾病患者的臨床資料，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：隨機抽取2016年5月～2018年5月本院200例HPV感染合并宮頸疾病患者，作為研究組。同樣方法選取同期到本院體檢的200名健康人，作為對照組。研究組年齡35～75歲，平均(56.36±6.33)歲；宮頸炎64例，宮頸上皮內瘤變CINⅠ48例，CINⅡ30例，CINⅢ38例，宮頸癌20例。對照組年齡33～78歲，平均(56.48±6.50)歲。兩組臨床資料保持同質性。研究組根據組織病理學檢查分為C組(宮頸炎+CINⅠ，n=112)、D組(CINⅡ～Ⅲ，n=68)、E組(宮頸癌，n=20)，且三組臨床資料保持同質性。納入標準：研究組符合：①確診為HPV感染；②存在宮頸疾病；③資料完整；對照組符合：①體檢各項檢查無異常；②資料完整。排除標準：①合并嚴重心、肝、腎等重要臟器疾病；②近期出現感染性疾病；③長期采用皮質類固醇激素或免疫抑制劑治療；④檢測前2周內使用過局部抗病毒藥物或系統抗病毒藥物；⑤妊娠、哺乳期婦女。

1.2方法

1.2.1HPV分型檢測：月經干凈后3～5 d開始取樣，取樣前3 d避免性生活。取樣時，以專用宮腔采樣刷，收取宮頸口、宮頸上皮脫落細胞，置入含專用細胞保存液的取樣瓶內，及時送檢。采用羅氏cobas 4800全自動分析儀及21種HPV分型檢測試劑盒進行檢測，檢測原理為PCR反向點雜交技術。其中，高危型含16、18、31、33等15種，低危型含6、11、42、43等6種。研究組根據監測結果分為A組(高危型NPV感染并宮頸病變，n=94)、B組(低危型NPV感染并宮頸病變，n=106)。

1.2.2外周血T細胞亞群檢測：抽取2 ml清晨空腹靜脈血，無需凍存，直接送檢。將血液標本直接與抗體混勻，室溫下避光孵育，持續20 min；加入紅細胞裂解液，室溫下避光孵育，持續10 min。2 000 r/min離心，持續10 min，棄上清液。以PBS洗液清洗細胞，重懸，上機檢測。外周血T細胞亞群以美國BD公司的FACSCanto II型流式細胞儀檢測，試劑盒購自德國Partec 公司。檢測指標包括CD3+、CD4+、CD8+，并計算CD4+/ CD8+。

1.3觀察指標：觀察研究組與對照組、研究組中A組、B組、C組、D組與E組檢測結果。

1.4統計學分析：所得數據以SPSS20.0統計學軟件分析。CD3+、CD4+細胞計數等計量資料以均數±標準差表示，以t檢驗。性別等計數資料樣本容量n>40,理論頻數T>5,用直接χ2檢驗。P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

研究組CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+均低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，CD8+高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。研究組中，A組CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+均低于B組，差異有統計學意義(P<0.05)，CD8+高于B組，差異有統計學意義(P<0.05)。E組CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+均低于C組、D組，且D組低于C組，差異有統計學意義(P<0.05)；E組CD8+細胞計數高于C組、D組，且D組高于C組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1各組外周血T細胞亞群檢測結果對比

組別例數CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)CD4+/ CD8+研究組20062.63±7.1835.08±3.5525.84±2.111.58±0.15A組9459.02±7.25②32.21±4.05②28.68±2.27②1.35±0.16②B組10666.24±7.1237.95±3.9023.00±2.571.80±0.14C組11268.10±8.00③37.94±3.70③23.01±2.01③1.82±0.15③D組6864.02±7.96③33.02±5.50③26.02±2.00③④1.33±0.25③E組2058.96±6.9929.30±3.9629.00±2.061.29±0.11對照組20069.90±5.42①40.24±3.70①21.22±2.40①1.89±0.18①

注：與研究組比較，①P<0.05；與B組比較，②P<0.05;與E組比較，③P<0.05；與C組比較，④P<0.05

3 討論

宮頸癌是一種常見婦科惡性腫瘤，高危因素較多，包括免疫力下降、多孕、多產、不良性行為、HPV感染等[5-6]。HPV屬于無包膜小型DNA病毒。多數宮頸癌患者存在高危型HPV感染，但并非所有HPV感染患者均可進展為宮頸癌。而且，宮頸癌發生與發展過程中，除HPV感染外，機體免疫功能變化也具有臨床意義[7]。

T淋巴細胞是免疫應答一個重要部分，可經由體液免疫、細胞免疫等途徑，有效殺滅病原體。CD4+和CD8+是T淋巴細胞常見亞群。CD4+提升極易誘發超敏反應，引發自身免疫性疾病；而過度下降會影響免疫功能，導致感染等疾病發生風險提升。CD8+具有直接殺傷性，表達提升可引發嚴重免疫紊亂，降低則會導致出現過度免疫反應。故兩者比例處于正常水平時，才能維持免疫系統平衡，發揮抗腫瘤作用。而一旦機體出現宮頸病變，其外周血T淋巴細胞亞群數量會出現變化，且隨著病情加重，可能引發細胞免疫系統失衡現象，導致免疫監視功能削弱或喪失。腫瘤篩查中檢測T淋巴細胞亞群，可為輔助檢查、預后評估等提供依據[8]。

本次研究重點調查了HPV感染宮頸疾病患者不同HPV分型、病理類型下T淋巴細胞亞群表達。結果發現，研究組CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+較對照組低，且CD8+較對照組高。可見與健康人相比，HPV感染并宮頸病變患者存在T淋巴細胞亞群異常表達。而且，高危型HPV感染患者CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+較低危型低，且CD8+較低危型高。唐玲等同樣證實，高危型HPV感染并宮頸病變患CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于低危型，CD8+高于低危型[9]，與此相符。考慮是因高危HPV感染可影響機體免疫系統，逃避免疫監測，導致免疫功能處于相對較差狀態。而且，隨HPV感染并宮頸疾病嚴重程度的增加，其CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+逐漸降低，CD8+逐漸增高，與楊晶等結果[10]相符。提示機體免疫功能下降、免疫功能紊亂，在宮頸病變發生、發展中發揮重要作用。

綜上所述，HPV感染在宮頸病變發生、發展中發揮重要作用，且影響機制可能是細胞免疫功能下降，逃避免疫監測，刺激生殖道，促進宮頸疾病發生、發展，需引起高度關注。