全血中EB病毒DNA定量檢測在鼻咽癌患者預后中的臨床意義

吳非常，溫尊北，吳祥成，謝 地

(高州市人民醫院腫瘤內一區，廣東 茂名 525200)

鼻咽癌為比較常見的惡性腫瘤之一，在腫瘤細胞中，EB病毒屬于皰疹病毒。在人體中，其存在形式主要以潛伏感染為主。所以在全血中，EBV的基因產物已經出現。EBV、NPC之間的關系密不可分的，可以為診斷NPC提供可行依據。現階段，檢測血液中，EBV基因的方法，常規聚合酶鏈反應、實時熒光定量PCR等得到了廣泛的應用[1]，其中，后者具有良好的靈敏度，所以在檢測NPC患者全血中的EBV、DNA時，實時熒光定量PCR得到了充分的體現。

1 資料與方法

1.1一般資料：初診NPC組為30例，NPC放療組為20例，NPC伴轉移患者為13例，NPC治愈后復查組為20例，其中，男40例，女43例，年齡35～78歲，平均(56.5±10.6)歲。加強實時熒光定量PCR方法的應用，對標本中EBV、DNA含量進行檢測。

1.2方法

1.2.1樣本采集:在檢測EBV、DNA時，乙二胺四乙酸二鈉抗凝得到了廣泛的應用，而且各個研究對象采集的外周血應為3ml，凍存的最佳溫度應為-20℃。

1.2.2DNA提取與基因擴增：使用核酸提取試劑盒，將每一個標本中的DNA提取出來，借助nanodrop紫外分光光度計，對核算的OD260/280和OD230/260的比值進行檢測[2]，以此來給予提取核酸的濃度和純度的評估提供一定的依據。

1.3實時熒光定量PCR測定結果判讀：在實時熒光定量PCR測定過程中，如果PCR循環次數增加，會增強樣本的相對熒光強度。在設置基線時，第1～15個循環中的平均相對熒光強度×10倍標準差，保證與此基線時所經歷的循環次數相符合，稱為循環閥值(Ct)。在實際操作過程中，獲取Ct值以后[3]，結合值大小，可以對所測標本的陽性與否進行判斷，再借助標準曲線，定量分析未知模板，從而對該樣本的DNA含量進行計算。

1.4統計學分析方法：選用SPSS15.0進行數據處理，計量資料用均數±標準差表示，組間比較采用t檢驗；計數資料用率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

4組患者全血中EBV、DNA的檢出率和拷貝數對數值對比如表1所示，組間EBV、DNA的檢出率對比，差異有統計學意義(P<0.05)。

3 討論

現階段，在治療NPC患者過程中，通過對全血中EBV、DNA含量的反復檢測，旨在為監測治療效果提供一定的幫助。一般來說，NPC對放療具有一定的敏感性，但是治療仍然難以取得成功。這主要是因為根治放療后的遠處轉移等所致。在本次研究中[4]，主要分為初診NPC組、NPC伴轉移組、NPC放療組、NPC治愈組[5]，旨在對NPC患者是否對放療產生敏感性進行研究，而且也可以對患者的治療效果進行有效預測。

在本文中，借助熒光定量PCR法[6]，對不同組間患者血液中的EBV、DNA進行檢測，結果陽性率分別76.67%、100%、61.54%、25%，而且不同組間的平均拷貝數的對數值分別為4.56、4.97、2.06、1.35，表明NPC組比放療組、治愈后復查組要高一些，而且放療組也比治愈后復查組要高，這與其他研究結果相一致，提示EBV極容易造成NPC的出現。

表14組患者全血中EBV、DNA的檢出率和拷貝數對數值對比

組別例數EBV、DNA檢出率[例(%)]EBV、DNA平均拷貝數的對數值初診NPC組3023(76.67)4.56NPC伴轉移組2020(100.00)4.97NPC放療組138(61.54)2.06NPC治愈組205(25.00)1.35P值<0.05<0.05