Ki-67及Ezrin蛋白在原發性肝癌病理中的診斷價值研究

陳瑋姍

(福建醫科大學附屬泉州市第一醫院病理科，福建 泉州 362000)

原發性肝癌是臨床上常見的惡性腫瘤，好發于40～50歲人群中，且男性發病率略高于女性[1]。原發性肝癌病因復雜，普遍認為與肝硬化、病毒性肝炎及黃曲霉素導管化學物質、環境等有關，發病早期臨床癥狀缺乏典型性，多數患者確診時已經是中、晚期，喪失了最佳診療時機[2]。Ezrin蛋白表達與多種惡性腫瘤的發生、發展及侵襲和轉移等有關，具有相對的組織和細胞特異性，能了解細胞膜、胞漿肌動蛋白細胞骨架。同時，Ezrin蛋白能調節細胞急性、影響細胞遷移及細胞的生長。細胞核增殖抗原(Ki67)是一種與細胞增殖特異度有關的核抗原，能反映細胞增殖的活躍程度[3]。但是，Ki67及Ezrin蛋白在原發性肝癌患者中的表達及診斷價值研究較少。因此，本文采用隨機對照方法進行研究，探討Ki67及Ezrin蛋白在原發性肝癌病理中的診斷價值，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：選擇2015年5月～2018年5月治療的原發性肝癌患者54例作為對象，患者均擬行手術治療，手術過程中取病灶組織與癌旁組織(距離病灶≥5 cm)，分別設為觀察組與對照組。男34例，女20例，年齡40～78歲，平均(61.25±5.85)歲；腫瘤直徑1～9 cm，平均(4.52±0.86)cm；腫瘤分期：Ⅰ～Ⅱ期28例，Ⅲ～Ⅳ期26例；分化程度：高分化20例，中分化25例，低分化9例。選擇同期入院治療的肝臟良性疾病手術患者38例，設為空白對照組，其中男21例，女17例，年齡41～79歲，平均(56.85±5.61)歲。各組臨床資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，有可比性。

1.2儀器與設備：見表1。

表1儀器與設備

儀器與試劑廠家倒置顯微鏡Nikon TS100,日本切片機香港Thermo Shandon T1離心機MSE MiSTRAL1000,英國基因引物上海博亞生物技術有限公司超低溫冰箱Thermo公司紫外分光光度儀日本

1.3方法：采用免疫組織化學法測定各組Ki67及Ezrin蛋白陽性率。分別取觀察組、對照組、空白對照組，加入蒸餾水與濃度為30.0%的H2O2，常溫下加入內源性酶10 min滅火，PBS 3次洗滌。將最終獲得的切片放置在0.01M枸櫞酸鹽緩沖液中，加入生理鹽水控制溶液pH值最終為6。電爐加熱直到煮沸，5 min間隔后再次煮沸，常溫下冷卻。采用PBS 2次洗滌，5 min/次，最后加入5%BSA封閉液并加入兔抗人Ki67及Ezrin蛋白一抗1滴。滴加完畢后進行3次PBS洗滌；1 ml底物中加入兔抗人Ki67及Ezrin蛋白二抗1滴，混合后常溫下顯色，蘇木素復染后封片，倒置顯微鏡下觀察細胞數量。每份標本測定三次，取平均值。

1.4判斷方法：參考奧爾雷德評分標準分別從細胞的陽性數量(陽性細胞數≤25.0%0分，26%-50.0%1分，51%-75%2分，>75%3分)、染色強度(不著色0分，黃色1分，棕黃色2分，黃褐色3分)完成免疫組化染色評分，總分16分，陽性率越高[4]。

1.5統計學分析：采用SPSS18.0統計學軟件處理數據，計數資料行χ2檢驗，采用率(%)表示，計量資料行t檢驗，采用均數±標準差表示，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1三組Ki67及Ezrin蛋白陽性率比較：觀察組的癌旁組織中Ki67及Ezrin蛋白陽性率與對照組比較，差異無統計學意義(P>0.05)；觀察組病灶組織中Ki67及Ezrin蛋白陽性率均高于其癌旁組織與對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2三組Ki67及Ezrin蛋白陽性率比較[例(%)]

組別例數Ki67蛋白Ezrin蛋白觀察組 病灶組織5435(64.81)32(59.26) 癌旁組織543(5.56)①②4(7.41)①②對照組381(2.63)②2(5.26)②

注：與對照組比較，①P>0.05；與觀察組病灶組織比較，②P<0.05

2.2觀察組不同病理下Ki67及Ezrin蛋白陽性率比較：觀察組原發性肝癌組織中Ki67及Ezrin蛋白陽性率與性別、年齡差異無統計學意義(P>0.05)；觀察組原發性肝癌組織中Ki67及Ezrin蛋白陽性率與腫瘤大小、腫瘤分期及分化程度差異具有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3觀察組不同病理下Ki67及Ezrin蛋白陽性率比較(例)

病理組織例數Ki67蛋白陽性(n=35)Ezrin蛋白陽性(n=32)χ2值P值性別男3422201.215>0.05女201312年齡≥60歲3020180.989>0.05<60歲241514腫瘤大小≥4 cm2724215.341<0.05<4 cm271111腫瘤分期Ⅰ～Ⅱ期281087.784<0.05Ⅲ～Ⅳ期262524分化程度低分化9876.291<0.05中等分化252021高分化2074

3 討論

為了提高原發性肝癌患者臨床確診率，多數患者采用手術病理組織檢查，并將其視為金標準，能為臨床診斷提供依據和參考。Ki67是一種存在于增殖細胞的核抗原，在細胞周期的G2期和M期表達最好，而在G0期降解消失不表達，是能評估細胞增殖的有效標準。臨床研究表明，Ki67與肝癌患者不良預后存在緊密的聯系。動物實驗結果表明，Ki67在腫瘤抑制術后的復發、轉移中發揮重要的作用。Ezrin蛋白是膜蛋白骨架連接蛋白，是ERM家族成員之一。活化的Ezrin蛋白端與肌動蛋白骨架連接，并且N端能與多種跨膜分子相互結合。臨床研究表明，Ezrin蛋白能參與細胞形態改變、細胞膜結構組建及細胞運動、黏附等相關信號，在腫瘤的發生、發展、黏附及侵襲中發揮了重要的作用。國內學者研究表明，Ezrin蛋白能與腫瘤表面黏附分子發生作用，有助于調節腫瘤細胞特性，影響腫瘤的分化、侵襲與轉移。由此看出，Ezrin蛋白在腫瘤的發生、發展中能發揮重要的作用。本研究中，觀察組病灶組織中Ki67及Ezrin蛋白陽性率均高于其癌旁組織與對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；觀察組原發性肝癌組織中Ki67及Ezrin蛋白陽性率與腫瘤大小、腫瘤分期及分化程度差異具有統計學意義(P<0.05)，說明Ki67及Ezrin蛋白原發性肝癌患者中均呈高表達，能參與疾病的發生、發展。因此，原發性肝癌患者臨床診療過程中可加強患者Ki67及Ezrin蛋白陽性率測定，根據測定結果評估患者疾病嚴重程度，指導臨床診療；對于確診的原發性肝癌患者，應立即采取有效的措施進行治療、干預。

綜上所述，Ki67及Ezrin蛋白在原發性肝癌患者中呈高表達，能反映患者疾病嚴重程度，能為臨床診療提供依據和參考。