許方濤 周瑢 崔向華 高媛 張艷欣 張秀榮 游均 王林海



摘要:【目的】明確不同芝麻雜交組合的雜種優勢,發掘出高芝麻素和芝麻林素含量材料及合理組配親本,為培育高芝麻素和芝麻林素品種提供基礎材料?!痉椒ā繎酶咝б合嗌V(HPLC)結合近紅外光譜(NIR),對62份地理來源不同且表型變異明顯的芝麻種質材料及18個雜交組合進行芝麻素和芝麻林素含量測定分析,并評價其雜種優勢,篩選出更多高芝麻素和芝麻林素含量的芝麻材料?!窘Y果】62份芝麻材料中芝麻素和芝麻林素的含量在不同年份間極顯著相關(P<0.01)。其中,芝麻素含量變異范圍在0.51~8.85 mg/g,平均3.56 mg/g,77.42%以上芝麻材料的芝麻素含量分布在2.00~5.99 mg/g;芝麻林素含量變異范圍在0.72~3.22 mg/g,平均2.02 mg/g,82.26%芝麻材料的芝麻林素含量分布在1.50~3.49 mg/g。芝麻籽粒芝麻素和芝麻林素含量平均值排序均為褐色芝麻>白色芝麻>黑色芝麻,褐色芝麻表現出較高的芝麻素含量變異系數(CV),而黑色芝麻表現出較高的芝麻林素含量變異系數。芝麻育成品種的平均芝麻素含量(3.90 mg/g)高于地方品種(3.44 mg/g),但芝麻林素含量稍低于地方品種。層次聚類分析可將62份材料分為七大類,其中第VII類包含5個褐色芝麻,其芝麻素和芝麻林素含量均較高,芝麻素含量高出總體平均值58.74%,芝麻林素含量高出總體平均值22.13%。芝麻素和芝麻林素含量的雜種優勢主要表現為中親優勢,且以負向優勢為主,芝麻素含量的雜種優勢變化在-69.63%~31.62%,平均-20.07%;芝麻林素含量的雜種優勢變化在-36.48%~25.84%,平均-5.44%。在18個組合僅有5個組合表現出超高親優勢?!窘Y論】芝麻籽粒中芝麻素和芝麻林素含量呈顯著正相關,且不同基因型間存在明顯變異;芝麻素和芝麻林素含量的雜種優勢主要表現為中親優勢,且以負向優勢為主。因此,育種上若要提高目標材料的芝麻素和芝麻林素含量,應發掘和應用高含量供體親本以提高成功概率。
關鍵詞: 芝麻;芝麻素;芝麻林素;含量變異;雜種優勢
中圖分類號: S565.3? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標志碼: A 文章編號:2095-1191(2020)10-2420-09
Variability and heterosis of sesamin and sesamolin contents in sesame (Sesamum indicum L.)
XU Fang-tao1, ZHOU Rong1, CUI Xiang-hua2, GAO Yuan1, ZHANG Yan-xin1,
ZHANG Xiu-rong1,YOU Jun1, WANG Lin-hai1*
(1Oil Crops Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of Biology and Genetic Improvement of Oil Crops of the Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Wuhan? 430062, China; 2Zhumadian Academy of Agricultural Sciences, Zhumadian, Henan? 463000, China)
Abstract:【Objective】Heterosis of different sesame combinations was studied, germplasms with high contents? of se-samin and sesamolin and combination parents were selected, to provide theoretical references for varieties with high sesamin and sesamolin contents. 【Method】High-performance liquid chromatography(HPLC) and near infrared spectrum (NIR) methods were usedto evaluate the contents of sesamin and sesamolin in 62 sesame materials with different origins and difference in phenotypic variation and 18 cross combinations. Their heterosis were evaluated and the materials with high sesamin and sesamolin contents were selected. 【Result】The sesamin content and sesamolin content showed extremely significant difference among different years of the 62 materials(P<0.01). Sesamin content ranged from 0.51 to 8.85 mg/g, with an average of 3.56 mg/g. Sesamin content of 77.42% of the materials was distributed in the range of 2.00-5.99 mg/g. While, the sesamolin content ranged from 0.72 to 3.22 mg/g, with an average of 2.02 mg/g. Sesamolin content of 82.26% materials was between 1.50 and 3.49 mg/g. The order of average contents of sesamin content and sesamolin content was brown sesame>white sesame>black sesame, brown sesame showed high coefficient of variation(CV) in sesamin content, and black sesame showed high CV of sesamolin content. The bred sesame varieties(3.90 mg/g) had higher average sesamin content than local varieties(3.44 mg/g), but had lower average sesamolin content. Hierarchical cluster analysis could divide the 62 materials into seven groups, group VII included five brown sesame varieties with high sesamin content and sesamolin content, the sesamin content was 58.74% higher than the average and sesamolin content was 22.13% higher than the average. The heterosis of the sesamin and sesamolin contents was mainly mid-parent heterosis and mostly was negative heterosis. The heterosis of the sesamin and sesamolin contents ranged from -69.63% to 31.62% and -36.48% to 25.84%, with an average value of -20.07% and -5.44%, respectively. There were only five combinations out of the eighteen cross combinations presented super high parent heterosis. 【Conclusion】These findings suggest that sesamin content and sesamolin content are siginficantly positively correlated, and there are variations among different genotypes. The he-terosis of the sesamin and sesamolin contents is mainly mid-parent heterosis and mostly is negative heterosis. When the breeding target is to improve sesamin content and sesamolin content,parents with high sesamin content and sesamolin content should be selected to increase the? probability of success.
Key words: sesame; sesamin; sesamolin; content variation; heterosis
Foundation item: Hubei Science and Technology Innovation Project(201620000001048); Hubei Natural Science Foundation(2019CFB574); Wuhan Cutting-edge Application Technology Project(2018020401011303)
0 引言
【研究意義】芝麻(Sesamum indicum L.)廣泛種植于亞洲、非洲的熱帶和亞熱帶地區,是我國傳統的重要優質油料作物(Trattner et al.,2011;魏其超等,2018,2019)。芝麻的含油量一般在55%左右,蛋白含量在20%左右,富含不飽和脂肪酸、維生素E及鈣、鎂等礦物質成分,且含有芝麻素和芝麻林素等具有保健作用的抗氧化活性成分(孫建等,2015;宮慧慧等,2016;李信申等,2018;李偉等,2019)。至今,大量研究證實芝麻素和芝麻林素在保護肝臟、降血糖、降血壓、消炎抗腫、抗雌激素、治療帕金森病及減輕抑郁癥等方面發揮著重要作用(Tanabe et al.,2011;Ide et al.,2012;Oyinloye et al.,2016;Majdalawieh et al.,2017;Wang et al.,2019),而高芝麻素和芝麻林素含量的芝麻材料或品種已成為食品、保健、醫藥和化工等行業的重要原料(Jeng et al.,2005;Wang et al.,2012;Pathak et al.,2015),世界上許多國家已將培育高芝麻素和芝麻林素含量的品種作為芝麻育種的主要目標(Liu et al.,2011;Cao et al.,2012;Periasamy et al.,2013)。因此,分析芝麻種質資源中芝麻素和芝麻林素的含量差異,發掘高含量材料,并探討雜交組合的芝麻素、芝麻林素含量雜種優勢,對培育高含量芝麻素和芝麻林素品種具有重要意義?!厩叭搜芯窟M展】芝麻除含有豐富的營養物質外,還含有很多重要的功能組分(周紅英等,2018)。其中,芝麻素約占主要成分芝麻木酚素類的50%,芝麻林素含量僅次于芝麻素,是芝麻的第二大木脂素類化合物(馬鳳和方偉,2019;邵家威等,2019)。Moazzami和Kamal-Eldin(2006)通過分析65份芝麻,發現芝麻素和芝麻林素的含量分別為0.07~7.12和0.21~2.97 mg/g;Williamson等(2008)分析了11份美國農業部(USDA)保存的芝麻材料,發現其芝麻素含量變化范圍在0.67~6.35 mg/g;Rangkadilok等(2010)研究發現,芝麻素和芝麻林素的含量范圍分別為0~7.23和0~2.25 mg/g,平均值分別為1.55和0.62 mg/g;梅鴻獻等(2013)利用液相色譜法對我國209份芝麻種質資源的芝麻素含量進行分析,結果顯示芝麻素最高含量為5.00 mg/g;Muthulakshmi等(2017)通過氣相色譜檢測分析印度9個育成品種和6個地方種質資源的芝麻素含量,結果發現其芝麻素最高含量為6.45 mg/g;朱秀靈等(2018)利用高效液相色譜法(HPLC)檢測分析安徽不同產地的22份芝麻,測得芝麻素含量為2.16~7.37 mg/g,芝麻林素含量為1.09~3.73 mg/g;Dar等(2019)研究發現,芝麻素和芝麻林素的含量分別為2.10~5.98和1.52~3.76 mg/g?!颈狙芯壳腥朦c】我國的芝麻種質資源庫目前已收集保存近8000份不同來源的材料(楊文娟等,2018),但針對這些材料籽粒芝麻素和芝麻林素含量的分析研究不夠全面,發掘出的高芝麻素和芝麻林素含量材料仍無法滿足育種需求,且在雜交育種應用中二者的雜種優勢特點尚不清楚。【擬解決的關鍵問題】采用HPLC結合近紅外光譜(NIR)快速測定法,對62份地理來源不同且表型變異明顯的芝麻材料進行芝麻素和芝麻林素含量測定分析,明確不同雜交組合的雜種優勢,發掘出高含量材料及合理組配親本,為培育高芝麻素和芝麻林素品種提供基礎材料。
1 材料與方法
1. 1 試驗材料
供試的62份芝麻材料(12份育成品種、43份地方品種和7個品系)由中國農業科學院油料作物研究所芝麻與特色油料遺傳育種創新團隊及國家芝麻種質資源中期庫(武漢)提供,包括國內、國外、黑色、白色、地方品種和育成品種等來源材料或不同類型(表1);從中選擇芝麻素和芝麻林素含量不同的芝麻材料用作親本,配制18個雜交組合用于雜種優勢分析。
1. 2 試驗設計
種植試驗在中國農業科學院油料作物研究所武昌試驗基地進行,62份芝麻材料分別于2017和2018年種植,每份材料種植3行區,隨機區組排列,自然成熟后收獲正常植株5株,芝麻籽?;旌虾笥糜谥ヂ樗睾椭ヂ榱炙睾繙y定。親本雜交后代于2018年種植,收獲F1代和親本各6株,單株芝麻籽粒用于芝麻素和芝麻林素含量測定。
1. 3 芝麻素和芝麻林素含量測定
采用HPLC測定62份芝麻材料的芝麻素和芝麻林素含量(Wang et al.,2012)。色譜柱:Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相:水—甲醇(20∶80,v/v);流速:1.0 mL/min;檢測波長:290 nm;柱溫:28 ℃;進樣量:10 μL;采用外標法峰面積定量。具體操作方法:稱取0.6~0.7 g干燥芝麻籽粒置于研缽中,加入液氮研磨成粉末狀,待樣品恢復到室溫,稱取0.2 g樣品置于15 mL離心管中,加入5 mL 80%酒精,搖床振蕩2 h,5000 r/min離心5 min,取上清液,重復該步驟再萃取1次。將2次萃取液充分混勻后,使用一次性無菌注射器吸取1 mL萃取液,經0.22 μm Nylon66膜(Syringe Filters)過濾,加入自動進樣瓶,置于液相色譜儀中檢測分析。每個樣品重復測定2次,若2次測定結果大于其算術平均值的15%,則再重復測定1次。雜交組合及F1代材料因籽粒量有限及后續試驗需要,采用NIR進行非破損分析,每個組合測定6株,所用儀器型號為FOSS-2500F。
1. 4 雜種優勢度量
中親優勢是指雜種F1代產量或某一數量性狀平均值與雙親同一性狀平均值的差值占雙親平均值的百分比。計算公式:中親優勢(%)=[F1-(P1+P2)/2]/[(P1+P2)/2]×100。超親優勢是指雜種F1代產量或某一數量性狀平均值與高親值親本[HP]同一性狀平均值的差值占高親值的百分比。計算公式:超親優勢(%)=(F1-HP)/HP×100。
1. 5 統計分析
采用Excel 2010計算相關參數,并進行方差分析、相關分析和制圖;應用R語言Factoextra和Cluster包進行層次聚類分析。
2 結果與分析
2. 1 芝麻籽粒芝麻素和芝麻林素含量的變異特征
經HPLC檢測62份芝麻材料籽粒發現,其芝麻素含量變異范圍在0.51~8.85 mg/g,平均3.56 mg/g;芝麻林素含量變異范圍在0.72~3.22 mg/g,平均2.02 mg/g。芝麻素和芝麻林素含量最高的芝麻材料均是JD12品系(表1)。
由圖1可看出,不同芝麻材料籽粒芝麻素含量分布相對較集中,以2.00~5.99 mg/g居多,其中2017年有48份、2018年有49份,分別占芝麻材料總數的77.42%和79.03%;芝麻素含量高于5.00 mg/g的芝麻材料2017和2018年各有9份,占芝麻材料總數的14.52%。在芝麻林素含量分布上,以居于1.50~3.49 mg/g區間的芝麻材料較多,2017和2018年各有51份,占芝麻材料總數的82.26%;芝麻林素含量高于3.00 mg/g的芝麻材料2017年有2份、2018年僅1份,分別占芝麻材料總數的3.23%和1.61%。
芝麻籽粒芝麻素和芝麻林素含量在不同年份間的相關系數分別為0.76和0.73,極顯著相關(P<0.01,下同);芝麻素含量與芝麻林素含量間的相關性在2017和2018年也均達極顯著水平,相關系數分別為0.58和0.52。62份芝麻材料在2018年的芝麻素和芝麻林素平均含量略高于2017年,進一步分析發現56.45%芝麻材料的芝麻素含量和58.06%芝麻材料的芝麻林素含量高于2017年,但方差分析結果顯示不同年份間的差異不顯著(P>0.05,下同)。
2. 2 不同類型芝麻籽粒芝麻素和芝麻林素含量差異
根據材料特征可劃分不同組別進行比較分析。按籽粒種皮顏色,62份芝麻材料可分為白色、褐色、黑色和其他(因份數較少,未列入表中)等類型(表2),3種類型的芝麻籽粒芝麻素和芝麻林素含量平均值排序均為褐色芝麻>白色芝麻>黑色芝麻。褐色芝麻表現出較高的芝麻素含量變異系數(CV),黑色芝麻次之;而黑色芝麻表現出較高的芝麻林素含量變異系數,褐色芝麻次之。根據材料來源,62份芝麻材料可分為國內芝麻(41份)和國外芝麻(21份),國內芝麻籽粒芝麻素和芝麻林素含量的變異系數均高于來源于國外的芝麻材料,芝麻素含量平均值也高于來源于國外的芝麻材料,但平均芝麻林素含量較低。62份芝麻材料包含12份育成品種和43份地方品種,育成品種的平均芝麻素含量(3.90 mg/g)高于地方品種(3.44 mg/g),但芝麻林素含量稍低于地方品種;在變異系數上則表現為地方品種整體上略高于育成品種。
對芝麻籽粒種皮顏色、材料類型和來源分別進行賦值,與2017和2018年的芝麻素、芝麻林素含量等性狀參數進行層次聚類分析,結果顯示62份芝麻材料可分為七大類(圖2)。其中,第I類主要為育成品種和品系,第II類全部來源于國外,第III類為來源于國內的地方品種,這3類芝麻材料除了編號7和編號40為黃色種皮外,其他34份材料的籽粒種皮顏色均為白色,且其芝麻素平均含量高于總體平均值;第IV類包含7份黑色芝麻,其芝麻素和芝麻林素平均含量均低于總體平均值;第V類包含7份籽粒種皮顏色為黑色的地方品種,其芝麻素平均含量低于總體平均值,但芝麻林素含量高于總體平均值;第VI類包含7份地方品種,種皮顏色主要為褐色和黃色,芝麻素含量較低,芝麻林素含量接近總體平均值;第VII類包含5份褐色芝麻,其芝麻素和芝麻林素含量均較高,其中芝麻素含量高出總體平均值58.74%,芝麻林素含量高出總體平均值22.13%,是育種應用及研究的理想材料。
2. 3 芝麻籽粒芝麻素和芝麻林素含量的雜種優勢分析結果
為分析芝麻素和芝麻林素含量的雜種優勢,從62份芝麻材料中選取18份材料用作親本,采用株對株授粉,配制18個雜交組合,在同一環境下分別獲得親本和F1代籽粒,以FOSS-2500F近紅外儀檢測其芝麻素和芝麻林素含量。結果發現,采用NIR測定18份芝麻材料的芝麻素和芝麻林素含量與HPLC測定結果極顯著相關,芝麻素含量相關系數達0.97,芝麻林素含量相關系數為0.87。方差分析結果也顯示,NIR測定的芝麻素含量(P=0.95)和芝麻林素含量(P=0.20)與HPLC測定結果間無顯著差異,說明采用NIR檢測芝麻籽粒芝麻素和芝麻林素含量具有可行性。
比較雜交親本和F1代發現,芝麻素含量的雜種優勢變化在-69.63%~31.62%,平均-20.07%;芝麻林素含量的雜種優勢變化在-36.48%~25.84%,平均 -5.44%。從表3可看出,芝麻素和芝麻林素的雜種優勢主要是中親優勢,且以負向優勢為主,18個組合中芝麻素含量具有正向雜種優勢的僅有5個組合,芝麻林素含量具有正向雜種優勢的僅有7個組合。18個組合中僅有較少組合(圖3)表現出超親優勢,在芝麻素含量上僅有編號5[芝麻(中國江西)×Guojillo]、編號10[芝麻(中國西藏)×紫花黑]和編號17[芝麻(中國江西)×中芝16]3個組合,在芝麻林素含量上僅有編號11[VIR214×芝麻(中國云南)]和編號17[芝麻(中國江西)×中芝16]2個組合。綜合表3和圖3還發現,以來源于我國江西芝麻材料為母本組配的組合,在籽粒芝麻素和芝麻林素含量均表現出超親優勢,說明此份芝麻材料在高芝麻素和芝麻林素育種或研究方面具有重要價值。此外,親本JD12的芝麻素和芝麻林素含量均較高,盡管其組合主要為中親偏負向優勢,但在所有F1代中其芝麻素和芝麻林素含量均最高。
3 討論
芝麻素和芝麻林素主要存在于芝麻中,在其他植物中極少發現,因此,分析不同芝麻材料籽粒的芝麻素和芝麻林素含量,發掘和培育高含量材料是芝麻品質研究的重要方向。目前,檢測芝麻素和芝麻林素含量的方法主要有薄層色譜法(TLC)(Kamal-Eldin et al.,1991)、氣相色譜法(GC)、氣相色譜—質譜法(GC-MS)(張令莉等,2006)和HPLC(余少沖等,2010;張東等,2018)等,其中又以HPLC檢測為主。近年來,NIR在芝麻品質檢測中也逐漸得到應用(Dossa et al.,2018)。其中,HPLC是行業標準方法(NY/T 1595—2008),具有較高的準確度;NIR是一種非破損高效測定方法,但精確度易受芝麻籽粒顏色、種子量、種子凈度、含量和環境溫度等因素的影響。因此,采用這2種方法測定芝麻籽粒芝麻素和芝麻林素含量時,應盡量減少上述因素的干擾,如挑選干凈、飽滿種子,選用NIR時則需分深色和淺色籽粒進行測定。從本研究的測定結果來看,HPLC和NIR具有極顯著的相關性,測定的含量變化趨勢一致,且以芝麻素含量間的相關性較高,說明NIR作為一種快速簡便的芝麻素和芝麻林素測定方法具有可行性,但精確度仍需按行業標準方法(NY/T 1595—2008)采用HPLC進行驗證。
芝麻素和芝麻林素含量存在明顯變異,但高含量的芝麻材料較少。本研究對62份芝麻材料進行連續2年的種植復測,結果發現其芝麻素含量變異范圍在0.51~8.85 mg/g,芝麻林素含變異范圍在0.72~3.22 mg/g,且最高芝麻素含量高于Williamson等(2008)、孫榮華等(2010)、Rangkadilok等(2010)、梅鴻獻等(2013)、Muthulakshmi等(2017)、朱秀靈等(2018)和Dar等(2019)的研究結果,但最高芝麻林素含量較低。從不同年份來看,芝麻籽粒芝麻素、芝麻林素含量雖受環境影響,但其差異并不顯著,說明這2種成分的遺傳性較穩定。Wang等(2013)根據芝麻素和芝麻林素含量的分布特點,將芝麻劃分為高、中和低3個等級;其中,芝麻素含量小于4.00 mg/g、芝麻林素含量小于2.50 mg/g為低含量芝麻,芝麻素含量大于8.00 mg/g、芝麻林素含量大于4.50 mg/g為高含量芝麻。根據該標準,本研究中的62份芝麻以中低級芝麻素為主,僅存在1份高芝麻素芝麻(JD12),是已報道為數不多且芝麻素含量超過8.00 mg/g的芝麻材料,說明亟待開展大量有關芝麻素和芝麻林素含量檢測的研究,以發掘更多的高含量材料為高芝麻素育種提供親本。
芝麻籽粒種皮色與其芝麻素和芝麻林素含量間的相關性還需進一步研究。常見的芝麻籽粒有黑色和白色,在種質資源中還存在褐色和黃色等種皮顏色的芝麻。至今,已有研究嘗試分析不同種皮顏色與芝麻素等成分含量間的關系,以期通過辨別芝麻籽粒種皮顏色對高芝麻素或芝麻林素含量材料進行初步篩選。Tashiro等(1990)通過分析42份芝麻的芝麻素和芝麻林素含量,結果發現褐色、黑色芝麻的芝麻素和芝麻林素平均含量均高于白色芝麻;金青哲等(2005)采用HPLC分析國內主要芝麻產區的15份芝麻材料,發現以白色芝麻的芝麻素平均含量最高,棕黃色芝麻和黑色芝麻次之;Moazzami和Kamal-Eldin(2006)的研究結果也表明白色芝麻籽粒芝麻素含量較高;Wang等(2012)對215份芝麻材料進行分析,發現白色芝麻的芝麻素和芝麻林素平均含量均高于黃色、褐色和黑色芝麻。本研究結果表明,褐色芝麻具有相對較高的芝麻素和芝麻林素含量。上述研究結果并不完全一致,可能與研究材料的組成不同有關,也可能是芝麻素和芝麻林素的含量與種皮顏色并無緊密關聯。因此,選用種皮顏色作為標記選擇高芝麻素或芝麻林素材料并不科學。
在芝麻雜種優勢方面,國內外的相關研究并未涉及芝麻素和芝麻林素含量。本研究發現,芝麻籽粒芝麻素和芝麻林素含量的雜種優勢主要是中親優勢,且以負向優勢為主,在18個組合僅有5個組合表現出超高親優勢,說明配制組合時只有親本含量較高時,才能提高獲得超高芝麻素和芝麻林素含量材料或品系的概率。因此,育種上若要提高目標材料的芝麻素和芝麻林素含量,應首選高含量供體親本,并盡量避免超高親本優勢。
4 結論
芝麻籽粒中芝麻素和芝麻林素含量呈顯著正相關,且不同基因型間存在明顯變異;芝麻素和芝麻林素含量的雜種優勢主要表現為中親優勢,且以負向優勢為主。因此,育種上若要提高目標材料的芝麻素和芝麻林素含量,應發掘和應用高含量供體親本以提高成功概率。
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(責任編輯 蘭宗寶)