高效液相色譜法測定復方芩蘭口服液中連翹苷含量

孔 濤，張月芹

(1．山東省濟寧市婦幼保健院，山東 濟寧 272100;2．山東省魚臺縣婦幼保健院，山東 濟寧 272300)

復方芩蘭口服液是由金銀花、連翹、黃芩、板藍根4味中藥組方，具有辛涼解表、清熱解毒之功效，用于外感風熱引起的發熱、咳嗽、咽痛。現行質量標準中未對方中主要藥味連翹進行含量測定。為了提高并有效地控制藥品質量，現采用高效液相色譜(HPLC)法測定連翹中連翹苷的含量，報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀;Agilent色譜工作站;BT25S型賽多利斯電子天平(d=0．01 mg)。乙腈、甲醇為色譜純;水為純化水，其他試劑為分析純;連翹苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110821－200711);復方芩蘭口服液(黑龍江省某制藥廠，批號分別為 20101104，20101201，20101211)。

2 方法與結果

2．1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動相:乙腈 － 水(25 ∶75);檢測波長:278 nm;流速:1．0 mL/min。理論板數以連翹苷峰計算不低于3 000;連翹苷峰與相鄰峰的分離度R大于1．5。在此條件下，色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

精密稱取干燥至恒重的連翹苷對照品Ws=0．015 25 g，置25 mL的容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品貯備液。精密量取1 mL，置10 mL容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度作為對照品溶液。精密量取本品1 mL，置中性氧化鋁柱(100～200目，6 g，內徑為1 cm)上，用70%乙醇40 mL洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘渣加50%甲醇溶解轉移至25 mL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過作為供試品溶液。按處方工藝制備不含連翹的樣品，同供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

線性關系考察:精密吸取對照品貯備液1，2，3，5 mL，置10 mL容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，照上述色譜條件進樣，以峰面積(A)為縱坐標、對照品進樣量(C)為橫坐標繪制標準曲線，得連翹苷回歸方程為A=618．8C+24．2，r=0．999 5。結果表明，連翹苷進樣量在1．22～12．2 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗:分別精密吸取同一對照品溶液，連續重復進樣5次，測定峰面積。結果的RSD=0．67%(n=5)。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，每2 h進樣1次。結果峰面積的RSD為1．3%，表明供試品溶液中連翹苷在8 h內穩定。

重復性試驗:分別取同一批號樣品5份，按樣品溶液制備方法操作，測定連翹苷峰面積。結果的RSD=0．62%(n=5)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品6份，加入一定量的連翹苷對照品，依法測定，計算回收率，結果見表1。

表1 連翹苷加樣回收試驗結果(n=6)

2．4 樣品含量測定

取不同批號樣品，按擬訂方法試驗，另取連翹苷對照品溶液，照上述色譜條件測定。結果見表2。

3 討論

依據2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅩⅧA[1]中藥質量標準分析方法驗證指導原則進一步完善了復方芩蘭口服液的質量標準。取連翹苷對照品溶液在200～400 nm波長之間進行紫外光譜掃描，測得其最大吸收波長為278 nm，故以278 nm為檢測波長。

表2 樣品含量測定結果(n=3)

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京:中國醫藥科技出版社，2010:130．