甲狀腺全切除術(shù)對(duì)甲狀腺癌患者血清血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、可溶性Fas受體、可溶性Fas受體配體mRNA表達(dá)的影響研究

陳宏月,李興江

1.錦州醫(yī)科大學(xué)齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院研究生培養(yǎng)基地(齊齊哈爾161000)；2.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院(齊齊哈爾161000)

手術(shù)是目前臨床上用以治療甲狀腺癌的主要方式，手術(shù)方式涵蓋甲狀腺全切除術(shù)以及側(cè)葉次全切除術(shù)，不同的手術(shù)方式臨床療效存在一定的差異[1]。大部分研究學(xué)者認(rèn)為，甲狀腺全切除術(shù)在降低腫瘤復(fù)發(fā)率以及改善預(yù)后方面效果更為理想，但該治療術(shù)式的風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較大，極易并發(fā)甲狀腺功能減退等并發(fā)癥[2]。目前，臨床上關(guān)于甲狀腺全切除術(shù)應(yīng)用于甲狀腺癌患者中的相關(guān)研究并不少見，然而尚未見相關(guān)報(bào)道對(duì)該治療術(shù)式具體作用機(jī)制的研究。隨著近年來(lái)相關(guān)研究的不斷深入，越來(lái)越多的學(xué)者發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)屬于臨床上最為常見的一種血管生長(zhǎng)因子，VEGF蛋白廣泛存在于癌細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞中，VEGF可通過甲狀腺癌細(xì)胞合成、分泌，在和血管內(nèi)皮細(xì)胞上的相關(guān)受體特異性結(jié)合后發(fā)揮作用[3]。Fas/FasL系統(tǒng)是近年來(lái)日益受到重視的參與細(xì)胞調(diào)往的信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)，F(xiàn)as和FasL相結(jié)合可向下傳遞死亡信號(hào)，進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞凋亡[4]。其中Fas主要是以膜受體形式存在，可通過mRNA水平的不同剪接方式產(chǎn)生缺乏跨膜區(qū)的可溶性Fas分子(sFas)，后者則可和胞膜的Fas競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合可溶性Fas配體(sFasL)，進(jìn)一步發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的作用[5]。鑒于此，本文通過研究甲狀腺全切除術(shù)對(duì)甲狀腺癌患者血清VEGF、sFas、sFasL mRNA表達(dá)的影響，旨在明確甲狀腺全切除術(shù)應(yīng)用于甲狀腺癌患者中的具體作用機(jī)制，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料和方法

1 一般資料 納入從2017年2月至2019年2月，于我院擬行甲狀腺全切除術(shù)治療的甲狀腺癌患者40例作為研究對(duì)象。其中包括男性患者17例，女性患者23例，年齡39～69歲，平均年齡(54.02±3.42)歲；病理類型：乳頭狀癌32例，髓樣癌5例，濾泡狀癌3例；受教育程度：初中及初中以下16例，高中及高中以上24例；婚姻狀況：已婚33例，未婚或離婚7例；病變情況：?jiǎn)蝹?cè)葉33例，雙側(cè)葉4例，峽部3例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移13例。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均經(jīng)手術(shù)病理組織活檢確診為甲狀腺癌；②均行甲狀腺全切除術(shù)治療；③年齡均在18周歲以上；④入院前均未接受任何相關(guān)抗腫瘤治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤者；②心、肝、腎、肺等重要臟器發(fā)生病變者；③伴有嚴(yán)重感染性疾病、全身免疫系統(tǒng)疾病者；④意識(shí)障礙或伴有精神疾病者；⑤正接受其他研究者。納入對(duì)象均在知情同意書上簽字，并獲批于醫(yī)院倫理委員會(huì)。

2 研究方法

2.1 標(biāo)本采集：分別于術(shù)前1 d以及術(shù)后1 d采集所有受試者靜脈血10 ml，將其分別裝于兩個(gè)EP管內(nèi)，一管用作VEGF、sFas、sFasL mRNA表達(dá)水平檢測(cè)，另一管用作血清白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-8(IL-8)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)表達(dá)水平檢測(cè)。

2.2 VEGF、sFas、sFasL mRNA表達(dá)水平檢測(cè)：檢測(cè)方式為反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法，具體操作務(wù)必按照相關(guān)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。首先完成電泳膠的制備，隨后遵循操作要求將制備完善的電泳膠置入電泳槽，根據(jù)RT-PCR法反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，并進(jìn)行總RNA的提取。將獲取的PCR產(chǎn)物于6倍緩沖液混勻、電泳。PCR反應(yīng)參數(shù)如下：95℃預(yù)變形5 min，95 ℃30 s，55 ℃退火45 s，72℃延伸反應(yīng)45 s，重復(fù)35個(gè)循環(huán)。72℃ 7 min，隨后實(shí)施PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)借助1.5%瓊脂糖電泳完成。維持電泳電壓為100 V，凝膠成像并照相，最后進(jìn)行VEGF、sFas、sFasL mRNA相對(duì)表達(dá)量的計(jì)算。

2.3 血清IL-6、IL-8、TNF-α表達(dá)水平檢測(cè)：檢測(cè)方式為酶聯(lián)免疫吸附法，首先以6 cm為離心半徑，通過3000 r/min離心10 min，分離血清保存在-80℃冰箱中備用。具體操作務(wù)必遵循相關(guān)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，相關(guān)試劑盒均購(gòu)自青島騰龍微波科技有限公司。

3 觀察指標(biāo) 比較手術(shù)前后患者血液樣本中VEGF、sFas、sFasL mRNA表達(dá)水平以及血清IL-6、IL-8、TNF-α水平。

結(jié) 果

1 手術(shù)前后患者血液樣本中VEGF、sFas、sFasL mRNA表達(dá)水平對(duì)比 手術(shù)后患者血液樣本中VEGF、sFas、sFasL mRNA表達(dá)水平分別顯著低于手術(shù)前的水平(均P<0.05)，見表1。

表1 手術(shù)前后患者血液樣本中VEGF、sFas、sFasL mRNA表達(dá)水平對(duì)比

2 手術(shù)前后患者血清IL-6、IL-8、TNF-α水平對(duì)比 手術(shù)后患者血清IL-6、IL-8、TNF-α水平分別顯著低于手術(shù)前的水平(均P<0.05)，見表2。

表2 手術(shù)前后患者血清IL-6、IL-8、TNF-α水平對(duì)比

3 甲狀腺癌患者血液中VEGF、sFas、sFasL mRNA水平與血清IL-6、IL-8、TNF-α水平相關(guān)性分析 經(jīng)Pearson相關(guān)性分析可得：甲狀腺癌患者血液中VEGF、sFas、sFasL mRNA水平與血清IL-6、IL-8、TNF-α水平均呈正相關(guān)(均P<0.05)，見表3。

表3 甲狀腺癌患者血液中VEGF、sFas、sFasL mRNA水平與血清IL-6、IL-8、TNF-α水平相關(guān)性分析

討 論

甲狀腺癌屬于臨床上較為常見的惡性腫瘤之一，且隨著人們生活方式的不斷改變以及生活環(huán)境的逐漸惡化，甲狀腺癌的發(fā)病率正呈逐年升高趨勢(shì)[6-7]。外科手術(shù)是迄今為止國(guó)內(nèi)外所公認(rèn)的治療甲狀腺癌最有效手段之一，且甲狀腺全切除術(shù)的效果最為明顯。然而，關(guān)于手術(shù)對(duì)甲狀腺癌的作用機(jī)制尚未完全明確，已成為廣大醫(yī)務(wù)人員共同關(guān)注的熱點(diǎn)。Fas是近年來(lái)所發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞凋亡信號(hào)受體，廣泛存在于活化的T、B細(xì)胞以及單核細(xì)胞表面，而在正常組織以及腫瘤細(xì)胞上均有廣泛表達(dá)，當(dāng)Fas和其特異性配體FasL相結(jié)合后，可轉(zhuǎn)導(dǎo)凋亡信號(hào)，誘導(dǎo)表達(dá)Fas細(xì)胞的凋亡[8-10]。正常狀態(tài)下，當(dāng)免疫活性細(xì)胞表達(dá)的FasL和腫瘤細(xì)胞上的Fas結(jié)合后，可殺傷腫瘤細(xì)胞執(zhí)行腫瘤免疫功能。而表達(dá)FasL的腫瘤細(xì)胞不但可逃避免疫系統(tǒng)的Fas途徑殺傷，同時(shí)可能引起表達(dá)Fas免疫活性細(xì)胞的凋亡，殺傷免疫細(xì)胞[11-13]。由此可見，F(xiàn)as/FasL可能在甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演著凋亡調(diào)節(jié)基因的角色。此外，臨床上已有大量研究報(bào)道證實(shí)[14]，慢性炎癥反應(yīng)介導(dǎo)了多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，甚至在腫瘤的轉(zhuǎn)移過程中起著至關(guān)重要的作用，IL-6、IL-8、TNF-α均是目前臨床上應(yīng)用較為廣泛的炎癥反應(yīng)標(biāo)志物，可在一定程度上反映機(jī)體炎癥反應(yīng)程度，因此可能和甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展存在密切相關(guān)。

目前臨床上已有大量的研究報(bào)道證實(shí)凋亡參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程，而凋亡主要是由一系列外在以及內(nèi)在的信號(hào)所調(diào)節(jié)，F(xiàn)as/FasL系統(tǒng)便是其中一條極其重要的凋亡誘導(dǎo)途徑。sFas最主要的來(lái)源為免疫細(xì)胞，尤其是淋巴細(xì)胞以及自然殺傷細(xì)胞，而腫瘤細(xì)胞亦是sFas的重要來(lái)源。國(guó)內(nèi)外已有不少研究結(jié)果證實(shí)，多種腫瘤細(xì)胞均表達(dá)FasL，表明了腫瘤細(xì)胞可能通過sFas、sFasL的高表達(dá)，繼而起到逃避免疫監(jiān)視的作用。而本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)：手術(shù)后患者血液樣本中VEGF、sFas、sFasL mRNA表達(dá)水平均顯著低于手術(shù)前(均P<0.05)。這與李亞南等[15]的研究結(jié)果相符，其在報(bào)道中指出，甲狀腺全切除術(shù)可顯著下調(diào)大鼠甲狀腺癌組織VEGF、sFas、sFasL mRNA表達(dá)水平。這充分提示了甲狀腺全切除術(shù)應(yīng)用于甲狀腺癌患者的治療中，可有效抑制VEGF、sFas以及sFasL的產(chǎn)生，進(jìn)一步達(dá)到治療疾病的目的。此外，本文還顯示，手術(shù)后患者血清IL-6、IL-8、TNF-α水平顯著低于手術(shù)前(均P<0.05)。這提示了甲狀腺全切除術(shù)的應(yīng)用可在一定程度上降低甲狀腺癌患者血清IL-6、IL-8、TNF-α水平。分析原因，筆者認(rèn)為腫瘤患者體內(nèi)的單核巨噬細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞殺傷作用顯著增強(qiáng)，加之腫瘤細(xì)胞逐漸增值以及轉(zhuǎn)移過程中腫瘤細(xì)胞自分泌均會(huì)促進(jìn)上述各項(xiàng)指標(biāo)的合成、分泌。而手術(shù)治療通過切除病灶組織，繼而從根本上阻止了上述兩種途徑對(duì)IL-6、IL-8、TNF-α表達(dá)的上調(diào)。與此同時(shí)，IL-6、IL-8、TNF-α表達(dá)水平的高低可在一定程度上反映機(jī)體的免疫功能，即隨著機(jī)體免疫功能的不斷增強(qiáng)，上述各項(xiàng)指標(biāo)表達(dá)水平隨之下降。另外，本文進(jìn)一步經(jīng)Pearson相關(guān)性分析可得：甲狀腺癌患者血液中VEGF、sFas、sFasL mRNA水平與血清IL-6、IL-8、TNF-α水平均呈正相關(guān)。這再次證實(shí)了VEGF、sFas、sFasL mRNA的表達(dá)可能在一定程度上影響IL-6、IL-8、TNF-α表達(dá)，亦或是受IL-6、IL-8、TNF-α所影響，兩者可能在甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起著協(xié)同的作用。關(guān)于其具體作用機(jī)制仍需進(jìn)一步深入研究，這也為今后的研究提供了方向。

綜上所述，甲狀腺全切除術(shù)可實(shí)現(xiàn)對(duì)甲狀腺癌組織的切除，進(jìn)一步抑制甲狀腺癌的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移，而其主要作用機(jī)制可能和下調(diào)VEGF、sFas、sFasL以及IL-6、IL-8、TNF-α的表達(dá)有關(guān)，值得臨床重點(diǎn)關(guān)注。