COX-2在子宮內膜異位癥中的表達及意義*

吳敏，程衛

（湖南省婦幼保健院，湖南 長沙 410008）

子宮內膜異位癥（Endometriosis,EMT）是育齡期婦女的常見病，臨床主要表現為疼痛、不孕、月經異常等。手術和藥物治療是主要的治療手段，手術的創傷和藥物治療停藥后病情反復給女性帶來很大的困擾，也給家庭和社會增添了沉重的負擔。目前EMT發病原因尚未明確，探究其發病機制具有積極意義。有研究表明，高表達的環氧合酶2（Cyclooxygenase 2,COX-2）可能是EMT的發病機制之一，COX-2 參與EMT的血管形成，引起痛經、不孕[1]。本研究旨在檢測COX-2在EMT 中的表達，探討COX-2與EMT 發生的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月1日—2017年12月31日于湖南省婦幼保健院婦科手術切除且經病理確診為卵巢子宮內膜異位囊腫患者36例。術中按美國生育協會（AFS）標準分期，其中Ⅰ期2例，Ⅱ期10例，Ⅲ期14例，Ⅳ期10例；增殖期15例，分泌期21例；患者年齡21 ～46歲，平均34.6歲。選取同期于本院就診的子宮內膜標本正常患者25例，患者年齡24 ～38歲，平均32.4歲。標本取自同期因輸卵管性不孕行宮腔鏡檢查+診刮，并經病理診斷為正常的增殖期或分泌期子宮內膜。其中增殖期13例，分泌期12例。所有患者術前3個月內無激素治療史。

1.2 方法

1.2.1 取材 選取腹腔鏡術中剝除的卵巢子宮內膜異位囊腫組織及同時行診刮術獲取的在位子宮內膜組織，以及正常子宮內膜組織，置于10%甲醛溶液中固定，石蠟包埋，5μm 厚連續切片，HE 染色后鏡下觀察到典型子宮內膜組織為納入標本，并分別作為異位內膜組、在位內膜組和對照組，分別有36、36和25例。

1.2.2 COX-2 采用免疫組織化學二步法檢測COX-2。經脫蠟、脫水、滅活內源性過氧化物酶、抗原修復、封閉、一抗、二抗、DAB 顯色、蘇木精復染及封片等步驟，具體依據試劑盒說明書進行操作。試劑一抗（鼠抗人COX-2 單克隆抗體）、二步法免疫組織化學法檢測試劑（PV-6002）及DAB 顯色劑均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。使用該公司提供的已知陽性標本做為陽性對照，PBS 代替一抗做為陰性對照。

1.2.3 免疫組織化學 以細胞漿內出現棕黃色顆粒定義為陽性，無棕黃色顆粒定義為陰性。COX-2 免疫組織化學染色結果判斷標準：高倍顯微鏡（10×40）下觀察細胞著色情況，陽性細胞主要在胞質表達，呈棕黃色。免疫組織化學半定量評分標準[2]：每張切片任意選5個視野，觀察其陽性細胞胞漿表達強度，無表達為陰性（0分）、陽性顆粒呈淺黃色為可疑陽性（1分）、淺棕色為弱陽性（2分）、棕黃色為陽性（3分）及棕褐色為強陽性（4分）。計算陽性細胞百分數（5個視野的平均數），無表達為陰性（0分）、＞ 0% ～15%為可疑陽性（1分）、＞15% ～50%為弱陽性（2分）、＞50% ～85%為陽性（3分）及＞85%～100%為強陽性（4分）。陽性指數=陽性細胞表達強度×陽性細胞百分數×1/2。結果由2 名病理醫師獨立判斷綜合而成。

1.3 統計學方法

數據分析采用SPSS 18.0統計軟件。計量資料以均數±標準差（±s）表示，比較用t檢驗或方差分析，進一步兩兩比較用LSD-t檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組COX-2表達強度比較

異位內膜組COX-2表達強度為（3.25±0.26）分，在位內膜組為（3.16±0.28）分，對照組為（1.85± 0.29）分，經方差分析，差異有統計學意義（F=359.800，P=0.000）。異位內膜組和在位內膜組較對照組高（P＜0.05）；異位內膜組與在位內膜組COX-2表達強度比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.2 在位內膜組與對照組增殖期和分泌期的COX-2表達強度比較

在位內膜組增殖期和分泌期的COX-2表達強度分別為（3.38±0.25）和（3.26±0.26）分，對照組分別為（1.67±0.38）和（1.95±0.21）分，經t檢驗，差異有統計學意義（t=33.321和14.629，均P=0.000），在位內膜組較對照組高。

2.3 異位內膜組與對照組不同AFS分期的COX-2表達強度比較

異位內膜組Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期COX-2表達強度分別為（2.88±0.25）和（3.18±0.28）分，對照組為（1.85±0.29）分，經方差分析，差異有統計學意義（F=124.586，P=0.000），異位內膜組Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期較對照組高（P＜0.05），異位內膜組Ⅰ、Ⅱ期與Ⅲ、Ⅳ期COX-2表達強度比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

3 討論

環氧合酶包括COX-1、COX-2 同工酶。靜息時COX-1 催化細胞釋放前列腺素E2，主要維持細胞自身穩定。COX-2 則幾乎不在正常情況下表達，當出現炎癥及細胞增殖分化時，被細胞因子、生長因子及腫瘤促進劑等誘導，其表達可以迅速增高8 ～10倍。COX-2是前列腺素物質生成的限速酶，被廣泛認為是炎癥過程中的重要誘導酶之一[3]。有研究發現，COX-2 可以在子宮內膜上皮細胞表達，在位子宮內膜上皮中的表達明顯高于腺上皮，且子宮內膜異位癥病灶的COX-2 蛋白和mRNA表達均高于在位子宮內 膜[4-6]。子宮內膜異位癥在位子宮內膜COX-2的表達高于正常子宮內膜。本研究也得出類似的結果。

而COX-2的表達與月經周期的關系文獻報道結論不一。有學者研究發現在位內膜COX-2 mRNA的表達高峰在增殖期，而異位子宮內膜COX-2 mRNA的表達高峰在分泌期，提示子宮內膜異位癥患者的在位、異位子宮內膜COX-2 蛋白和mRNA的差異性表達可能在子宮內膜異位癥的發病機制中起重要作用，子宮內膜異位癥中COX-2 異常高表達與子宮內膜異位癥的發生、發展和復發有關[4-6]。張烜等[7]研究發現，在位內膜COX-2表達均為分泌期高于增殖期；內異癥在位、異位內膜COX-2表達無論增殖期、分泌期均高于同期的對照組，且COX-2表達與AFS分期無相關性。本研究發現各組COX-2 增殖期與分泌期的表達均無差異，且在Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期的表達差異無統計學意義，提示COX-2的表達可能在早期EMT的發生中發揮 作用。

在EMT的早期檢測方面，各學者將COX-2與其他指標進行聯合檢測的探索，有學者研究發現COX-2在在位、異位子宮內膜的過表達以及腹腔液中前列腺素E2水平的異常升高可能是子宮內膜異位癥發生、發展的原因之一[7]。還有研究報道，COX-2 mRNA與血清CA125及異位病灶的大小相關[8]。子宮內膜異位癥患者的血清CA125和子宮內膜COX-2水平呈正相關，且兩者聯合檢測對診斷早期子宮內膜異位癥有較高的臨床應用價值[9]。還有研究發現COX-2 選擇性抑制劑NS-398 可以促進子宮內膜細胞凋亡，抑制細胞增殖，其機制可能與抑制COX-2的表達、降低PGE2 以及Bcl-2 釋放、改變細胞周期有關[10]。提示COX-2 將來有望成為子宮內膜異位癥的治療 靶點。