基于無標記熒光共振能量轉移的microRNA檢測方法研究

張文月，郝文會，趙 靜，王愈聰*

1. 河北大學化學與環境科學學院，藥物化學與分子診斷省部共建教育部重點實驗室，河北 保定 071002 2. 河北大學綜合實驗中心，河北 保定 071002

引 言

MicroRNAs(miRNA)是一類非編碼小RNA，其長度約為20～24個核苷酸，可參與細胞內多種生命過程，并具有重要的調節作用[1]。目前已有研究證明，miRNA的表達與多種疾病尤其是癌癥密切相關[2]，并且miRNA可以穩定存在于生物體外周血循環過程中[3]，因此通過血液中miRNA含量的檢測可以實現多種疾病的早期診斷和篩選。早期miRNA通常是通過Northern印跡雜交法[4]、微陣列芯片技術[5]及實時定量聚合酶鏈式反應法[6]等方法來檢測。雖然這些方法準確度比較高，但均存在一定的缺陷。由于miRNA序列短并且豐度低，人們發展了多種擴增技術對其進行信號放大，滾環擴增技術(RCA)就是其中一種。該技術由Jonstrup等[7]于2006年引入到miRNA檢測中，跟傳統方法相比，它不需要變溫熱循環，在恒溫條件下即可達到與聚合酶鏈式反應相當的靈敏度，另外，miRNA的短序列正好與滾環擴增中掛鎖探針所需模板長度相匹配。因此，滾環擴增技術在miRNA檢測中受到了廣泛的關注。

陽離子共軛聚合物是由大量吸光單元共軛而成的高分子化合物，具有較強的光捕獲能力，常被用作熒光傳感探針以達到放大熒光信號的目的，進而實現目標分子的高靈敏度檢測[8-10]。陽離子共軛聚合物可以和帶負電的DNA通過靜電相互作用結合，如果對DNA進行適當的熒光標記，二者可以發生熒光共振能量轉移(FRET)現象[11]，該現象目前已被廣泛應用到多種生物分子的檢測中[12]。……