金線蓮不同組織DNA提取方法比較

劉泊鈺 蘇春蘭 陳森蘭 龍祥玲 楊榆 楊金蘭 蘇建睦 朱惠

摘要：金線蓮是中國傳統中藥，具有清熱涼血、除濕解毒等功效。進行金線蓮分子育種及遺傳轉化需獲得高質量DNA，本研究比較分析3種提取方法對金線蓮根莖葉DNA提取結果表明：SDS法對金線蓮根莖葉DNA的提取效果不好，使用CTAB法可獲得高質量的金線蓮莖段DNA，使用試劑盒法可獲得高質量金線蓮根、葉DNA。

關鍵詞：金線蓮;基因組;提取方法;CTAB

金線蓮是蘭科開唇蘭屬多年生草本珍稀藥用植物，主要分布在熱帶和亞熱帶地區，在我國以福建、臺灣、江西和浙江等省份為主。金線蓮是中國傳統珍貴藥材，全身藥用，味平，性甘，具有清熱涼血、除濕解毒等功效，可治療肺熱咳嗽、風濕骨痛、糖尿病、膀胱炎等疾病，普遍用于醫療、保健、美容及飲食等方面。

目前，對金線蓮的研究主要集中在活性成分分析及組培快繁，在分子育種及品種改良方面研究較少。進行分子育種及品種改良研究過程中，植物DNA的提取是必不可少的一步，植物DNA的質量直接影響下一步實驗的進展。因此，本研究開展以金線蓮為材料的基因組提取方法研究，旨在比較分析金線蓮不同部位DNA提取效果及不同提取方法對金線蓮DNA提取的效果，為金線蓮分子育種及遺傳轉化提供理論依據。

1材料與方法

1.1試驗材料

本試驗所用植物材料來自玉林師范學院生物與制藥學院組織培養室培養的健康金線蓮組培苗。

1.2試驗方法

植物基因組提取方法為：CTAB法，SDS法，試劑盒法。分別使用3種方法提取金線蓮根、莖、葉DNA，用凝膠電泳檢測DNA完整性，用Nan-oDrop One超微量分光光度計檢測DNA的濃度。

2試驗結果

2.1凝膠電泳檢測結果

圖1為瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA完整性的結果，由圖1可知，對于金線蓮的根來說，試劑盒法提取金線蓮根DNA效果最好，其次是CTAB法，SDS法提取效果最差;對于金線蓮莖來說，CTAB法提取的效果最好，其次是試劑盒法，SDS法能提取出少量DNA;對于金線蓮葉片，試劑盒提取的效果最好，CTAB法和SDS法提取的效果都不好。在所有方法中，除了使用試劑盒法提取葉片時無RNA污染外，其余方法均有少量RNA污染。

2.2分光光度計檢測DNA濃度

所有DNA樣品經過分光光度計檢測結果如表1所示，濃度最高的是CTAB法提取金線蓮莖的DNA，

達到611.77ng/ul;其次是試劑盒法提取的根DNA，濃度為333.51ng/ul;濃度最低的是SDS法提取的金線蓮葉片DNA，僅為69.49ng/ul。純度最高的方法是試劑盒法，其次是CTAB法;在3種方法中，SDS法的效果最差，提取的濃度低、純度低。

3討論

綜上所述，CTAB法提取金線蓮莖段可獲得較高的DNA濃度和純度，使用試劑盒法可快速獲得高濃度金線蓮葉片和根DNA，SDS法不適合金線蓮根莖葉DNA提取。金線蓮化學成分中多糖類物質含量較多，CTAB作為陽離子去污劑，特別對多糖的去除效果尤為明顯;趙喜華等通過SDS法提取杜鵑屬DNA發現，SDS法對多糖及一些次生代謝物的提取，其DNA提取效果不明顯，與本研究結論一致。試劑盒法能夠決速獲得植物基因組DNA，并能夠達到一定的純度，且耗費的時間較短。但若需要更高的濃度和純度，建議使用CTAB法。

（收稿：2020一01一04）