茶尺蠖絲氨酸蛋白酶基因EoSP1的克隆、時空表達及對饑餓的表達響應

張新，陳成聰，杜琴，李喜旺，孫曉玲*

茶尺蠖絲氨酸蛋白酶基因的克隆、時空表達及對饑餓的表達響應

張新1,2，陳成聰3，杜琴1,2，李喜旺1,2，孫曉玲1,2*

1. 中國農業科學院茶葉研究所，浙江 杭州 310008；2. 農業農村部茶樹生物學與資源利用重點實驗室，浙江 杭州 310008；3. 國家茶葉質量安全工程技術研究中心，福建 泉州 362400

絲氨酸蛋白酶是鱗翅目昆蟲消化系統中一類重要的蛋白酶。本研究從茶尺蠖（）中克隆到一條絲氨酸蛋白酶基因并分析了其結構特征和表達特性。基因序列全長858?bp，編碼285個氨基酸，預測蛋白分子量為29.53?kDa，等電點為5.44。經與其他絲氨酸蛋白酶比對，EoSP1含有保守的絲氨酸蛋白酶催化位點（H95，A161和S328）及蛋白互作結構域，與蓓帶夜蛾（）中SPs親緣關系較近。進一步獲得了與EoSP1-GST融合蛋白大小接近的目的蛋白。qRT-PCR分析發現，在幼蟲期的表達顯著高于成蟲、蛹和卵期，并在幼蟲中腸中特異性表達；饑餓處理后表達下降，恢復飼喂后表達量接近對照組。以上結果為茶尺蠖消化酶功能解析及抗蟲新靶點的篩選提供了依據。

茶尺蠖；絲氨酸蛋白酶；克隆；表達分析

絲氨酸蛋白酶（Serine protease，SP）是一類以絲氨酸為活性中心的蛋白水解酶家族，催化結構域由組氨酸（His）、天冬氨酸（Asp）和絲氨酸（Ser）3個氨基酸殘基組成[1-2]。根據蛋白結構域的不同，SP可分為單結構域和多結構域蛋白，單結構域蛋白主要發揮蛋白消化功能，而多結構域蛋白常作用于各種生物過程中的分子識別[3-4]。根據酶切位點的不同，SP又可主要分為胰蛋白酶（Trypsin）、胰凝乳蛋白酶（Chymotrypsin）、彈性蛋白酶（Elastase）及其他酶類等[5-6]。……