自體富血小板凝膠在老年燒傷患者整復治療中對創面愈合及肉芽組織特異性蛋白表達的影響

楊景軍 陳航 魏子人 彭正進

[摘要]目的：探究自體富血小板凝膠在老年燒傷患者美容整復治療中對創面愈合及肉芽組織特異性蛋白表達影響。方法：選取2017年9月-2018年9月于筆者醫院就診的老年燒傷患者120例，依據治療方式不同分為觀察組和對照組，各60例。對照組采用常規治療，觀察組在對照組基礎上使用自體富血小板凝膠（autologous platelet-rich gel，APG），觀察兩組患者創面愈合時間與創面愈合率，評定創面疼痛、瘢痕增生情況、并發癥發生率及復發率，治療后療效及皮片/皮瓣成活率，腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、IL-8、γ干擾素（INF-γ）等炎癥因子變化，比較肉芽組織特異性蛋白SDF-1α、VEGF、CXCR4蛋白表達情況。結果：觀察組創面愈合時間、并發癥發生率、復發率、疼痛視覺模擬評分（Visual analogue scale，VAS）、溫哥華瘢痕量表（Vancouver scar scale，VSS）及曼徹斯特瘢痕評定量表（Matching assessment of photographs and scars，MAPS）評分均低于對照組，觀察組創面愈合率、總有效率、皮片/皮瓣成活率高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。治療后觀察組TNF-α、IL-1β、IL-8和INF-γ水平降低，且低于對照組;觀察組SDF-1α、VEGF、CXCR4蛋白表達明顯高于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。結論：APG能夠加速創面愈合，減少愈合所需時間，促進肉芽組織特異性蛋白表達，對于老年燒傷患者美容整形修復具有促進作用，療效可靠。

[關鍵詞]自體富血小板凝膠;老年燒傷患者;美容修復;創面愈合;肉芽組織;特異性蛋白表達

[中圖分類號]R622 ? ?[文獻標志碼]A ? ?[文章編號]1008-6455（2019）12-0083-05

Effect of Autologous Platelet-rich Gel on Wound Healing and Granulation Tissue Specific Protein Expression in Elderly Burn Patients Treated by Cosmetic Therapy

YANG Jing-jun，CHEN Hang，WEI Zi-ren，PENG Zheng-jin

（Department of Burn Plastic Surgery，Mianyang People's Hospital，Mianyang 621000，Sichuan，China）

Abstract： Objective ?To investigate the effect of autologous platelet-rich gel on wound healing and granulation tissue-specific protein expression in elderly burn patients. Methods ?120 patients in our hospital from September 2017 to September 2018 were divided into two groups according to the random numerical table method. The patients in the control group were treated with routine therapy and the patients in the observation group were treated with autologous platelet-rich gel （APG）， on the basis of the control group. The wound healing time， wound healing rate， wound pain， scar hyperplasia， complications and recurrence probability， curative effect and survival rate of skin graft and skin flap were observed in the two groups， and the wound healing time， wound healing rate， wound pain， scar hyperplasia， complications and recurrence probability were compared between two groups. Inflammatory factors such as tumor necrosis factor-α （TNF-α）， interleukin-1β （IL-1β） and IL-8， interferon -γ（INF-γ） were changed to compare the expression of SDF-1α， VEGF， CXCR4 protein in granulation tissue. Results ?The wound healing time， complication rate， recurrence rate， VAS score， VSS and MAPS score of the observation group were lower than those of the control group， the wound healing rate， total effective rate and skin/flap survival rate of the observation group were higher than those of the control group， the differences were statistically significant（P<0.05）. After treatment， the levels of TNF -α， IL-1β， IL-8 and INF -γ in the observation group were lower than those in the control group， and the expressions of SDF-1α， VEGF and CXCR4 in the observation group were significantly higher than those in the control group（P<0.05）. Conclusion ?APG can accelerate wound healing， reduce healing time and promote the expression of granulation tissue-specific protein.

Key words autologous platelet-rich gel; elderly burn patients; cosmetic repair; wound healing; granulation tissue; specific protein expression

燒傷是日常生活中常見損傷之一，隨著社會人口老齡化的不斷發展，老年燒傷患者占據比例不斷增加[1]。隨著年齡的增長，老年患者抵抗力變差，各器官功能逐漸減弱，對于創面的修復力減弱[2]，燒傷給患者帶來嚴重心理負擔，精神上遭受痛苦，燒傷美容是目前常用技術，但是老年患者存在燒傷愈合緩慢、皮膚松弛、治愈率低、死亡率高等因素[3]，單純美容修復治療不能滿足患者的需求。自體富血小板凝膠（autologous platelet-rich gel，APG）作為一種新興的慢性創面治療藥物，含有濃度較高的各種生長因子，能夠加速受傷組織的快速修復，促進其再生與愈合[4-5]。目前APG在燒傷美容整復治療國內外已有文獻報道[6-7]，但是在老年燒傷患者中的應用研究較少。為探究APG應用于老年燒傷患者美容整復治療中對創面愈合及肉芽組織特異性蛋白表達的影響，本研究在老年燒傷患者美容整復治療中應用APG，現將結果報道如下。

1 ?資料和方法

1.1 一般資料：選取2017年9月-2018年9月于筆者醫院就診的老年燒傷患者120例，依據治療方式不同分為觀察組和對照組各60例，其中對照組患者采用常規方法處理，觀察組患者在對照組基礎上使用APG。觀察組：男25例，女性35例，平均年齡（65.92±10.04）歲，輕度燒傷15例，中重度燒傷45例;對照組：男21例，女39例，平均年齡（67.18±8.98）歲，輕度燒傷17例，中重度燒傷43例。兩組患者性別、年齡、燒傷程度等一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性，詳見表1。本研究通過醫院倫理委員會審核、批準。

1.2 納入及排除標準：納入標準：①符合老年燒傷傷情診斷標準者[8];②燒傷后需要進行美容整復手術者;③年齡≥50歲者;④近6個月未服用免疫抑制劑類藥物者;⑤重要器官無嚴重器質性疾病者;⑥無讀寫障礙者;⑦患者及家屬同意參與本研究，并簽署知情同意書。

排除標準：①患有心、腎等其他嚴重疾病或合并其他疾病者;②存在溝通障礙，不參與配合者;③患有精神疾病者;④凝血功能障礙者;⑤免疫系統疾病及患有腫瘤者。

1.3 方法

1.3.1 APG制備：按照老年燒傷患者創傷面積大小抽取一定量的靜脈血，并將抽取的靜脈血置于含有1ml枸櫞酸鈉的15ml離心管中，2 000rpm離心10min，離心后取上層血清和紅細胞轉移至另一干凈離心管中，3 500rpm再次離心10min，棄去上層未沉淀的血漿層，下層剩余血漿及血細胞等成分即為富血小板血漿，之后按照1：9的比例，將富血小板血漿與10%的CaCl2混合即為制備的APG。將制備好的APG放置于-20℃冰箱保存備用。

1.3.2 治療方法：兩組患者按照常規方法對燒傷創面進行簡單清創處理，在止血帶作用下徹底洗凈創面表面的分泌物和膿痂，對于已經形成肉芽組織進行切除，削除其壞死組織、纖維基底板，直至正常健康的深筋膜淺層或脂肪淺層，利用儀器將創面修正平整，仔細進行止血并將殘留物徹底清洗干凈。鼓式取皮機取患者中厚區皮片并移植至受區，使用3-0絲線進行嚴密縫合，利用凡士林松散濕紗布、無菌敷料包將創口包扎，每天換藥1次，直至傷口完全愈合，同時給予活血、抗感染、對癥、營養等治療。觀察組患者在此基礎上給予APG治療，根據燒傷創面大小，使用適量的APG涂布于創面，使用單層凡士林紗布包扎傷口，每天換藥1次，直至傷口完全愈合。

1.3.3 評價指標

1.3.3.1 創面愈合時間比較：從手術結束后，開始統計兩組患者創面愈合所需時間。

1.3.3.2 創面愈合率比較：統計治療7d、14d、21d后，兩組患者創面愈合率。

1.3.3.3 創面疼痛情況：采用疼痛視覺模擬評分（Visual analogue scale，VAS）[9]，分數越高，表示疼痛級別越高，在治療前后由患者自主填寫，評分范圍0～10分。

1.3.3.4 瘢痕增生情況：采用溫哥華瘢痕量表（Vancouver scar scale，VSS）[10]，分別在治療后7d、14d對患者進行隨訪調查，詢問瘢痕增生情況，評價范圍包括色澤、柔韌度、厚度、血管分布，分數越高，瘢痕增生越嚴重，評分范圍0～15分。

使用曼徹斯特瘢痕評定量表（Matching assessment of photographs and scars，MAPS）[11]，于治療后7d、14d對患者進行評價，該量表包含色澤、顏色、厚度、邊緣高度以及瘢痕表面，色澤分數為1～3分，其余為1～5分，評分范圍5～23分，分數越高，瘢痕越嚴重。

1.3.3.5 并發癥情況：統計兩組患者出現感染、囊腫、過敏、積液等并發癥發生及復發情況。

1.3.3.6 臨床療效：比較兩組患者經治療后療效，顯效：創面基本愈合，肉芽組織生長良好;有效：創面出現愈合，肉芽組織有生長;無效：創面無愈合，肉芽組織無生長。比較皮片、皮瓣成活率。

1.3.3.7 炎癥因子水平：治療前后在患者空腹狀態下抽取4ml肘靜脈血，以離心半徑13cm，轉速2 000r/min離心10min，取上清液即血清。利用酶聯免疫吸附測定法（ELISA）試劑盒檢測血清中的腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-8、γ干擾素（interferon-γ，INF-γ）等炎癥因子水平，ELISA試劑盒由上海潤裕生物科技有限公司生產，嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.3.3.8 肉芽組織特異性蛋白SDF-1α、VEGF、CXCR4表達情況：分別取患者治療后7d創面肉芽組織細胞進行裂解，利用Western blot方法檢測蛋白表達情況，將裂解的蛋白離心，提取總蛋白，利用SDS-PAGE膠進行電泳，將得到的條帶進行轉膜，利用硝酸纖維素膜孵育鼠源的SDF-1α、VEGF、CXCR4一抗，4℃孵育過夜，利用PBS緩沖液沖洗3次，每次10min，之后孵育二抗1h，PBS緩沖液沖洗3次，每次10min。利用發光液處理PBS緩沖液清洗過的硝酸纖維素膜，進行顯影、定影。掃描膠片，Image J處理條帶灰度值。

1.4 統計學分析：所有研究數據均在SPSS 19.0軟件上運行處理，治療前后計量資料用平均數±標準差（x?±s）表示，符合正態分布的數據組間比較采用t檢驗，不符合正態分布數據比較采用Mann-Whitney秩和檢驗;計數資料用百分數（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。檢驗標準設置為P<0.05。

2 ?結果

2.1 兩組創面愈合時間比較：觀察組患者創面愈合時間為（13.85±3.15）d，明顯低于對照組的（15.72±2.99）d，差異具有統計學意義（t=-3.335，P<0.05）。

2.2 兩組創面愈合率比較：隨著治療時間的增加，兩組患者創面愈合率逐漸增加，并且觀察組創面愈合率一直高于對照組，差異具有統計學意義（P<0.05）

2.3 兩組VAS、VSS、MAPS評分比較：兩組患者治療前VAS評分、治療后7d VSS及MAPS評分比較，差異無統計學意義（P>0.05）;治療后兩組患者VAS評分均降低，且觀察組低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;治療后14d，兩組患者VSS及MAPS評分均降低，且觀察組低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。

2.4 兩組并發癥發生率與復發率比較：觀察組并發癥發生率（10.00%）與復發率（6.67%）明顯低于對照組（25.00%，20.00%），差異具有統計學意義（P<0.05），見表4。

2.5 兩組療效及皮片/皮瓣成活率比較：治療后，觀察組患者總有效率91.67%顯著高于對照組76.67%，且觀察組患者皮片或皮瓣成活率88.83%顯著高于對照組71.67%，差異均具有統計學意義（P<0.05）

2.6 兩組治療前后炎癥因子水平比較：兩組患者治療前TNF-α、IL-1β、IL-8和INF-γ水平比較差異無統計學意義（P>0.05），治療后兩組患者TNF-α、IL-1β、IL-8和INF-γ水平出現降低趨勢，且觀察組低于對照組，差異具有統計學意義（P<0.05）。見表6。

2.7 肉芽組織特異性蛋白SDF-1α、VEGF、CXCR4表達：治療后7d，觀察組SDF-1α、VEGF、CXCR4蛋白表達明顯高于對照組，差異具有統計學意義（P<0.05）

3 ?討論

燒傷不僅僅只是肌膚表皮受損，其還可以導致機體出現應激反應，免疫系統紊亂[12-13]。老年人由于機體自我調節能力降低，免疫力薄弱，更易遭受燒傷的傷害。生活中多種因素能夠導致老年燒傷，并且老年患者燒傷后愈合速度慢，死亡率高，可產生較多并發癥，病情隱秘不易被發現，嚴重威脅著老年患者的身體健康[9]。機體受到傷害后，細胞釋放炎癥因子、磷脂酶等因子，機體長時間處于應激狀態，嚴重影響著老年患者的病情發展，給燒傷的診治帶來嚴重困擾。燒傷患者喪失一定的勞動力給生活帶來嚴重困難，其心理長時間處于自悲狀態，影響著患者與外界的交流[10，14]。目前，美容整復治療法是治療老年燒傷的常用方法，其可以通過保守治療的方式，如徹底清除壞死組織，換藥、保痂等，繼而選擇合適的皮膚組織進行植皮修復等，可促進老年患者燒傷創面的恢復。由于老年人免疫力差，機體自我調節能力有限，對于整復治療后存在一定的免疫排斥，對燒傷創面的愈合產生副作用。APG是由患者外周靜脈血經一系列的離心、濃縮等步驟得到的富含血小板的血漿，之后再按照一定的比例與CaCl2混合獲得的[11，15]。APG取自患者本身，且富含大量的生長因子，可以減少老年患者排斥反應，降低炎癥因子，促進燒傷部位的恢復。

本研究結果表明，使用APG后，觀察組患者創面愈合時間較對照組短，創面愈合率顯著提高，提示APG具有促進創面愈合作用。APG能夠提高組織的再生與愈合，廣泛應用于整形外科、創傷外科，APG為血小板的濃縮物，其中含有大量的生長因子和纖維蛋白，且生長因子來源于患者自身，各種生長因子與纖維蛋白共同作用，促進創面的愈合[16]。APG在制作過程中含有大量的凝血酶，具有收縮創面、抗凝血的作用，促進創面的閉合[17]。本研究結果顯示經治療后VAS、VSS、MAPS評分逐漸降低，且觀察組比對照組降低明顯，提示APG能夠提高患者的適應性，滿足患者的心理滿足感，促進患者燒傷部位的痊愈。APG臨床安全性高，與外界免疫排斥小，取材簡單易得，醫療成本低，患者易于接受，APG含有的生長因子bEGF能夠促進細胞分裂，調節細胞代謝，促進血管生成，EGF可以調節創面修復的各個過程，各種生長因子與纖維蛋白共同促進創面與瘢痕的消失[18]。本研究結果顯示，治療后患者的炎癥水平逐漸降低，觀察組低于對照組，提示APG含有的纖維蛋白，能夠修復細胞，促進細胞的再生，能夠加速凝血，降低炎癥，預防感染。同時APG含有少量的單核細胞和白細胞，可以減少感染的發生[19-20]。本研究結果顯示，美容整復治療中加入APG后患者并發癥發生率降低，療效及皮片/皮瓣成活率大幅提高，提示APG能夠加快創面愈合，降低并發癥的產生，APG含有高濃度的生長因子，多種生長因子共同調節機體的康復，其還具有黏合性，可降低血小板的流失，長時間維持生長因子的穩定性，藥效更加持久，防止復發的產生。生長因子的濃度與患者機體全血比例相當，減少并發癥的產生，提高皮瓣、皮片的成活率。同時APG可以降低疼痛因子的釋放，減輕患者疼痛感[21]。本研究結果顯示，添加APG后，肉芽組織特異性蛋白SDF-1α、VEGF、CXCR4蛋白表達明顯升高，提示APG具有促進肉芽組織蛋白表達作用，APG中含有的VEGF可以誘導微血管內皮細胞入侵膠原凝膠，促進肉芽組織的生長，SDF-1α、VEGF、CXCR4是肉芽組織的特異性蛋白，其在調節機體免疫應答中處于重要地位，加入APG后能夠促進機體增強、調節免疫應答，促進細胞的增殖分化，合成各種生長因子與纖維蛋白，誘導成骨，加速新血管的生成，促進肉芽組織增生，促進創面愈合[22]。

綜上所述，APG能夠促進老年患者燒傷創面的愈合，減低創面炎癥因子，避免并發癥的產生，提高肉芽組織特異性蛋白的表達，促進細胞分裂，加速新血管的形成，促進創面愈合，易于患者接受，提高患者生活質量，值得在臨床推廣使用。

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[收稿日期]2019-04-28

本文引用格式：楊景軍，陳航，魏子人，等.自體富血小板凝膠在老年燒傷患者整復治療中對創面愈合及肉芽組織特異性蛋白表達的影響[J].中國美容醫學，2019，28（12）：83-87.