尿紅細(xì)胞與尿隱血檢測(cè)方法評(píng)價(jià)及影響因素分析

殷賢斌 朱曉麗 黃小玲 朱翔 謝萍 方中濤 許大海 趙偲

(馬鞍山市臨床檢驗(yàn)中心，安徽 馬鞍山 243000)

尿常規(guī)檢查可以檢測(cè)尿液的物理、化學(xué)性質(zhì)和尿液有形成分，對(duì)泌尿系統(tǒng)疾病及一些全身性疾病的診斷和鑒別診斷具有非常重要的意義[1]。而在日常工作中，該測(cè)試方法易受試紙、儀器設(shè)備、尿液中某些藥物等因素的影響，導(dǎo)致尿沉渣分析儀紅細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果、尿隱血檢測(cè)結(jié)果與尿沉渣鏡檢比較，易出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性。收集我院門診患者資料，發(fā)現(xiàn)尿隱血陽(yáng)性檢出率達(dá)到20%左右，與姚登攀等報(bào)道相符[2]。我實(shí)驗(yàn)室本著提高尿液檢測(cè)質(zhì)量，更好的服務(wù)臨床的目的，特別對(duì)尿隱血假陰性、儀器法尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)假陽(yáng)性、尿中不耐熱酶導(dǎo)致尿隱血假陽(yáng)性的原因做了進(jìn)一步探討。

1 資料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源 選擇54例干化學(xué)法檢測(cè)尿液隱血陽(yáng)性的患者，其中男20例，女34例，年齡17～92歲，平均(62.11±17.70)歲。另選擇34例干化學(xué)法檢測(cè)尿液隱血陰性而尿沉渣分析儀檢測(cè)紅細(xì)胞超出參考范圍內(nèi)的患者，其中男12例，女22例，年齡17～95歲，平均(60.02±17.04)歲。

1.2儀器與試劑 COBIO全自動(dòng)尿液分析工作站及購(gòu)自德國(guó)科寶公司原裝配套計(jì)數(shù)板及配套試條，尿有形成分質(zhì)控液為伯樂(lè)尿液質(zhì)控，尿液干化學(xué)質(zhì)控為迪瑞公司尿液質(zhì)控。普通雙目生物顯微鏡(Olympus)；Fuchs-Rosenthal計(jì)數(shù)板；阿辛藍(lán)—派洛寧B染色液、專用一次性尿杯、尿試管。

1.3檢測(cè)方法 儀器近期均經(jīng)過(guò)廠家校準(zhǔn)。嚴(yán)格按照儀器操作規(guī)程進(jìn)行，質(zhì)控在控后進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)。標(biāo)本在留取后2 h內(nèi)完成。(1)儀器法：每日留取標(biāo)本在科寶全自動(dòng)尿液有形成分分析儀上完成干化學(xué)及尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的檢測(cè)。(2)膠體金法：將膠體金試條放入混勻后的尿中，不得超過(guò)控制線，3～5 min看結(jié)果。(3)顯微鏡法：將每天上機(jī)后的標(biāo)本(采用未離心，S染色液染色法)立即充分混勻后沖入一次性Fuchs-Rosenthal計(jì)數(shù)板進(jìn)行計(jì)數(shù)，算出1 μL尿液內(nèi)的細(xì)胞數(shù)[4]。顯微鏡的檢查均由兩位有經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)技師[5]采用盲法獨(dú)立完成，取兩人計(jì)數(shù)結(jié)果的均值。(4)煮沸實(shí)驗(yàn)：立即取上述干化學(xué)法檢測(cè)尿液隱血陽(yáng)性標(biāo)本(54例)各5 mL煮沸，迅速冷卻后再用干化學(xué)法檢測(cè)尿隱血[6]，目的為去除尿中不耐熱過(guò)氧化物酶。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1以顯微鏡檢測(cè)為金標(biāo)準(zhǔn)的尿隱血陽(yáng)性標(biāo)本結(jié)果比較 干化學(xué)法檢測(cè)尿隱血陽(yáng)性的患者尿標(biāo)本不離心顯微鏡鏡檢紅細(xì)胞，同時(shí)采用膠體金單克隆抗體法檢測(cè)尿隱血，54例患者中29例顯微鏡鏡檢紅細(xì)胞正常，但膠體金單克隆抗體法54例尿隱血均陽(yáng)性，見(jiàn)表1。

表1 以顯微鏡檢測(cè)為金標(biāo)準(zhǔn)與煮沸后尿標(biāo)本隱血結(jié)果比較(n)

2.2兩種方法尿液煮沸前后隱血結(jié)果比較 以顯微鏡鏡檢結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)比較：尿隱血結(jié)果為1+標(biāo)本煮沸后，僅有22%的標(biāo)本隱血仍為陽(yáng)性，假陽(yáng)性率>50%；尿隱血結(jié)果為2+和3+煮沸后干化學(xué)結(jié)果，假陽(yáng)性率為0，結(jié)果與顯微鏡鏡檢符合率為100%。顯微鏡鏡檢紅細(xì)胞25例超出參考范圍，煮沸后再測(cè)隱血有23例陽(yáng)性。見(jiàn)表2。

表2 兩種方法與尿液煮沸前后隱血結(jié)果比較(n)

2.3以顯微鏡檢測(cè)為金標(biāo)準(zhǔn)尿隱血陰性標(biāo)本結(jié)果比較 尿沉渣分析儀檢測(cè)紅細(xì)胞超出參考范圍內(nèi)而干化學(xué)法檢測(cè)尿隱血陰性的患者尿標(biāo)本不離心顯微鏡鏡檢紅細(xì)胞，同時(shí)采用膠體金單克隆抗體法檢測(cè)尿隱血，34例患者標(biāo)本中24例顯微鏡鏡檢紅細(xì)胞超出正常范圍，其中18例尿紅細(xì)胞均為變形紅細(xì)胞，其余6例是邊緣為鋸齒樣的紅細(xì)胞，且膠體金法測(cè)隱血均為陽(yáng)性。同時(shí)對(duì)34例患者標(biāo)本進(jìn)行冰醋酸破壞實(shí)驗(yàn)。顯微鏡鏡檢紅細(xì)胞在正常范圍內(nèi)的10例樣本中，其中儀器將草酸鈣結(jié)晶誤認(rèn)為紅細(xì)胞有4例，膠體金法測(cè)隱血均為陰性。剩余30例標(biāo)本按照科寶XS儀器檢測(cè)白細(xì)胞結(jié)果分組，見(jiàn)表3。

表3 儀器法計(jì)數(shù)尿WBC陽(yáng)性、陰性組的尿RBC計(jì)數(shù)結(jié)果比較(n)

3 討 論

血尿是腎臟疾病的一個(gè)重要臨床表現(xiàn)，引起血尿的常見(jiàn)病因包括結(jié)石、炎癥、外傷、腫瘤、畸形[7-9]。干化學(xué)測(cè)隱血和尿沉渣檢查紅細(xì)胞是篩查血尿的常規(guī)方法。尿液干化學(xué)檢測(cè)隱血呈假陽(yáng)性常見(jiàn)因素：(1)堿性尿、低比重尿使尿中存在的紅細(xì)胞溶解致血紅蛋白溢出，難以找到完整RBC[10]，本試驗(yàn)中4例pH為8.0，比重1.005的標(biāo)本上機(jī)檢測(cè)，2例標(biāo)本的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果超出正常范圍，可能與我室的科寶XS的尿沉渣具有自動(dòng)離心，最終提高了陽(yáng)性率有關(guān)。(2)尿中肌紅蛋白、易熱酶[11]等可造成 BLD假陽(yáng)性，不耐熱酶通過(guò)煮沸實(shí)驗(yàn)可以大致鑒別。經(jīng)試管煮沸后血紅蛋白雖凝固，但不會(huì)影響隱血試驗(yàn)的反應(yīng)，即煮沸尿液不會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果，需要注意的是所有標(biāo)本的相關(guān)實(shí)驗(yàn)均應(yīng)在2 h內(nèi)完成[12]。本研究顯示，不耐熱酶造成尿干化學(xué)隱血(1+)假陽(yáng)性率達(dá)到50%以上，而尿干化學(xué)隱血(2+及以上)假陽(yáng)性率為0，提醒我們尿隱血煮沸試驗(yàn)可能僅適用于干化學(xué)隱血1+的標(biāo)本。通過(guò)實(shí)驗(yàn)我們也不難看出如果以煮沸實(shí)驗(yàn)后尿隱血結(jié)果與顯微鏡金標(biāo)準(zhǔn)存在差異，但絕不是煮沸實(shí)驗(yàn)陰性，就說(shuō)明無(wú)紅細(xì)胞，仍會(huì)出現(xiàn)假陰性，造成漏檢。尿隱血煮沸試驗(yàn)主要意義為：臨床如果有患者尿隱血為1+，顯微鏡鏡檢紅細(xì)胞為陰性，可使用煮沸試驗(yàn)判斷是否為不耐熱酶干擾，但煮沸試驗(yàn)?zāi)螂[血仍為陽(yáng)性，應(yīng)引起重視；對(duì)于尿干化學(xué)隱血2+及以上的標(biāo)本，我們就不應(yīng)使用煮沸試驗(yàn)來(lái)加以判斷，而應(yīng)引起高度重視，積極尋找原因，早日明確診斷。(3)有些型號(hào)試帶過(guò)于敏感[13]，可配合使用膠體金法輔助診斷。本研究顯示：膠體金法陽(yáng)性率高于干化學(xué)陽(yáng)性率，與黃燕婷[14]等報(bào)道的不太相符，提示膠體金法或不能很好地排除尿隱血假陽(yáng)性。膠體金單克隆抗體法是利用免疫學(xué)方法進(jìn)行隱血檢測(cè)，原理是金標(biāo)抗人血紅蛋白(Hb)抗體特異性地結(jié)合人Hb成分后，向上擴(kuò)散分別與測(cè)試區(qū)的另一抗人Hb(夾心法)結(jié)合，使膠體金顆粒聚集呈紅色，可很好地鑒別肌紅蛋白尿和血紅蛋白尿，特別是當(dāng)臨床標(biāo)本儀器干化學(xué)法3+，膠體金陰性或極弱陽(yáng)性，鏡檢紅細(xì)胞正常，而患者有過(guò)劇烈運(yùn)動(dòng)等原因造成的肌肉損傷，則可大致判斷是肌紅蛋白尿。

尿液干化學(xué)檢測(cè)隱血假陰性常見(jiàn)因素：尿液中存在大劑量維生素C及高比重和高蛋白尿時(shí)均可影響隱血試驗(yàn)[15]，引起假陰性。而本文中34例(均排除大劑量維生素C、高比重和高蛋白干擾)紅細(xì)胞超出參考范圍內(nèi)而干化學(xué)法檢測(cè)尿隱血陰性的患者，有24例顯微鏡鏡檢紅細(xì)胞超出正常范圍，(其中18例標(biāo)本紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果接近科寶XS的cut-off值，6例紅細(xì)胞計(jì)數(shù)>15.00個(gè)/μL)。接近科寶XS的cut-off值18例標(biāo)本中的紅細(xì)胞均為變形紅細(xì)胞，可能其由于經(jīng)過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)膜的擠壓，及體內(nèi)滲透壓的不斷變化，導(dǎo)致細(xì)胞中血紅蛋白丟失、破壞，再加上晨尿標(biāo)本體內(nèi)停留過(guò)久的因素，最終使得血紅蛋白的過(guò)氧化物酶反應(yīng)性降低，使干化學(xué)呈假陰性；而紅細(xì)胞值>15.00個(gè)/μL的6例標(biāo)本臨床診斷分別為腦梗死、后循環(huán)出血、腦出血、腦供血不足，腦出血患者尿中的紅細(xì)胞均為鋸齒狀均一型紅細(xì)胞。可能因?yàn)槟X出血時(shí)引發(fā)腦水腫，機(jī)體血漿晶體滲透壓隨之降低，進(jìn)入紅細(xì)胞水分增多導(dǎo)致紅細(xì)胞膨脹，變形能力降低。當(dāng)此類紅細(xì)胞出現(xiàn)在尿中時(shí)，其血紅蛋白可能已變性，難以與試劑反應(yīng)，最終導(dǎo)致假陰性。由于本組研究樣本量偏小，存在一定的局限性；因此腦出血病類患者尿紅細(xì)胞陽(yáng)性但尿隱血呈陰性是巧合還是存在關(guān)聯(lián)，尚待加大樣本量進(jìn)一步研究。

本次研究發(fā)現(xiàn)造成尿沉渣分析儀紅細(xì)胞呈假陽(yáng)性的主要原因?yàn)椋翰菟徕}結(jié)晶干擾(具體為單水草酸鈣結(jié)晶和體積較小的雙水草酸鈣結(jié)晶)；結(jié)合顯微鏡鏡檢發(fā)現(xiàn)，儀器將白細(xì)胞(主要為淋巴細(xì)胞)誤認(rèn)為紅細(xì)胞，這類白細(xì)胞體積較小，無(wú)顆粒，形狀類似紅細(xì)胞，儀器不能識(shí)別造成假陽(yáng)性；尿沉渣分析儀紅細(xì)胞呈假陰性的主要原因?yàn)闄z測(cè)標(biāo)本背景物質(zhì)較多，本文中的3例假陰性標(biāo)本(2例含有大量粘液絲、1例含有較多白細(xì)胞)，由于背景物質(zhì)包裹或覆蓋了紅細(xì)胞，使得紅細(xì)胞未被標(biāo)識(shí)，造成假陰性。對(duì)于此類標(biāo)本，我室利用科寶XS的尿沉渣分析儀，根據(jù)其特有的全視野實(shí)景成像原理，我們可以根據(jù)拍攝圖片再行人工顯微鏡檢查，以保證結(jié)果準(zhǔn)確。