可溶性纖維水平和n-6、n-3多不飽和脂肪酸比例對(duì)生長(zhǎng)兔消化和健康的影響

安芳芳，徐端紅

（河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，河南鄭州 451450）

關(guān)于降低家兔流行性腸病的營(yíng)養(yǎng)策略是減少粗蛋白質(zhì)在回腸流動(dòng)或日糧蛋白水平及提供可溶性纖維水平（Chamorro 等，2007）。另一種對(duì)兔子健康有積極影響的策略是斷奶后限制采食量。但在生產(chǎn)實(shí)際中將這些營(yíng)養(yǎng)策略或飼養(yǎng)策略結(jié)合似乎都不能完全控制發(fā)病率，或在長(zhǎng)時(shí)間將死亡率降到10% 以下。因此，為了降低斷奶后死亡率，尋找其他可能與這些策略相互作用的營(yíng)養(yǎng)因素仍然很重要。日糧脂肪來(lái)源直接影響免疫細(xì)胞的組成和功能，考慮到多不飽和脂肪酸n-6 和n-3對(duì)炎癥過(guò)程的拮抗作用，脂質(zhì)對(duì)免疫反應(yīng)的影響在很大程度上是可變的（Anderson 和Fritsche，2002）。因此，日糧需要一個(gè)均衡的n-6/n-3 多不飽和脂肪酸比例，以確保對(duì)病原體的最佳免疫反應(yīng)。Casado 等（2013）報(bào)道了日糧使用亞麻籽使n-6/n-3 從5.9 降低到0.8 對(duì)死亡率的積極影響。因此，本研究旨在評(píng)價(jià)降低n-6/n-3 多不飽和脂肪酸比值是否能改善家兔消化功能和健康，并研究其是否與日糧可溶性纖維水平具有協(xié)同作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)日糧與動(dòng)物試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)日糧采用2×2 共4 組設(shè)計(jì)，即在干物質(zhì)基礎(chǔ)上采用高水平可溶性纖維（130 g/kg）和低水平可溶性纖維（78 g/kg）和兩種不同的n-6/n-3 脂肪酸比例（13.4 ：1 和3.5 ：1）（表1）。試驗(yàn)1 選擇518 只26 d 斷奶的肉兔，在185 個(gè)籠子中飼養(yǎng)，每個(gè)籠子關(guān)2 或3 只兔，從斷奶當(dāng)天（26 d）到39 d 飼喂試驗(yàn)日糧，在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中記錄死亡率。試驗(yàn)2 選擇830 只肉兔在286 籠子中飼養(yǎng)，每個(gè)籠子關(guān)2 或3 只兔。斷奶前母兔和仔兔均飼喂試驗(yàn)日糧，斷奶后仔兔飼喂育肥日糧，記錄死亡率。試驗(yàn)3 選擇斷奶體重為（450±52）g 的26 d 肉兔56 只，分為4 組，分別飼喂試驗(yàn)日糧，采用Gomez-Conde等（2011）的方法將家兔分別置于代謝籠中，記錄39 ～42 d 干物質(zhì)攝入量和糞便總排出量，樣品用于測(cè)定常規(guī)養(yǎng)分含量及粘蛋白含量。試驗(yàn)4 選擇224 只26 d 斷奶肉兔，分為4 組，每組56 只，分別飼喂試驗(yàn)日糧。試驗(yàn)第39 日齡時(shí)取全部胃腸道稱重，分離胃、盲腸（測(cè)定內(nèi)容物pH）、肝，稱重?cái)?shù)據(jù)用于計(jì)算相對(duì)重量?？漳c和盲腸樣本切成2 cm 左右，生理鹽水沖洗后-80℃保存用于RNA提取。

表1 試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平 g/kg

1.2 免疫相關(guān)基因表達(dá)測(cè)定 參考Ipharraguerre（2013）的研究方法測(cè)定白細(xì)胞介素（2、4、8 和10）、一氧化氮合酶、干擾素-γ（IFN-γ）、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR-γ）、Toll 樣受體（TLR-2，TLR-4）以及粘蛋白（MUC-1 和MUC-13）基因的mRNA 相對(duì)表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)設(shè)計(jì)中的主因素是可溶性纖維水平以及n-6/n-3 多不飽和脂肪酸比值，各組數(shù)據(jù)采用SAS 軟件多因素方差模型進(jìn)行分析，組間平均數(shù)的差異性用Tukey 法進(jìn)行判定，P ＜0.05 表示顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)生長(zhǎng)性能的影響 由表2 可知，試驗(yàn)1中肉兔的死亡率平均為24.5%。生長(zhǎng)第一階段飼喂高可溶性纖維的肉兔死亡率下降26%（P＜0.05）。試驗(yàn)2 中流行性兔腸病引起的死亡率平均為34.7%，斷奶前飼喂處理組日糧和在整個(gè)生長(zhǎng)期間飼喂商品飼料組之間無(wú)顯著差異（P ＞0.05）。最 后，試 驗(yàn)4 在26 ～39 d 時(shí) 流 行 性 兔腸病的平均死亡率為8.1%。高可溶性纖維飼料組死亡率較低可溶性纖維組顯著降低87%（P＜0.05）。而n-6/n-3 對(duì)死亡率無(wú)顯著影響（P ＞0.05）。

由表3 可知，各組日糧對(duì)生長(zhǎng)期肉兔39 d 體重和日增重?zé)o顯著影響（P ＞0.05）。但高水平可溶性纖維組肉兔采食量下降8%，顯著提高了飼料效率（P ＜0.05），n-6/n-3 降低有增加采食量的趨勢(shì)（P=0.059）。

2.2 對(duì)回腸和糞養(yǎng)分表觀消化率的影響 由表 4 和表5 可知，各處理對(duì)回腸和糞干物質(zhì)消化率無(wú)顯著影響（P ＞0.05）。可溶性纖維水平的升高有提高回腸淀粉表觀消化率和降低回腸淀粉流量的趨勢(shì)（P=0.06），但顯著降低糞便表觀消化率（P ＜0.05）。隨著可溶性纖維水平的增加，回腸纖維消化率提高1 倍，糞便消化率提高40%（P＜0.05）。日糧n-6/n-3 降低顯著降低了低可溶性纖維組糞便纖維的消化率（P ＜0.05）。日糧可溶性纖維水平升高，回腸粘蛋白濃度和流量提高17%（P ＜0.05），但對(duì)糞便粘蛋白排泄量無(wú)顯著影響（P ＞0.05）。n-6/n-3 降低顯著降低了空腸粘蛋白含量（P ＜0.05）。

表2 日糧可溶性纖維水平和脂肪酸類(lèi)型對(duì)生長(zhǎng)期肉兔死亡率的影響 %

表3 日糧可溶性纖維水平和脂肪酸類(lèi)型對(duì)生長(zhǎng)期肉兔生長(zhǎng)性能的影響（試驗(yàn)4）

表4 日糧可溶性纖維水平和脂肪酸類(lèi)型對(duì)生長(zhǎng)期肉兔回腸表觀消化率的影響（試驗(yàn)4）

表5 日糧可溶性纖維水平和脂肪酸類(lèi)型對(duì)生長(zhǎng)期肉兔糞表觀消化率的影響（試驗(yàn)3）

2.3 對(duì)器官相對(duì)重量和盲腸pH 的影響 由表6可以看出，與低可溶性纖維高n-6/n-3 日糧組相比，肉兔飼喂低可溶性纖維低n-6/n-3 日糧使整個(gè)消化道的相對(duì)重量降低10%，主要是由于胃和盲腸相對(duì)重量顯著降低（P ＜0.05）。高可溶性纖維日糧組較低可溶性纖維日糧組肝臟相對(duì)重量降低6%（P ＜0.05）。與低可溶性纖維高n-6/n-3 日糧組相比，其他3 組盲腸pH 降低10%（P＜0.05）。

2.4 對(duì)免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響 由表7 可知，日糧可溶性纖維水平和n-6/n-3 對(duì)盲腸IL-8 基因mRNA 相對(duì)表達(dá)水平的影響具有顯著交互作用（P ＜0.05），其中低可溶性纖維低n-6/n-3 組表達(dá)量顯著降低（P ＜0.05）。日糧可溶性纖維水平和n-6/n-3 對(duì)IL-6 基因mRNA 相對(duì)表達(dá)水平的影響具有顯著交互效應(yīng)趨勢(shì)（P=0.09）。低可溶性纖維日糧較高可溶性纖維日糧組顯著提高回腸MUC-13 和一氧化氮合酶基因mRNA 相對(duì)表達(dá)水平（P ＜0.05）。日糧n-6/n-3 降低顯著提高了增回腸IL-2、IL-10、IFN-γ 和TLR-2 基因mRNA 相對(duì)表達(dá)水平（P ＜0.05）。

表6 日糧可溶性纖維水平和脂肪酸類(lèi)型對(duì)生長(zhǎng)期肉兔器官相對(duì)重量的影響（試驗(yàn)4）

表7 日糧可溶性纖維水平和脂肪酸類(lèi)型對(duì)生長(zhǎng)期肉兔免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響（試驗(yàn)4）

3 討論

營(yíng)養(yǎng)策略已被證明可以降低由流行性腸病引起的幼兔斷奶后的死亡率，其中使用足夠的纖維來(lái)源和水平，以及在兔日糧中添加n-3 多不飽和脂肪酸已被證明可以降低死亡率（Trocino 等，2013）。在本研究中，隨著日糧可溶性纖維水平的升高，斷奶后肉兔死亡率降低，這與Trocino 等（2013）的研究結(jié)果一致。當(dāng)可溶性纖維僅在斷奶后階段提供時(shí)，也得到類(lèi)似結(jié)果，在育肥階段仍保持積極作用。相比之下，斷奶前日糧僅添加同等水平的可溶性纖維在斷奶后并不足以產(chǎn)生預(yù)期效果。因此，本研究強(qiáng)調(diào)斷奶后日糧對(duì)肉兔健康的重要影響，可能與斷奶后盲腸菌群的變化有關(guān)。通過(guò)增加日糧C18 ：3n-3 水平降低n-6/n-3對(duì)死亡率無(wú)顯著影響，這一結(jié)果與Maertens 等（2005）的觀察結(jié)果相似。日糧可溶性纖維對(duì)育肥期死亡率的積極影響可能與腸道功能或微生物菌群改變有關(guān)（Carabano 等，2008）。

飼喂高水平可溶性日糧的家兔回腸淀粉消化率提高，回腸淀粉流量減少，飼料效率提高，回腸淀粉消化率的增加表明小腸功能增強(qiáng)。粘蛋白在腸道保護(hù)中發(fā)揮重要作用，作為微生物的物理和化學(xué)屏障，并與免疫系統(tǒng)相互作用（Sheng 等，2013）。在胃腸道中跨膜粘液蛋白由上皮細(xì)胞表達(dá)，盡管其功能仍有待闡明，但與凝膠形成的粘液蛋白相比，它們似乎參與了腸細(xì)胞傳感和信號(hào)傳遞（Johansson 等，2013）。本研究未觀察到兩種粘液蛋白在健康家兔闌尾中的表達(dá)差異。但在高可溶性纖維日糧組中，肉兔回腸MUC-13 基因表達(dá)下調(diào)，與此同時(shí)，促炎癥一氧化氮合酶基因的表達(dá)較低，且對(duì)MUC-1 和促炎、抗炎的白細(xì)胞介素?zé)o顯著影響。如果在流行性腸病條件下，可溶性纖維的有益作用可能是因?yàn)槠渫ㄟ^(guò)MUC-13 在腸細(xì)胞中促進(jìn)更好的免疫穩(wěn)態(tài)的作用，但其在疾病受控條件下還有待測(cè)試，值得進(jìn)一步研究。

盡管n-6/n-3 對(duì)斷奶后死亡率、生長(zhǎng)性能和回腸消化率無(wú)顯著影響，但其可以與可溶性纖維產(chǎn)生交互作用，如含有n-3 脂肪酸，且可溶性纖維水平較低，降低IL-8 和IL-6 的表達(dá)，這與關(guān)于n-3 脂肪酸對(duì)降低疾病中促炎因子IL-8 和IL-6有益作用的信息一致（Calder，2003）。另一方面，無(wú)論日糧可溶性纖維水平如何，高水平n-3 脂肪酸提高回腸IL-2、IL-10、INF-γ、TLR-2 基因表達(dá)?？紤]到n-3 脂肪酸的抗炎作用，這種結(jié)果似乎是矛盾的。但由于缺乏對(duì)促炎因子IL-6、IL-8和一氧化氮合酶的影響，且缺乏對(duì)死亡率的影響，因此不能排除嚴(yán)重疾病損害或炎癥的影響。相比之下，低水平n-6/n-3 日糧中多不飽和脂肪酸總濃度越高抗氧化能力越弱。

4 結(jié)論

日糧可溶性纖維水平的提高改善了生長(zhǎng)肉兔腸道健康，但在可接受閾值下并沒(méi)有降低死亡率，而加入n-3 多不飽和脂肪酸對(duì)腸道健康無(wú)顯著改善作用，同時(shí)它與日糧可溶性纖維對(duì)肉兔健康的影響沒(méi)有協(xié)同作用。