補中益氣湯對化療性大鼠消化道不良反應的防治效果及機制探討

劉笑彤，胡曉天，周詡棟，李 震，閆雪潔△

(1. 山東中醫藥大學，濟南 250355； 2. 煙臺市中醫醫院，山東 煙臺 264000)

補中益氣湯出自李東垣《脾胃論》，功能益氣健脾、升陽舉陷，益氣健脾效果顯著，對于四肢無力、困倦少食、飲食乏味等消化道癥狀，有較好的治療效果。本方治證系因飲食勞倦、損傷脾胃以致脾胃氣虛所致。方中以黃芪為君藥，臣以人參，佐白術以益氣健脾，助脾運化，以資氣血生化之源。現代研究發現，給大鼠注射化療藥物順鉑后所產生的異食癖行為，可以用來模擬建立化療性消化道不良反應的大鼠模型[1]。

化療是當今治療腫瘤疾病不可或缺的一種方法，是一把雙刃劍，具有毒性的化療藥物在抑制惡性腫瘤細胞增殖、擴散的同時，也在不同程度上損害了正常的組織細胞，尤其是生長活躍的胃腸道黏膜上皮細胞，從而出現嚴重的消化道不良反應，如惡心嘔吐等[2]。如何避免或緩解化療過程中引起的消化道不良反應，成為當下亟待解決的問題。本實驗旨在觀察補中益氣湯對于化療性消化道不良反應的防治效果，并探討其防治作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗藥物

根據《方劑學》新世紀版中規定的補中益氣湯用藥劑量 (黃芪15 g，炙甘草15 g，人參15 g，當歸10 g，橘皮6 g，升麻6 g，柴胡12 g，白術10 g)，以臨床常用劑量并通過“人和動物之間按體表面積折算的等效劑量比值表”計算出大鼠等效劑量, 并分別設低、中、高劑量, 即1.6 g/kg、3.2 g/kg、6.4 g/kg。湯劑煎至200 ml，中藥由山東中醫藥大學第一附屬醫院藥劑室提供。順鉑(江蘇豪森藥業股份有限公司生產，國藥準字H20040813 20 mg/支)、鹽酸昂丹司瓊(濟南永寧制藥股份有限公司生產 國藥準字H20064864 8mg4mL/支)。

1.2 實驗試劑

大鼠生長抑素(SST)酶聯免疫試劑盒(生產批號L140312253)、大鼠血管活性腸肽(VIP)檢測試劑盒(生產批號L131008089),購于武漢優爾生科技股份有限公司。大鼠胃動素(MTL)酶聯免疫試劑盒(生產批號U11133087)、大鼠胃泌素(Castrin)酶聯免疫試劑盒(生產批號T30133086),購于武漢華美生物工程有限公司。

1.3 實驗動物

12周齡雄性Wistar大鼠56只,體質量250±20 g, 由山東中醫藥大學實驗動物中心提供(動物合格證編號SCXK 20160002)，飼養于山東中醫藥大學動物房恒溫 (23±1 ℃)恒濕(50±5%)飼養室，自由進食和飲水。

1.4 實驗器材

臺式高速冷凍離心機(湘儀離心機儀器有限公司)；KL-II型生物組織自動脫水機、切片機、攤片烤片機，自動包埋機(湖北康龍電子科技有限責任公司)；DHP-420型電熱恒溫培養箱(北京市永光明醫療儀器有限公司)；Spectra M5型多功能酶標儀(美國 Molecular Devices)。

1.5 實驗方法

1.5.1 造模方法 將56只大鼠隨機分為7組，每組8只，分別為空白對照組、補中益氣湯正常對照組、順鉑模型組、昂丹司瓊陽性對照組、補中益氣湯低劑量組、補中益氣湯中劑量組、補中益氣湯高劑量組。適應性飼養1周,放入與飼料形狀相似的高嶺土顆粒, 使大鼠適應其存在5 d。造模當天8∶00, 空白對照組和補中益氣湯正常對照組腹腔注射生理鹽水, 其余各組均腹腔注射順鉑6 mg/kg進行造模,注射容積均為10 ml/kg。注射順鉑后1 d,模型組大鼠攝食高嶺土量明顯增加，說明成功復制了大鼠急性異食癖模型。

1.5.2 給藥方法 從造模當天開始,各組分別灌胃生理鹽水、補中益氣湯1.6 g/kg、生理鹽水、順鉑模型組、昂丹司瓊1.3 mg/kg、補中益氣湯1.6 g/kg、補中益氣湯3.2 g/kg、補中益氣湯6.4 g/kg, 注射容積均為10 ml/kg。每天開始在固定時間點(早8∶00)，觀察并記錄大鼠高嶺土消耗量，直至實驗結束。

1.5.3 實驗取材 采用腹腔注射40 mg/kg戊巴比妥鈉方法麻醉大鼠,下腔靜脈取血靜置30 min后，4 ℃ 3000 r/min,離心15 min取血清,按照酶聯免疫檢測說明書檢測各種胃腸激素水平。腹部解剖，結扎胃賁門和幽門，摘除整個胃并剪取回腸約2 cm。

1.5.4 組織染色 將剪取的回腸放入10%中性甲醛溶液室溫固定48 h，按照常規HE染色步驟制作光鏡標本，觀察組織病理學變化[3]。

1.6 統計學方法

2 結果

2.1 補中益氣湯對化療性大鼠攝食高嶺土量的影響

表1顯示，注射順鉑后1 d,模型組大鼠攝食高嶺土量明顯增加，說明成功復制了大鼠急性異食癖模型；空白對照組和補中益氣湯正常對照組大鼠攝食高嶺土量無差異，說明補中益氣湯對正常大鼠攝食高嶺土量無影響；昂丹司瓊陽性對照組、補中益氣湯低劑量組、補中益氣湯中劑量組、補中益氣湯高劑量組大鼠在造模后3 d攝食高嶺土量顯著低于順鉑模型組(P<0.01),且各組之間大鼠攝食高嶺土量比較差異無統計學意義,說明補中益氣湯和昂丹司瓊對于防治大鼠化療性消化道不良反應均具有良好作用，且作用強度相同，即補中益氣湯低、中、高劑量在防治大鼠化療性消化道不良反應方面差異無統計學意義。

2.2 補中益氣湯對化療性大鼠胃腸組織病理形態學的影響

大體肉眼觀察空白對照組和補中益氣湯空白對照組，胃腸表面黏膜光滑呈現正常狀態；順鉑模型組大鼠胃體膨脹，胃腸壁變薄，黏膜可見充血、水腫；昂丹司瓊組、補中益氣湯低劑量組、中劑量和高劑量組可見少量胃腸黏膜充血、水腫，肉眼觀察變化較小，接近正常組織。

表1 補中益氣湯對化療性異食癖大鼠高嶺土攝入量的影響

注：與空白對照組比較：▲▲P<0.01；與順鉑模型組比較：**P<0.01

光鏡下觀察空白對照組和補中益氣湯空白對照組胃腸壁各層次結構清楚，黏膜上皮及腺體正常，未見炎細胞浸潤。順鉑模型組病理變化較大，胃腸壁各層次損傷嚴重，胃腸黏膜萎縮變薄、皺襞變淺或消失，可見大量淋巴細胞浸潤。昂丹司瓊組、補中益氣湯低劑量、中劑量和高劑量組形態基本接近正常組織，病理損傷較輕。

通過觀察、比較各組胃腸黏膜病理切片可知，小說明補中益氣湯和昂丹司瓊對于防治大鼠化療性消化道不良反應均具有良好作用，且作用強度相似，差異無統計學意義。

A.空白對照組;B.補中益氣湯正常對照組;C.順鉑模型組;D.昂丹司瓊組；E.補中益氣湯低劑量組;F.補中益氣湯中劑量組;G.補中益氣湯高劑量組圖1 各組大鼠胃組織HE切片病理形態觀察比較(×100)

A.空白對照組;B.補中益氣湯正常對照組;C.順鉑模型組;D.昂丹司瓊組；E.補中益氣湯低劑量組;F.補中益氣湯中劑量組;G.補中益氣湯高劑量組圖2 各組大鼠回腸組織HE切片病理形態觀察比較(×100)

2.3 補中益氣湯對化療性大鼠血清胃腸激素的影響

表2顯示，實驗結束后取大鼠血清樣本做檢測，順鉑模型組大鼠血清中胃泌素、胃動素水平較空白組降低(P<0.05)，生長抑素、血管活性腸肽水平較空白組升高(P<0.05)，昂丹司瓊陽性對照組、補中益氣湯低劑量組、補中益氣湯中劑量組、補中益氣湯高劑量組大鼠血清中胃泌素、胃動素水平明顯高于順鉑模型組(P<0.05)，生長抑素、血管活性腸肽水平明顯低于順鉑模型組(P<0.05)。昂丹司瓊組與補中益氣湯不同劑量組之間比較差異無統計學意義。

3 討論

中藥補中益氣湯具有補中益氣、升陽舉陷之功效。原方主治脾虛氣陷證，患者飲食勞倦、損傷脾胃之氣，以致脾胃納運乏力，癥見飲食減少、少氣懶言、大便稀溏等。癌癥患者久病體虛、中氣不足，化療藥屬攻伐之劑，久服易導致脾胃受損[3]。胃主受納水谷，胃氣虛損可見反復嘔吐、惡心、噯氣。脾主運化、脾氣不足患者水谷不化，甚者食入則嘔。方中黃芪味甘微溫，入脾肺經，補中益氣，升陽固表，故為君藥。配伍人參、炙甘草、白術補氣健脾為臣藥。當歸養血和營，協人參、黃芪補氣養血；陳皮理氣和胃，使諸藥補而不滯共為佐藥。少量升麻、柴胡升陽舉陷，協助君藥以升提下陷之中氣共為佐使，炙甘草調和諸藥為使藥。補中益氣湯方中的人參和黃芪具有補中益氣、生津養血的功效。 現代藥理學研究證實, 其具有抗氧化、抗毒、增強免疫等多重作用[4]。

表2 補中益氣湯對化療性大鼠血清胃腸激素影響比較

注：與空白對照組比較：▲P<0.05；與順鉑模型組比較：*P<0.05

有實驗表明，中藥補中益氣湯在保護消化功能、調節胃腸動力方面具有良好療效[5]，提示在臨床使用抗腫瘤化療藥物時配合應用本方，可增強免疫，預防老化，提高療效，降低化療藥物毒副反應[6-8]。本實驗應用補中益氣湯治療異食癖模型大鼠，通過比較不同劑量補中益氣湯發揮的治療作用，以探討補中益氣湯對化療性大鼠消化道不良反應的防治作用及其作用機制。通過各組化療性大鼠攝食高嶺土量對比、胃腸黏膜肉眼大體觀察、胃腸黏膜組織病理學觀察以及各組化療性大鼠血清胃腸激素的比較，可知補中益氣湯對化療性大鼠消化道不良反應表現出較好的防治效果，其效果與陽性對照昂丹司瓊組類似。

胃腸激素在調節胃腸道的分泌、運動、營養及防御活動等方面具有至關重要的作用[9-10]，胃腸激素分泌功能紊亂與化療性胃腸道不良反應的發生發展密切相關。胃泌素是重要的胃腸激素之一，能促進胃酸和胃蛋白酶的分泌，改善胃黏膜的血供與營養，促進胃黏膜和壁細胞的增殖，促進胃部蠕動。胃動素能夠啟動胃腸移行性肌電復合波(MMC)Ⅲ相，并能夠促進食欲，增加攝食量[11]。生長抑素作為重要的抑制性調節激素，能夠抑制胃泌素、胃動素、縮膽囊素、促胰液素等激素的釋放，還能使胰腺、胃、小腸和膽囊的分泌大大減少，使酶活性降低，保護胰腺細胞。血管活性腸肽既是一種胃腸激素，又是一種存在于中樞神經和腸神經系統中的抑制性非腎上腺素非膽堿能(NANC)神經遞質，能夠抑制胃酸和胃蛋白酶分泌進而抑制胃腸運動。毒性化療藥物引起胃腸道損傷，導致胃泌素、胃動素分泌減少，生長抑素、血管活性腸肽分泌增多，抑制胃腸道分泌及運動功能，出現惡心、嘔吐、腹脹、食欲減退等胃腸道不良反應[12]。

本實驗研究表明，補中益氣湯在抑制大鼠化療性消化道不良反應的同時，可以改善化療引起的胃腸激素分泌紊亂，由此說明補中益氣湯對于防治化療性胃腸道不良反應的作用機制與改善胃腸激素紊亂有關，可以緩解化療所引起的惡心、嘔吐、腹脹、食欲減退等不良癥狀。補中益氣湯作為中醫學經典用方，在防治胃腸道疾病中發揮著重要作用，將辨病與辨證相結合，能夠有效改善胃腸蠕動，減輕化療后副作用。本實驗研究結果為化療性胃腸道不良反應的遣方施治提供了強有力的依據。