G試驗對艾滋病患者合并真菌感染的診斷價值

曾江，彭海英，賴小菊

（贛州市第五人民醫院，江西 贛州341000）

艾滋病（AIDS）是人體感染人類免疫缺陷病毒（HIV）后導致機體免疫力低下所引起的一種傳染性疾病，隨著現代生活方式的改變，艾滋病感染者逐年增多[1]。HIV病毒感染人體后，破壞機體的免疫系統，導致患者抵抗力降低，極易發生各種機會性感染，而真菌感染是較為常見的感染，由于其臨床癥狀不明顯、影像學表現不典型，直接涂片鏡檢檢出率低以及培養時間長等影響早期診斷，從而影響治療，病死率及致殘率較高[2,3]，因此，早期特異性的診斷對于改善預后意義重大。目前國內外很多研究認為，G試驗對于真菌感染的快速診斷有較大的應用價值,本研究旨在探討G試驗對HIV患者合并真菌感染的臨床診斷價值,為真菌感染的早期診斷提供依據。

1 資料與方法

1.1 研究對象 回顧性研究2017年1月至2017年12月在贛州市第五人民醫院住院疑似合并真菌感染的HIV患者31例。入組標準：⑴由贛州市疾病與預防控制中心檢測確診,并符合2011年版中華醫學會感染病學分會艾滋病學組頒布的 《艾滋病診療指南》[4]。⑵臨床資料完整，且意識清楚，能與人正常交流者。所有患者中，男性19例，女性12例，年齡跨度為20~55歲。本研究所使用的病例經醫院醫學倫理委員會審核批準并取得所有患者知情同意并簽署同意書。

1.2 方法

1.2.1 真菌培養 收集患者的纖支鏡灌洗液進行真菌培養。患者纖支鏡灌洗液標本收集后接種于細菌培養瓶,常規培養出真菌后轉種至沙保羅培養基進行培養，觀察細菌形態，并在高倍顯微鏡下進行鑒定。

1.2.2 （1,3）-β-D葡聚糖的檢測 采集患者的靜脈血和纖支鏡灌洗液進行G試驗檢查，應用丹娜（天津）生物科技有限公司生產的試劑。⑴血標本和灌洗液離心后取上清液作為樣品待用；⑵向微孔板標準品對應孔中加入60μl標準品a~e溶液制成標準曲線；⑶向微孔板樣品孔中加入20μl樣品和40μl處理液，震動混勻后 37°C 孵育 10min；⑷向加有標準品和樣品的微孔板中加入100μl反應主劑溶液，微孔板震動5~10s后在37°C下，波長405nm下進行檢測40min，反應結束后得出吸光度變化的平均速率；根據標準曲線計算樣品中的的（1,3）-β-D葡聚糖含量。以（1,3）-β-D葡聚糖濃度＞95pg/ml判定為G試驗陽性。

1.3 統計學分析 檢驗結果用SPSS17.0分析系統軟件進行統計學分析處理,以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

對31例疑似合并真菌感染的HIV患者進行灌洗液真菌培養、血G試驗檢查以及灌洗液G試驗檢查，見表1：真菌培養陽性例數為15例，陽性率為48.4%，其中馬爾尼菲青霉菌10例，念珠菌2例，新型隱球菌3例。血G試驗陽性例數為21例，陽性率為67.7%，灌洗液G試驗陽性例數為23例，陽性率為74.2%。經統計學分析，血G試驗陽性率高于真菌培養陽性率，差異無統計學意義（P=0.123），灌洗液G試驗陽性率高于真菌培養陽性率，差異有統計學意義（P=0.037），兩種G試驗方法相比較，灌洗液G試驗的陽性率高于血G試驗，差異無統計學意義（P=0.576）。

表1 真菌培養與G實驗陽性率比較

3 討論

艾滋病是嚴重危害人民群眾健康的公共衛生問題，我國AIDS疫情嚴峻，流行范圍較廣，且越來越年輕化，已經嚴重影響到國家的經濟發展和社會穩定[5]。艾滋病病毒感染人體后，大量破壞CD4+T淋巴細胞，導致機體免疫力低下，從而使人體因喪失對各種疾病的抵抗能力而發病[1]。由于艾滋病患者免疫力低下，極易合并病毒、細菌、真菌等多種病原菌感染，且通常伴有二重或多重感染，因此艾滋病合并真菌感染患者臨床癥狀多表現為非特異性，易被誤診或漏診[6]。臨床上常用的真菌感染的確診方法有賴于真菌培養，該方法不僅能明確病原菌，還能做相應的藥敏檢測。雖然其診斷準確，因其耗時長，無法在感染早期做出診斷，從而延誤治療。因此，找出一種快速，靈敏及特異的真菌感染的檢查方法尤為重要。

G試驗檢測是真菌細胞壁的多糖成分 （1,3）-β-D葡聚糖，作為真菌抗原成分具有較高特異性的（1,3）-β-D葡聚糖，廣泛存在于除隱球菌和接合菌（毛霉菌）以外的所有真菌細胞壁中。當巨噬細胞吞噬或消化侵入人體組織或血液中的真菌后，（1,3）-β-D葡聚糖就能持續釋放進入血液或其他體液，極易被檢測出來[7,8]。而在淺部真菌感染中，（1,3）-β-D葡聚糖不被釋放,其血液濃度也不高，因此臨床將血液或其他體液中檢測到的 （1,3）-β-D葡聚糖作為深部真菌感染的標志[9,10]。本研究結果顯示,血G試驗和灌洗液G試驗的陽性率都高于真菌培養的陽性率,表明G試驗的敏感性高于真菌培養，而灌洗液G試驗的陽性率高于血G試驗。可能由于本研究實驗數據較少,血G試驗與真菌培養之間以及兩種G試驗方法之間的差異無統計學意義。

真菌培養是真菌鑒定的金標準，但真菌培養也存在假陰性。同樣，G試驗也存在一定的假陰性，本研究中有1例真菌培養陽性的患者血G試驗和灌洗液G試驗都陰性,可能是因為這類真菌數量較少，經巨噬細胞吞噬、消化后，（1,3）-β-D 葡聚糖從細胞壁釋放太少有關[9,11]。當然，G試驗也會出現假陽性,分析原因包括：靜脈輸注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品；接受香菇多糖和以真菌為原料制成的抗菌藥物；鏈球菌血癥；血液透析者1周內進食真菌類食物等，都會造成（1,3）-β-D葡聚糖的假陽性[12,13]，因此，檢測時要排除這些干擾。

綜上所述,真菌培養法雖然為真菌感染診斷的金標準，但因其培養時間長，培養陽性率低，不能區分定植菌、感染菌和污染菌，且感染初期不容易取得陽性培養結果[14,15]，因此影響了艾滋病合并真菌感染的早期診斷。而G試驗作為一種輔助診斷方法，有較高的敏感性,主要是檢測時間短，彌補了傳統培養方法的不足,為艾滋病合并真菌感染的早期診斷和早期治療提供了條件,改善患者預后。