光周期對龍眼胚性愈傷組織類黃酮類胡蘿卜素含量及合成相關(guān)基因的表達(dá)影響

朱寧，焦楠，張舒婷，李曉斐，賴鐘雄

（福建農(nóng)林大學(xué)園藝植物生物工程研究所，福建福州350002）

龍眼（Dimocarpus longanLour）是無患子科龍眼屬的木本植物，別名桂圓、益智，其種植面積在我國水果大類中排名第六[1]。龍眼果肉營養(yǎng)價值高，而且具有豐富的藥用價值，龍眼中所含豐富的次生代謝產(chǎn)物具有豐富的功能。目前我國對龍眼胚性愈傷組織生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物的報道還很少，所以了解龍眼胚性愈傷組織的次生代謝工程和代謝調(diào)控非常有意義，該試驗研究了不同光周期對龍眼胚性愈傷組織類黃酮和類胡蘿卜素積累的影響，對細(xì)胞保護(hù)酶活性的影響以及對相關(guān)合成基因表達(dá)的影響，旨在為研究光周期對龍眼胚性愈傷組織生產(chǎn)類黃酮和類胡蘿卜素提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

賴鐘雄1994 年誘導(dǎo)并由福建農(nóng)林大學(xué)園藝植物生物工程研究所長期繼代保存的龍眼松散型胚性愈傷組織（‘紅核子’品種LC2 細(xì)胞系）[2-4]。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)條件。選擇在AgNO3培養(yǎng)基上生長狀況良好并相同的松散型龍眼胚性愈傷組織接種到2，4-D培養(yǎng)基上，分別在全光照24 h/0 h L/D、長光照18 h/6 h L/D、半光照12 h/12 h L/D、短光照6 h/18 h L/D、全黑暗0 h/24 h L/D 5 種光周期下（25±2）℃處理20 d，其培養(yǎng)條件為：光照培養(yǎng)箱白光，光強(qiáng)為36 μmol/m2·s。

1.2.2 提取與檢測方法。將不同光周期處理的龍眼胚性愈傷組織分別于50℃烘箱中烘干至恒重，研缽研磨成粉末狀，過40 目篩，于-20℃保存?zhèn)溆谩ｎ慄S酮采用超聲波—乙醇提取的方法，參考董慧雪[5]的方法，并根據(jù)實際情況適當(dāng)加以改動。類胡蘿卜素采用酸熱法提取，參照張志軍[6]的測定方法，并根據(jù)崔彤彤[7]優(yōu)化后的結(jié)果稍作改動進(jìn)行提取測定。……