高危型HPV在前列腺腺癌中的表達(dá)及臨床意義

何堯林 謝海輝 何娟

[摘要] 目的 探討高危型HPV在前列腺腺癌組織中的表達(dá)情況。 方法 選取50例前列腺腺癌組織標(biāo)本（Pca組）和52例前列腺增生組織（BPH組），通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）結(jié)合反向點(diǎn)雜交（RDB）技術(shù)檢測17種高危型HPV（16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、68、73、83、MM4）的表達(dá)情況。 結(jié)果 50例前列腺癌患者中17例患者存在高危型HPV陽性表達(dá)，52例前列腺增生患者中4例存在高危型HPV陽性表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.29，P=0.001）。HPV16的陽性表達(dá)率最高，前列腺癌組陽性表達(dá)11例（22.0%），前列腺增生組中陽性表達(dá)3例（5.7%），兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=5.671，P=0.017）;HPV18陽性表達(dá)率次之，前列腺癌組陽性表達(dá)9例（18.0%），前列腺增生組中陽性表達(dá)2例（3.8%），兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=5.307，P=0.021）。 結(jié)論 高危型HPV在前列腺腺癌和前列腺增生組織中的表達(dá)具有一定的差異，一定程度上提示高危型HPV感染與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展可能存在一定的關(guān)系。

[關(guān)鍵詞] 高危型HPV;前列腺腺癌;前列腺增生;聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng);反向點(diǎn)雜交

[中圖分類號] R737.25? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2019）26-0076-03

[Abstract] Objective To investigate the expression of high-risk HPV in prostate adenocarcinoma. Methods A total of 50 specimens of prostate adenocarcinoma（Pca group） and 52 specimens of benign prostatic hyperplasia（BPH group） were selected. Polymerase chain reaction （PCR） combined with reverse dot blot （RDB） technique was used to detect the expressions of 17 high-risk HPVs（16， 18， 31， 33， 35， 39， 45， 51， 52， 53， 56， 58， 59， 68， 73， 83， MM4）. Results Among the 50 patients with prostate cancer， 17 patients had high-risk HPV positive expression， and 4 cases of 52 patients with benign prostatic hyperplasia had high-risk HPV positive expression， and the difference was statistically significant （χ2=10.29， P=0.001）. The positive expression rate of HPV16 was the highest， with 11 cases（22.0%） of positive expression in prostate cancer group and 3 cases（5.7%） of positive expression in prostatic hyperplasia group. There was significant difference between the two groups （χ2=5.671， P=0.017）. The positive expression rate of HPV18 followed， with 9 cases（18.0%） of positive expression in prostate cancer group and 2 cases（3.8%） of positive expression in prostatic hyperplasia group. There was significant difference between the two groups（χ2=5.307， P=0.021）. Conclusion The expression of high-risk HPV in prostate adenocarcinoma and benign prostatic hyperplasia has certain differences. To some extent， there may be a certain relationship between high-risk HPV infection and the development of prostate cancer.

[Key words] High-risk HPV; Prostate adenocarcinoma; Benign prostatic hyperplasia; Polymerase chain reaction; Reverse dot hybridization

前列腺癌為老年男性泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率逐年增加[1-2]。前列腺癌與宮頸癌具有一定的相似性，均與患者的性開放行為相關(guān)，因此，人乳頭瘤病毒（human papillomaviruses，HPV）感染是否與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展也存在相關(guān)性。目前部分國外文獻(xiàn)已報(bào)道高危型HPV感染與前列腺癌存在一定的相關(guān)性[3-5]，但就二者的相關(guān)性而言，存在一定的爭議。在國內(nèi)，有關(guān)這方面的文獻(xiàn)報(bào)道較少。既往研究結(jié)果[6]表明高危型HPV16/18在前列腺癌及前列腺增生中表達(dá)具有差異性，且與前列腺癌中Gleason評分、臨床T分期、危險(xiǎn)因素等級等臨床病理參數(shù)相關(guān)。本研究應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）結(jié)合反向點(diǎn)雜交（RDB）技術(shù)在50例前列腺腺癌組織和52例前列腺增生組織中進(jìn)一步檢測17種高危型HPV（16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、68、73、83、MM4）的表達(dá)情況，旨在探討高危HPV感染與前列腺癌發(fā)生的相關(guān)性，其聯(lián)合PSA檢測可提高前列腺癌高風(fēng)險(xiǎn)人群的早期篩查效果，為今后臨床上對前列腺癌的診療、預(yù)后評估提供幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料

50例前列腺癌標(biāo)本（Pca組）和52例前列腺增生標(biāo)本（BPH組）取自2013年12月～2016年12月在南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院和廣西醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院行前列腺穿刺或手術(shù)切除的標(biāo)本（其中前者收集18例前列腺癌標(biāo)本，后者收集32例前列腺癌標(biāo)本，52例前列腺增生標(biāo)本均來自廣西醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院），術(shù)前未接受手術(shù)去勢、藥物去勢或放化療治療。標(biāo)本均經(jīng)所在醫(yī)院2位高年資副主任病理醫(yī)師診斷。

1.2 方法

PCR結(jié)合反向點(diǎn)雜交分析試劑為亞能生物技術(shù)（深圳）有限公司產(chǎn)品。檢測原理：采用PCR體外擴(kuò)增和DNA反向點(diǎn)雜交相結(jié)合的DNA芯片技術(shù)，利用HPV基因特點(diǎn)設(shè)計(jì)特異引物，擴(kuò)增出17種高危HPV亞型，再將擴(kuò)增產(chǎn)物與固定在膜條上的17種高危分型探針進(jìn)行雜交，判斷是否有這些亞型的HPV感染，具體步驟按說明書進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判讀

根據(jù)膜條上藍(lán)色斑點(diǎn)出現(xiàn)的相應(yīng)位置即可判斷HPV的亞型為陽性，反之為陰性[7]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，患者一般情況及測定結(jié)果等計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1患者一般情況

前列腺癌組和前列腺增生組患者入組時(shí)年齡分別為（67.90±6.91）歲、（69.21±5.52）歲;體重指數(shù)（kg/m2）分別為（23.81±3.27）kg/m2、（24.00±3.09）kg/m2;前列腺大小分別為（56.58±13.72）mL、（57.38±15.13）mL;PSA分別為：（35.64±10.47）μg/mL、（34.25±10.58）μg/mL;兩組間比較，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

2.2 檢測結(jié)果

50例前列腺癌患者中17例患者存在高危型HPV陽性表達(dá)，52例前列腺增生患者中4例存在高危型HPV陽性表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.29，P=0.001）。HPV16的陽性表達(dá)率最高，前列腺癌組陽性表達(dá)11例（22.0%），前列腺增生組中陽性表達(dá)3例（5.8%），兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=5.671，P=0.017）;HPV18陽性表達(dá)率次之，前列腺癌組陽性表達(dá)9例（18.0%），前列腺增生組中陽性表達(dá)2例（3.8%），兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=5.307，P=0.021），見表1。兩組患者中均存在多重陽性表達(dá)的情況，前列腺癌組HPV16陽性患者中，僅1例患者未合并其他分型表達(dá)陽性，前列腺增生組HPV16陽性患者中，也僅1例未合并其他分型表達(dá)陽性。

3 討論

前列腺癌是老年男性的常見惡性腫瘤，其早期癥狀與良性前列腺增生癥相似，癥狀不明顯，發(fā)現(xiàn)時(shí)往往已是晚期，影響疾病治療和預(yù)后。作為前列腺癌的篩查指標(biāo)血清PSA是組織特異性抗原而非癌特異性抗原，直腸指診、留置尿管等檢查可引起PSA水平升高，具有一定的局限性。腫瘤是一種多基因參與的疾病，單個(gè)標(biāo)志物的檢測具有一定的局限性，多種生物標(biāo)志物的聯(lián)合檢測將可提高前列腺癌診斷的特異性和敏感性。

人類乳頭狀瘤病毒（HPV）為小環(huán)狀雙鏈DNA 病毒，直徑45～55 nm，表面密布?xì)の⒘?，無包膜的核衣殼結(jié)構(gòu)，88%是病毒蛋白（包括L1主要衣殼蛋白），內(nèi)為DNA。HPV具有嗜人上皮細(xì)胞的特性，穩(wěn)定性好，即便在沒有宿主的寒冷的條件下也能獨(dú)立存活數(shù)個(gè)月。根據(jù)不同的HPV亞型致癌率和致癌性不同，HPV可分為高危型和低危型。

HPV主要通過性生活接觸傳播，目前認(rèn)為，高危型HPV與疾病的相關(guān)性較大，HPV主要是通過破損的皮膚黏膜進(jìn)入人體，感染皮膚或黏膜細(xì)胞，進(jìn)行大量的病毒復(fù)制并組裝成熟、釋放。致癌機(jī)制主要是HPV病毒侵入皮膚后持續(xù)感染，HPV DNA基因整合到宿主細(xì)胞E2 基因的斷裂缺失，使致癌基因E6和E7大量表達(dá)，抑制抑癌基因p53和Rb的表達(dá)，發(fā)生細(xì)胞周期的調(diào)控紊亂，從而癌變發(fā)生[8-10]。

隨著對HPV研究的越來越深入，研究表明高危型HPV感染，尤其是高危亞型HPV感染在前列腺癌的發(fā)病機(jī)制中可能扮演著重要角色[11]。早期研究中，McNicol PJ等[12]應(yīng)用PCR方法檢測前列腺癌組織和良性前列腺增生組織中的HPV檢出率，結(jié)果顯示：相對于對照組，高危型HPV在前列腺癌組織中具有較高陽性率。日本學(xué)者Anwar K等[13]通過檢測高危HPV 16/18在68例前列腺癌組織標(biāo)本中的陽性表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HPV感染與前列腺癌的臨床危險(xiǎn)度分期、病理Gleason評分具有一定的聯(lián)系，提示高危型HPV與前列腺癌的疾病進(jìn)展具有相關(guān)性。近年來，Pascale M等[3]通過免疫組化和PCR檢查對150例前列腺癌標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)150例前列腺癌標(biāo)本中112例標(biāo)本HPV E7蛋白陽性，陽性率（74.67%），其表達(dá)與前列腺癌Gleason評分、臨床分期、危險(xiǎn)因素等級有一定的聯(lián)系，此后部分學(xué)者的研究結(jié)果與其一致[14，15]，提示高危型HPV感染與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。

部分學(xué)者的研究結(jié)果持有相反的觀點(diǎn)，認(rèn)為HPV與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展沒有相關(guān)性[16，17]。伊朗學(xué)者Aghakhani A等[17]運(yùn)用 MY09/MY11 和 GP5（+）/GP6（+）HPV引物，對104例前列腺癌和104例前列腺增生組織標(biāo)本進(jìn)行基因測序，結(jié)果發(fā)現(xiàn)13例前列腺癌組織（13/104，12.5%）和8例前列腺增生組織標(biāo)本（8/104， 7.7%）中HPVDNA表達(dá)陽性，其中13例前列腺癌組織中高危型HPV 10例，低危HPV 3例，8例前列腺增生組織標(biāo)本中高危型HPV 5例，低危HPV 3例，前列腺癌和前列腺增生組織標(biāo)本的HPV表達(dá)無差異，HPV感染與前列腺癌沒有相關(guān)性。目前研究結(jié)果的不一致性，原因可能與性開放程度和區(qū)域種族基因易感性的差異，另外可能與納入研究對象的標(biāo)本量和研究采用的實(shí)驗(yàn)檢測方法不同有關(guān)。

目前，國內(nèi)有關(guān)HPV感染與前列腺腺癌的相關(guān)性報(bào)道較少，國外的研究報(bào)道也大多集中在HPV16、HPV18兩個(gè)亞型中。本課題組通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）結(jié)合反向點(diǎn)雜交（RDB）技術(shù)檢測17種高危型HPV在前列腺癌和前列腺增生中的表達(dá)情況，50例前列腺癌患者中17例患者存在高危型HPV陽性表達(dá)，52例前列腺增生患者中4例存在高危型HPV陽性表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示前列腺癌的發(fā)生發(fā)展可能與高危型HPV有一定關(guān)系。前列腺癌中高危型HPV陽性表達(dá)率從高到低分別是HPV16、HPV18、HPV58、HPV33、HPV31、HPV35、HPV45。52例前列腺增生標(biāo)本中的高危型HPV陽性表達(dá)的情況分別為：HPV16（3例，5.8%），HPV18（2例，3.8%），HPV33（1例，1.9%），兩組均是HPV16、HPV18表達(dá)最高，且組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），結(jié)果提示各亞型中可能HPV16、HPV18與前列腺發(fā)病關(guān)系最密切，與國內(nèi)外研究結(jié)果類似[6，13]。

綜上所述，高危型HPV在前列腺腺癌和前列腺增生組織中的表達(dá)具有一定的差異，一定程度上提示高危型HPV參與前列腺腺癌的發(fā)生和發(fā)展，但具體機(jī)制目前尚無定論，受條件所限，本研究納入的樣本例數(shù)偏少，下一步，應(yīng)加大樣本量，且對血清、尿液等其他種類標(biāo)本進(jìn)行相關(guān)檢測，進(jìn)一步研究HPV與前列腺癌的相關(guān)性。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Wang GM，Chen W. Progress and development trend of treatment for urological tumor[J]. Cancer Research on Prevention and Treatment，2014，41（2）：97-99.

[2] Qi D，Wu C，Liu F，et al. Trends of prostate cancer incidence and mortality in Shanghai，China from 1973 to 2009[J]. Prostate，2015，75（14）：1662-1668.

[3] Pascale M，Pracella D，Barbazza R，et al. Is human papillomavirus associated with prostate cancer survival[J]. Dis Markers，2013，35（6）：607-613.

[4] Hrbacek J，Urban M，Hamsikova E，et al. Serum antibodies against genitourinary infectious agents in prostate cancer and benign prostate hyperplasia patients：A casecontrol study[J]. BMC Cancer，2011，11： 53-55.

[5] Ehsan G，Seyed HR，Monavari G，et al. Evaluation of human papillomavirus infections in prostatic disease：A cross-sectional study in iran[J]. Asian Pacific J Cancer Prev，2013，14（5）：3305-3308.

[6] 黃林，吳明貴，何娟，等.高危型人 HPV 16 /18 感染與前列腺癌的相關(guān)性研究[J].中華男科學(xué)雜志，2016，22（6）：501-505.

[7] 李芳，李金，白淘，等. 尿路及宮頸上皮病變中人乳頭瘤病毒型別分布及相關(guān)關(guān)系比較[J]. 山西醫(yī)藥雜志，2014，（1）：27-28.

[8] Stanley M.Immune responses to human papillomavirus[J]. Vaccine，2006，24（Suppl 1）：S16-S22.

[9] Pizzol D，Putoto G，Chhaganial KD.Human papillomavirus （HPV） infection：A Mozambique overview[J]. Virusdisease，2016，27（2）：116-122.

[10] Kajitani N，Satsuka A，Kawate A，et al. Productive life cycle of human papillomaviruses that depends upon squamous epithelial differentiation[J]. Front Microbiol，2012，3：152-164.

[11] Singh N，Hussain S，Kakkar N，et al. Implication of high risk human papillomavirus HR-HPV infection in prostate cancer in Indian population-a pioneering case-control analysis[J]. Sci Rep，2015，5（2）：77-78.

[12] McNicol PJ，Dodd JG. Detection of human papillomavirus DNA in prostate gland tissue by using the polymerase chain reaction amplification assay[J]. J Clin Microbiol，1990， 28（3）：409-412.

[13] Anwar K，Nakakuki K，Shiraishi T，et al. Presence of ras oncogene mutations and human papillomavirus DNA in human prostate carcinomas[J]. Cancer Research，1992，52（21）：5991-5996.

[14] Hrbacek J，Urban M，Hamsikova E，et al. Serum antibodies against genitourinary infectious agents in prostate cancer and benign prostate hyperplasia patients：A casecontrol study[J]. BMC Cancer，2011，11，53-55.

[15] Ehsan G，Seyed HR，Monavari G，et al. Evaluation of human papillomavirus infections in prostatic disease：A cross-sectional study in iran[J]. Asian Pacific J Cancer Prev，2013，14（5）：3305-3308.

[16] Araujo NA，F(xiàn)erreira FH，Amaral CM，et al. Lack of detection of human papillomavirus DNA in prostate carcinomas in patients from northeastern Brazil[J]. Genet Mol Biol，2016，39（1）：24-29.

[17] Aghakhani A，Hamkar R，Parvin M，et al. The role of human papillomavirus infection in prostate carcinoma[J]. Scand J Infect Dis，2011，43（1）：64-69.

（收稿日期：2019-05-27）