UPLC測定健脾益肺口服液中白術內酯Ⅰ和白術內酯Ⅲ的含量

王丹丹

摘要：目的 ?使用UPLC測定健脾益肺口服液中白術內酯Ⅰ、白術內酯Ⅲ的含量。方法 ?采用Waters H-class 超高效液相色譜儀測定白術內酯Ⅰ、白術內酯Ⅲ的含量，色譜柱：Waters BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm），柱溫：30℃，進樣量：2 μl，檢測波長：220 nm，流動相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脫，流速：0.2 ml/min。結果 ?白術內酯Ⅰ線性方程為y=0.0528x+0.0241（r=0.9998），線性范圍2～160 μg/ml;白術內酯Ⅲ的線性方程為y=0.0786x（r=0.9998），線性范圍3～140 μg/ml;白術內酯Ⅰ及白術內酯Ⅲ的精密度、重復性、穩定性、加樣回收率均符合要求。結論 ?初步建立了健脾益肺口服液中白術內酯Ⅰ、白術內酯Ⅲ含量測定的高效、迅速的檢測方法，為下一步質量標準的提高奠定基礎。

關鍵詞：UPLC;白術內酯Ⅰ;白術內酯Ⅲ

中圖分類號：R284.1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.21.053

文章編號：1006-1959（2019）21-0159-03

Abstract：Objective ?To determine the content of atractylenolide I and atractylenolide III in Jianpi Yifei Oral Liquid by UPLC. Methods ?The contents of atractylenolide I and atractylenolide III were determined by Waters H-class ultra performance liquid chromatography. Column： Waters BEH C18 （50 mm × 2.1 mm， 1.7 μm）， column temperature： 30°C， injection Amount： 2 μl， detection wavelength： 220 nm， mobile phase： acetonitrile （A）-water （B）， gradient elution， flow rate： 0.2 ml/min. Results ?The linear equation of atractylenolide I was y=0.0528x+0.0241 （r=0.9998）， the linear range was 2～160 μg/ml; the linear equation of atractyl lactone III was y=0.0786x （r=0.9998）， linear range 3 ～140 μg/ml; the precision， repeatability， stability and recovery rate of atractylenolide I and atractylenolide III meet the requirements. Conclusion ?The high-efficiency and rapid detection method for the determination of atractylenolide I and atractylenolide III in Jianpi Yifei Oral Liquid was established， which laid a foundation for the improvement of quality standards.

Key words：UPLC;Atractylenolide I;Atractylenolide III

健脾益肺口服液為我院的自制院內制劑，主要功效為益氣，固表，止汗，健脾益肺。臨床上用于表虛不固，咳喘，自汗惡風，脾虛便溏，或體虛易感風邪者;癥見小兒哮喘、體質虛弱易感者，脾肺氣虛證表現為慢性阻塞性肺病。組方主要藥物包括有黃芪、黨參、白術、山藥、防風、扁豆、雞內金等。白術在方中是主要組成藥物之一，是為臣藥，來源于菊科植物白術的干燥根莖[1]，是浙江的道地藥材，使用歷史悠久，全國均有栽培。目前在用的炮制品主要有土炒白術和麩炒白術，具有健脾益氣、燥濕利水的作用，健脾益肺口服液中選用麩炒白術，取白術經麥麩炮制之后更能增強白術的健脾作用，同時對君藥能起到協同增效的作用，并增強黃芪、黨參補脾肺之氣的作用。現代研究發現，白術中多含揮發油，其主要化學成分為白術內酯類成分、多糖、苷類等[2]，但其性質在常溫下并不穩定，因此選擇測定性質相對穩定且含量較高白術內酯類成分作為白術的指標性檢測成分[3]。本文主要使用UPLC測定健脾益肺口服液中白術內酯Ⅰ、白術內酯Ⅲ的含量，現報道如下。

1資料與方法

1.1儀器 ?Waters H-class超高效液相色譜儀;水蒸氣蒸餾裝置（自制）;高速萬能粉碎機（常州毅康藥化設備有限公司）;超純水系統（edi，北京豐裕華環環?？萍加邢薰荆?。

1.2藥品 ?白術內酯Ⅰ（青島捷士康生物科技有限公司，批號：185266，純度>98%），白術內酯Ⅲ（青島捷士康生物科技有限公司，批號：173652，純度>98%）;乙腈、甲醇（TEDIA色譜純）;健脾益肺口服液（本院自制，批號：20180712;20181103;20190320），本品為棕褐色澄明的液體，味微苦、澀。相對密度、pH值、裝量差異均符合《中華人民共和國藥典》2015年版的規定。

1.3色譜條件 ?色譜柱：Waters BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm），柱溫：30℃，進樣量：2 μl;檢測波長：220 nm，流動相：（A）-水（B），梯度洗脫：0～2.5 min，40%B～20%B;2.5～4min，20%B～15%B;4～8 min，15%B～10%B;8～14 min，0%B，流速：0.2 ml/min，見圖1。

1.4混合對照品溶液制備 ?精密稱定對照品適量，制成1 m分別含白術內酯Ⅰ、白術內酯Ⅲ 0.113 mg、0.162 mg的混合溶液，用微孔濾膜濾過，取續濾液，搖勻放入冰箱中冷藏備用。

1.5供試品溶液制備 ?取不同3個批次健脾益肺口服液生產中采用超臨界萃取中得到揮發油25 mg，分別加入25 ml容量瓶中，各加甲醇定容為1 mg/ml的溶液，避光保存，按批號編號放入冰箱中冷藏備用。

2結果

2.1線性關系考察 ?按4項下有關方法制備，并按色譜條件分析，并記錄有關色譜峰面積，進行線性回歸。白術內酯Ⅰ線性方程為y=0.0528x+0.0241（r=0.9998），線性范圍2～160 μg/ml;白術內酯Ⅲ的線性方程為y=0.0786x（r=0.9998），線性范圍3～140 μg/ml，表明兩者在線性范圍內線性關系良好。

2.2精密度考察 ?選取同一批次供試品（批號：20181103），按5項下有關方法制備溶液，并按色譜分析條件連續進樣6次，同時記錄下色譜圖，并以2號色譜峰作為參照峰，計算各主要色譜峰相對峰面積和相對保留時間的RSD值均<2.3%，則表明該試驗方法精密度較好，符合相關實驗要求。

2.3重復性考察 ?選取同一批次供試品（批號：20181103），按5項下有關方法同時制備了6份供試品溶液備用，并按色譜分析的條件按順序進樣檢測，同時記錄下色譜圖，并以2號色譜峰為參照峰，計算各主要色譜峰相對峰面積和相對保留時間的RSD值均<2.1%，則表明該方法重現性較好，符合相關實驗要求。

2.4穩定性考察 ?選取同一批次供試品（批號：20181103），按5項下方法制備出供試品溶液，并按色譜分析條件分別于0、2、4、8、12、18、24 h進樣檢測，同時記錄下色譜圖，以2號色譜峰為參照峰，計算各主要色譜峰相對峰面積和相對保留時間的RSD均<2.1%，則表明該批次供試品溶液中各種成分在24 h內穩定，符合相關實驗要求。

2.5加樣回收率考察 ?選取同一批次供試品（批號：20181103），置于25 ml錐形瓶中，加入白術內酯Ⅰ、白術內酯Ⅲ的對照品各適量，按5項下方法制備樣品，并注入色譜儀，按項下色譜分析條件按順序檢測，計算加樣回收率，計算結果顯示平均加樣回收率均在101.23%～101.54%，RSD<4%，表明此方法可行，能用于健脾益肺口服液中白術內酯Ⅰ、白術內酯Ⅲ的含量測定，見表1。

2.6含量測定結果 ?取3個批次的健脾益肺口服液，按方法和色譜測定含量，結果見表2。

3討論

自古以來，中藥在我國種植歷史悠久，資源豐富，物種多樣，并且使用了上千年，在實踐中發現其毒副作用小，還可以增強和調節人體的免疫功能。特別是中國傳統的中醫藥理論的指導下的中藥，一直作為篩選開發新藥的重要來源，扮演著特別重要的角色。白術作為中藥處方中常用藥物，具有減慢小腸細胞的蠕動、抗衰老、抗病毒、抗炎鎮痛、利尿、調節免疫功能、明顯抑制腫瘤細胞增殖、對老化小鼠的認識能力有明顯提高等多種藥理作用[4-7]，臨床上應用廣泛。

本文通過對健脾益肺口服液中白術內酯Ⅰ、白術內酯Ⅲ含量測定方法的建立，可以作為方中白術藥材的質控指標，同時采用UPLC的方法，采用乙腈-水梯度洗脫的方法，檢測波長220 nm，白術內酯Ⅰ線性方程為y=0.0528x+0.0241（r=0.9998），線性范圍2～160 μg/ml;白術內酯Ⅲ的線性方程為y=0.0786x（r=0.9998），線性范圍3～140 μg/ml，在線性范圍內線性關系良好，同時精密度、重復性、穩定性、加樣回收率均符合要求，說明該色譜條件穩定可靠、檢測時間迅速而且效率高，為揮發油類的檢測提供了新的思路和方法，為下一步醫院制劑的工藝提高提供一定的參考，同時也保證了臨床用藥安全有效。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中國藥典：一部[M].北京：中國醫藥科技出版社，2015：103.

[2]李瀅，楊秀偉.麩炒白術化學成分的研究[J].中國現代中藥，2018，20（9）：1074-1079.

[3]李堯，李偉，王琳，等.麩炒白術研究述要[J].山東中醫藥大學學報，2018，42（2）：182-185.

[4]周文慧.姚乃禮教授辨治脾虛證的診療思路及臨床經驗[D].北京中醫藥大學，2018.

[5]翁萍，王文凱，張曉婷.白術不同炮制品對脾虛小鼠胃腸功能的影響[J].江西中醫藥，2015，46（5）：30-32.

[6]張彩霞，江濱，張亞杰，等.國內外文獻對白術內酯Ⅱ抑制腫瘤細胞作用的濃度差異原因分析[J].中醫藥導報，2017，23（20）：30-32.

[7]周若夏，宋麗軍，施曉瑩，等.白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ體內外抗輪狀病毒作用研究[J].中草藥，2019，50（1）：104-110.

收稿日期：2019-7-27;修回日期：2019-8-5

編輯/錢洪飛